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超表达和干扰后通路检测不一致怎么办? 超表达和干扰蛋白A后，表型基因D有相互印证的变化，然后通过阅读文献发现A可以通过增加ERK1/2的磷酸化影响细胞增殖，我就检测了ERK1/2的磷酸化，结果干扰掉A基因后，磷酸化确实是下降的，但是超表达却没什么变化，超表达做了好多次，ERK1/2的磷酸化一直没有变化，我就是想证明A→pERK1/2→D这个简单的机制，却做不出超表达效果。现在这种情况该怎么办？是不是这个机制是不成立的？关于A基因的文献太少，能提供的线索很少，如果不是通过ERK1/2，那该怎么研究A作用到D的机制呢？有什么具体的实验方案，请大神指教一二，谢谢！查看更多 4个回答 . 10人已关注

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蛋白电泳漏液？跑了4年的蛋白电泳了，最近处现在浓缩胶，样品“漏下去”的现象，导致混样。更换配电泳的试剂，仍未解决。样品是大肠杆菌表达菌体。同时也发现10次有9次漏，也能碰上不漏的情况。查看更多 3个回答 . 13人已关注

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自身对照这种有关物质的检测限该怎么做? 现在做一个品种，杂质检查用的是自身对照法，总杂质的限度不能超过1%，请问各位，我在做质量研究的时候用做检测限吗？查看更多 4个回答 . 4人已关注

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酚羟基的吸收峰？酚羟基的红外吸收峰会在3000以下吗，我这个物质的结构是是这样的，打出来的红外是这样的，请问是对的吗？ TIM截图20190308103349.png TIM截图20190308103417.png查看更多 1个回答 . 6人已关注

#酚羟基

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反激线路做多路输出，如何做好输出电压交叉调整率? 反激线路做多路输出，如何做好输出电压交叉调整率？有那些方法来实现及优化输出电压交叉调整？查看更多 3个回答 . 10人已关注

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用酰氯合成酰胺反应后，点板发现没用新点，想请教一下为什么? 呋喃甲酰氯和丙氨酸甲酯反应，酰氯方法就是二氯亚砜作溶剂，75度回流做的，然后蒸除溶剂，直接投下一步。氨基酸甲酯，也是先做成氨基酸甲酯盐酸，然后二氯甲烷作溶剂，加三乙胺搅拌，冰浴下将酰氯缓慢滴加，反应过夜，点板，石油醚:乙酸乙酯=1：1，没有新点，最明显的点是呋喃甲酸的点，为什么啊？查看更多 3个回答 . 11人已关注

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大功率MOS管和IGBT的电流，电压指标是怎么测量的? 那种datasheet上标注工作电流（不是脉冲电流）上百A，电压上百V的大功率MOS管和IGBT，怎么测量这两个指标？真的给MOS管和IGBT加上那么大的持续电流？比如一个MOS管或IGBT的电流指标是150A，厂家测试的时候就是给信号让MOS管或IGBT持续开通，然后长时间加上一个150A的直流电流？那不得有个功率很大的电源和一个功率很大的负载才行？还得加散热片？测电压的时候就是管子关闭状态加上那么高的电压，不被击穿就OK？查看更多 3个回答 . 4人已关注

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研究方向？本人研一，老师是做膜的，最近在考虑方向问题，单但本人不知道选择什么方向，还请各位大神帮忙讨论讨论.现有两个方向，一个是做氧化石墨烯薄膜，一个是合成MOF，再制成膜，各位大佬能帮忙谈谈利弊吗？查看更多 1个回答 . 15人已关注

