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给排水工程师

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生物医学工程

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细胞裂解做Western，贴壁细胞直接加裂解液，还是消化后加裂解液? 贴壁培养的细胞提取蛋白可以消化下来后提取，也可以不消化直接提取，但是所用的裂解液的配方是不同的！我用的是后面的方法，结果挺好的。具体操作如下：首先记住一点：所有操作均在冰上进行！1）吸弃培养液， PBS洗3次；2）加入cell lysis buffer，250ul/一小皿；3）置摇床上要15min，注意此时是连着冰盒一起摇的，速度不要太大，以免将液体晃出；4）刮刀刮下细胞，移入EP管中；5）超声破碎，两到三次，每次2到3秒，注意将EP管置于装有冰快的小烧杯中；6）4度，12000rpm，15min ，离心；7）吸取上清至新的EP管中；8）测量蛋白浓度；9）-20度保存，所用的cell lysis buffer 的配方：Tris-cl pH 7.5 10mM （终浓度，下同），NaCl 150mM，SDS 0.1%，Triton-100 1.0%，A protein 10ng/ml，Leupeptin 2ng/ml，PmSF 1mM，我是把PmSF直接加到cell lysis buffer 里的，不是临用前加的，结果没有问题。查看更多

#ester

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生物医学工程

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什么会出现组化结果与PCR、werstern结果相反? 1.一般来讲：组化和WB的结果应该是一致的，因为都是蛋白水平的检测，一个是切片的组织，而另一个是匀浆后的组织。但是，二者的结果也可以是不同的，比如可能的原因有 (1) 免疫组化的结果是假的。比如non-specific. 建议用另外一个抗体试试。还有找找文献中别人做的结果或推测。 (2)在WB试验中，材料的准备过程，你的蛋白被降解了。或者你的蛋白大么，转膜时间够长么？ (3)因为组织有很多其他细胞，是不是你的蛋白在其中某种细胞中表达比较低，而你的材料中含有这种细胞比较多。因为免疫组化可能放大了你的蛋白信号。纯化你要的细胞。 (4)如果在某个组织中，只有某一类型的细胞表达抗原，该类型细胞在该组织中又较少。这时虽然在单个的细胞内抗原表达量足够高，能通过免疫组化检测到，但有时上样量受限，western也无法检测了。查看更多

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生物医学工程

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细胞培养瓶上一般用什么包被？CD3?促进CIK细胞有丝分裂? 一般用抗CD3McAb、IL-1α包被，包被的作用是使细胞更好的贴壁生长，增加细胞的数量，并且可以使细胞充分诱导，扩增，这部挺重要，做好了，培养的免疫细胞也具有很大的免疫活性。查看更多

#细胞培养瓶

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生物医学工程

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反激电源有响声? 我以前碰到过瓷片电容材质问题导致有响声的，后换用D值更小的X7R材质的电容就没有问题了。查看更多

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生物医学工程

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TMSOI的纯度及有关物质分析方法是什么? DMSO，不妨用气象检测，碘化物实在用液相做不了可以考虑用滴定法控制含量。其他的没保留的物质，考虑用HILIC色谱柱做查看更多

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生物医学工程

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LD50测定（Bliss法）的数据分析？ 没有说必须全部死亡，预实验是找出Dm和Dn是为正式实验的分组用的，一般最高剂量动物的死亡率达到80%、最低剂量死亡率达到20%就可以了查看更多

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化学学科

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工艺技术

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正己醇脱水来合成正己烯的问题？反应完以后应该先加碱（碳酸钠或者碳酸钙）把你用的催化剂硫酸除去，然后在精制，试试看。你所说的反应物颜色不断变深直到黑色，应该使炭化了。查看更多

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生物医学工程

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为什么我从来没有检测到过支原体污染呢? 我用的试剂盒就检测到过啊，只不过很少。查看更多

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生物医学工程

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小鼠的肝脏（脂肪肝模型）储存后切片会碎掉或者出现空白间隙，是脂滴溢出了？还是我造模根本就没成? 片子上很多空洞，是组织内的水在低温下形成冰晶造成的。做冰冻片最好先脱水了再放低温查看更多

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化学学科

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新人求助高分子学科顶尖期刊？ 大分子，polymer 查看更多

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化学学科

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工艺技术

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NBS溴化反应中有没有别的毒性较小的溶剂可以替代? CHCl3和CH2Cl2都可以尝试,甲醇应该不行的，丁二酰亚胺的去除不要太过于相信过滤法，因为它在上述溶剂中还是有一些溶解度的。如果可以，还是水洗吧，肯定除干净。反应液过滤以后再水洗干燥，浓缩后放着等结晶就行。查看更多

#NBS

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仪器设备

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和利时DCS如何把顺控块的偏差开到关报警取消？ 报警抑制就可以了查看更多

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生物医学工程

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有没有测过4-溴丁酸乙酯中的4-溴丁酸? 走液相啊。用AQ柱或者hili c查看更多

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化学学科

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求助哪个单位有卖制作硫系玻璃的设备（实验室用）？万分感谢？ 有什么特殊要求吗，查看更多

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水含量测定溶剂选择？ 保证溶剂里面的水含量不超标就可以吧查看更多

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生物医学工程

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用CDNA pcr扩目的条带，扩出来不是没条带就是拖带？ 有没有扩增下内参试试，看看是不是反转录的问题内参扩过了，条带是有的，比预期的小一点查看更多

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仪器设备

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DF？ 加热的热电偶探测器不能离开加热区域，不然会一直加热，换个热电偶试一下就知道是热电偶坏了还是显示屏有问题了或者线路有问题查看更多

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生物医学工程

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请教大家RT-PCR实验结果CT值取舍怎么做比较好? 不是应该用统计学来处理吗查看更多

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仪器设备

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特种设备生产单位许可规则征求意见稿中的疑问？感觉制造单位凭制造许可就可以自行设计本单位许可范围的容器了，不然制造单位制造证上的项目就会变得特别复 ... 我的理解是制造单位不对外接设计项目，不需要取设计许可，自己制造的自己设计就行。但是如果对外设计，需要满足10个设计人员的条件。查看更多

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仪器设备

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请帮选一台涡街流量计？ 蒸汽压力多少查看更多

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简介

职业：上海燕达建设有限公司 - 给排水工程师

学校：安阳工学院 - 化学与环境工程系

地区：重庆市

个人简介：在人生的道路上，当你的希望一个个落空的时候，你也要坚定，要沉着。查看更多

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