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CRISPR/Cas9技术原理与应用详解？最近几年基因编辑技术异常火爆，CRISPR/Cas9技术面世以后，弥补了传统基因编辑技术的诸多不足，使得基因的“任意编辑”变得越来越容易。也因此，CRISPR/Cas9技术当仁不让的成为基因编辑技术的“王牌”，大有一副取而代之的势头。所以这里就给大家简单介绍一下CRISPR/Cas9的技术原理！一、CRISPR/Cas9系统的构成 CRISPR(clustered,regularly interspaced,short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白即可，这为其能够广泛应用提供了便利条件。目前，来自Streptococcus pyogenes的CRISPR/Cas9系统应用最为广泛。 Cas9蛋白（含有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。研究人员为了将CRISPR/Cas9技术发展为高效的基因打靶工具，又进行了优化和改造。Cong, L.等人在不影响系统效率的情况下，将crRNA和tracrRNA融合为一条RNA。通过这种简化，CRISPR/Cas9系统现仅包括两个元素：Cas9蛋白和sgRNA（single guide RNA）。因此现在人们将CRISPR/Cas9技术也称为Cas9/sgRNA技术。二、CRISPR/Cas9技术的基因编辑机制 CRISPR/Cas9通过对预设的DNA位点进行切割，造成DNA双链断裂（DSB, double strand break）。这种DNA的损伤可以启动细胞内的修复机制，主要包括两种途径：一是低保真性的非同源末端连接途径（NHEJ，Non-homologous end joining），此修复机制非常容易发生错误，导致修复后发生碱基的缺失或插入（Indel），从而造成移码突变，最终达到基因敲除的目的。NHEJ是细胞内主要的DNA断裂损伤修复机制。利用靶向核酸酶可以在受精卵水平高效的实现移码突变，从而制备基因敲除模式动物。CRISPR/Cas9技术的出现，使得无需再使用相应物种的ES细胞系就可以制备基因敲除模式生物，且已成功应用于小鼠、大鼠、猪、灵长类、果蝇等等。第二种DNA断裂修复途径为同源介导的修复（HR, homology-directedrepair），这种基于同源重组的修复机制保真性高，但是发生概率低。在提供外源修复模板的情况下，靶向核酸酶对DNA的切割可以将同源重组发生的概率提高约1000倍。利用这种机制可以实现基因组的精确编辑，如：条件性基因敲除、基因敲进、基因替换、点突变等等。 CRISPR/Cas9技术以自己操作的便捷性，高效的基因编辑能力获得青睐，成为当下科研工作者的新宠儿。各大实验室纷纷加入开发CARISPR/Cas9技术的行列中，媒体也将之评为21世纪最有影响的十大技术之一。基因敲除动物模型一直以来是在活体动物上开展基因功能研究、寻找合适药物作用靶标的重要工具。但是传统的基因敲除方法需要通过复杂的打靶载体构建、ES细胞筛选、嵌合体小鼠选育等一系列步骤，不仅流程繁琐、对技术的要求很高，而且费用大，耗时较长，成功率受到多方面因素的限制。即使对于技术比较成熟的实验室，利用传统技术构建基因敲除大、小鼠一般也需要一年以上。 2013 年 1 月份，美国两个实验室在《Science》杂志发表了基于 CRISPR-Cas9 技术在细胞系中进行基因敲除的新方法，该技术与以往的技术不同，是利用靶点特异性的 RNA 将 Cas9 核酸酶带到基因组上的具体靶点，从而对特定基因位点进行切割导致突变。该技术迅速被运用到基因敲除小鼠和大鼠动物模型的构建之中。通过一系列研究，首先证明了通过 RNA 注射的方式将 CRISPR-Cas 系统导入小鼠受精卵比 DNA 注射能更有效的在胚胎中产生定点突变。在此基础上，又发现了该方法没有小鼠遗传品系的限制，能够对大片段的基因组 DNA 进行删除，也可以通过同时注射针对不同基因的 RNA 序列达到在同一只小鼠或大鼠中产生多个基因突变的效果。此外，还证明了利用 CRISPR-Cas 技术构建的基因敲除大鼠模型与传统方法构建的同一基因(肥胖相关 G 蛋白偶联受体 Mc4R)突变大鼠相比具有一致的表型。该方法构建的基因突变动物具有显著高于传统方法的生殖系转移能力，是一种可靠、高效、快速的构建敲除动物模型的新方法。 CRISPR-Cas 技术是继锌指核酸酶(ZFN)、ES 细胞打靶和 TALEN 等技术后可用于定点构建基因敲除大、小鼠动物的第四种方法，且有效率高、速度快、生殖系转移能力强及简单经济的特点，在动物模型构建的应用前景将非常广阔。 Cas 9蛋白应用原理图广州博徕斯生物科技股份有限公司（GUANGZHOU BIO-LIEESCI CO.,LTD）的基因编辑（cas系列）蛋白种类为国内最全的，欢迎各位老师垂询！我们将竭诚为您服务！服务热线：400-991-6632 网址：www.bio-lifesci.com 公司生产的试剂包括： 1.CRISPR基因编辑相关产品（cas9，dcas9，cas12a，cas13a，T7 rna 聚合酶， sg/crRNA设计合成与纯化服务，蛋白纯化服务） 2.CCK8细胞活力检测试剂盒； 3.细胞组分分离试剂盒； 4.5000余种关于细胞凋亡、细胞增殖的质粒库，包括普通质粒，带荧光标签质粒，腺病毒质粒，慢病毒质粒，HIS标签质粒等； 5.ELISA试剂盒； 6.胶原蛋白 7.一步法克隆试剂盒； 8. 链霉亲和素修饰磁珠 ……查看更多 1个回答 . 2人已关注

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关于原代内皮细胞的转染问题？刚开始做原代内皮细胞转染，阳性对照也没有变化，大多情况下都敲低不下来，不知道可能的原因是什么？我应该在哪些条件上摸索，想请教大家lip2000的量一般都加多少呢？查看更多 2个回答 . 5人已关注

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氰基水解不稳定？ a，这一步有一个2-9%不等的杂质，很难精制； b，反应回流时间延长杂质会变大； c，用20%的盐酸回流水解，反应很杂；无标题.gif查看更多 3个回答 . 5人已关注

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天津哪里能测tem? 求助，各位大神，天津哪里能测Tem，并且带eds和mapping的。谢谢查看更多 4个回答 . 10人已关注

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国内外自控阀门和进口自控阀门相差在哪里? 各位老师，我最近在学习自控阀门，请教几个问题。为什么进口的阀门价格会比国内阀门贵很多？同样的国内整合出来的阀门也是配的进口的执行器定位器价格也不是很高为什么比不上进口的阀门，到底和进口阀门差距在哪里？查看更多 4个回答 . 6人已关注

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用哪种检测方法合适? 请问各位化学分析专家，一小块夹杂物（尺寸大约φ2mm，高2mm），初步怀疑是Al合金的碎屑；但是常用的直读光谱仪没法检查如此小的样块；请问除了能谱仪外还有没有其他仪器来测量？ICP？还是什么其他，求推荐；查看更多 6个回答 . 7人已关注

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瑞舒伐他汀钙晶型及精制溶剂，阿托伐他汀钙合成？我们现在做阿托伐他汀钙，缩合这一步收率只有65%,后面成盐粗品收率90%,精制85%左右，相对别人的要低很多，不知各位大侠缩合这一步用什么溶剂体系，收率是多少（包括粗品和精制），成盐的粗品和精制收率又是多少？瑞舒伐他汀钙不知是什么晶型，原研上好像是Ａ晶型，我们做出来的粗品就像是膏状物一样，很难滤干，含水量特别多，导致烘干很困难，而精制后收率只有50%,也是很难烘干，不知大家精制时用的是什么体系？查看更多 3个回答 . 6人已关注

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怎样测定复方中黄芪甲苷的含量? 如何除去按照食品标准检测复方中含有的多糖来测定黄芪甲苷？查看更多 8个回答 . 19人已关注

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门冬氨酸鸟氨酸原料药的检测条件？ 哪位大侠做过门冬氨酸鸟氨酸的检测啊？请问检测条件是什么啊？用的是什么样的色谱柱？哪家的色谱柱比较好？查看更多 18个回答 . 8人已关注

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复方制剂中碳酸氢钠的检测？ 请问一下哪位高手，我们这边在研究一个依折麦布与阿托伐他汀钙的复方制剂，想检测其中的辅料碳酸氢钠的加入量？查看更多 5个回答 . 5人已关注

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筛酵母菌，筛出了白毛。？我想从变质的糖液里筛酿酒酵母，培养基加了氯霉素，结果平板培养四天长了白毛，我在长白毛之前我分离菌株两天出来是这样的，不懂有没有酵母。查看更多 1个回答 . 10人已关注

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厄他培南有做到公斤级的朋友么？我想买！？ 厄他培南有做到公斤级的朋友么？我想买！请给我留言！查看更多 4个回答 . 4人已关注

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简介

职业：上海顺琪国际贸易有限公司 - 设备工程师

学校：洛阳师范学院 - 历史文化学院

地区：上海市

个人简介：事业无穷年。查看更多

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