普通DNA产物纯化试剂盒的特点及应用？ 背景 [1-3] 普通DNA产物纯化试剂盒采用独特的离心吸附柱，能够高效、专一地与DNA片段结合，并去除蛋白质、离子和引物小片段等杂质。除了适用于PCR产物回收，它还可以用于酶反应液的回收，如酶切、连接和探针标记等。该试剂盒可回收100 bp-20 kb范围内的DNA片段，回收率可高达80%以上（对于＜100 bp或＞10 kb的DNA片段，回收率为30%-50%）。得到的DNA可以直接用于连接、转化、酶切、测序、杂交等分子生物学实验。 产品特点： 速度最快：只需15分钟即可完成DNA回收，同时可以处理多个样品，节省时间。 步骤最少：操作简单，只需几次离心即可完成。 效率最高：独特的离心柱和精心配制的缓冲液保证每次回收到的DNA量最大。 处理量：每个离心吸附柱每次最多可吸附10μg的DNA。 应用 [4][5] 基因治疗用质粒DNA生产及产物纯化的研究 本研究探讨了含有重组质粒pcDNA3.1-IL-24工程菌的构建、发酵、大规模裂解条件，以及重组质粒pcDNA3.1-IL-24的分离纯化路线和质量检测体系的建立。 首先将已构建好的重组质粒pcDNA3.1-IL-24转化大肠杆菌E.coli DH5a，构建rh-IL-24工程菌。经过传代稳定性的考察后，在BIOFLO 40L发酵罐中进行发酵，通过补料分批发酵的方式，控制发酵温度在36℃-38℃之间，发酵培养对数生长期溶解氧浓度控制在30%-50%之间，PH保持在7.0左右。发酵结束后，收获的菌体约为36g湿菌体/L。 然后，离心收集菌体，使用碱裂解法大量制备粗制质粒DNA。首先通过盐沉淀法粗纯质粒DNA，然后使用离子交换层析、疏水层析和分子筛层析进一步纯化，最后进行无菌超滤，将质粒DNA浓缩到药用剂量后分装到安瓿中保存。 根据国家食品药品监督局颁布的《预防用DNA疫苗临床前研究技术指导原则》，建立了相应的质粒DNA质量检测体系，对质粒DNA产品进行质量鉴定。结果表明，本工艺制备的质粒DNA外观澄清，无杂质；pH值为7.2；质粒DNA浓度为727μg/mL；纯度（OD260/OD280）为1.87；杂质蛋白含量为0.007μg/μg质粒DNA；无RNA和抗生素残留；细菌内毒素小于0.007EU/μg质粒DNA。 与传统实验室方法相比，本工艺生产流程避免使用有毒试剂（如苯酚和氯仿）和动物源性酶类（如RNase A），确保了产品的安全性，同时也减少了检测有毒试剂残余量的繁琐步骤。本工艺使用的大多是价格低廉的国产试剂，所用的材料和设备（如凝胶和反应器）可以反复再生使用。 本工艺具有生产周期短、经济性好的特点，能够满足实际生产需求。此外，操作简单、易于放大、重复性好，并且建立了相应的质粒DNA质量检测体系，对于药用级质粒DNA的大规模制备具有重要的现实意义，也为同类研究的进行奠定了理论基础，为进一步的工业化生产提供了借鉴。 参考文献 [1]Purification of pharmaceutical-grade plasmid DNA by anion-exchange chromatography in an RNase-free process[J].Alex Eon-Duval,Gemma Burke.Journal of Chromatography B.2004(2) [2]Removal of RNA impurities by tangential flow filtration in an RNase-free plasmid DNA purification process[J].Alex Eon-Duval,Robert H MacDuff,Carol A Fisher,Mark J Harris,Chris Brook.Analytical Biochemistry.2003(1) [3]Downstream processing of plasmid DNA for gene therapy and DNA vaccine applications[J].Guilherme N.M.Ferreira,Gabriel A.Monteiro,Duarte M.F.Prazeres,Joaquim M.S.Cabral.Trends in Biotechnology.2000(9) [4]Gene therapy:the first decade[J].Andrew Mountain.Trends in Biotechnology.2000(3) [5]韩依辰.基因治疗用质粒DNA生产及产物纯化的研究[D].长春工业大学,2010. 查看更多
苄基三甲基三溴化铵的性质和应用？ 苄基三甲基三溴化铵是一种橘红色晶体，具有较高的熔点。它可以溶解于二氯甲烷、DMSO和DMD，但在甲醇、乙醇、三氯甲垸和乙酸乙酯中只微溶，而在苯、四氯化碳、己垸和水中不溶。 苄基三甲基三溴化铵的制备和商品 苄基三甲基三溴化铵可以通过苄基三甲基氯化铵和溴酸钠与氢溴酸反应制备。该化合物在国内外的化学试剂公司均有销售。 苄基三甲基三溴化铵的注意事项 长期暴露在空气中会导致苄基三甲基三溴化铵微量分解。 苄基三甲基三溴化铵的应用 苄基三甲基三溴化铵主要用作溴化试剂，在有机合成中具有重要的应用。它可以缓慢地释放出溴，在一定条件下可以用作芳烃、芳胺和酚的溴化试剂。 此外，苄基三甲基三溴化铵还可以参与芳烃侧链的溴化反应，与酮发生α-溴代反应和消去反应生成烯烃，与烯烃发生加成反应，以及与硫脲或异硫氰酸酯发生环化反应生成噻唑。 此外，苄基三甲基三溴化铵还可以氧化醇、硫化物及硫醇，以及与甲基酮发生卤仿反应。 参考文献 1. Lin, T. C.; Hsu, C. S.; Hu, C. L.; Chen, Y. F.; Huang, W. J. Tetrahedron Lett. 2009, 50,182. 2. Kajiyama, K.; Yoshimune, M.; Kojima, S.; Akiba, K. Y. Eur. J. Org. Chem. 2006,2739. 3. Miura, Y.; Muranaka, Y.; Teki, Y. J. Org. Chem. 2006, 71,4786. 4. Wood, P. M.; Woo, L. W. L.; Labrosse, J. R.; Trusselle, M. N.; Abbate, S.; Longhi, G.; Castiglioni, E.; Lebon, F.; Purohit, A.; Reed, M. J.; Potter, B. V. L. J. Med. Chem. 2008, 51, 4226. 5. Ma, C.; Kwok, W. M.; Chan, W. S.; Du, Y.; Kan, J. T. W.; Toy, P. H.; Phillips, D. L. J. Am. Chem. Soc. 2006,128, 2558. 6. Ploypradith, P.; Kagan, R. K.; Ruchirawat, S,J. Org. Chem. 2005, 70, 5119. 7. Yamato, T.; Miyamoto, S.; Hironaka, T.; Miura, Y. Org. Lett. 2005, 7,3. 8. Czollnera, L.; Treub, M.; Froehlichb, J.; Kueenburga, B.; Jordis, U. ARKIVOC 2001,191. 9. Nicolaou, K. C.; Roecker, A. J.; Follmann, M.; Baati, R. Angew. Chem., Int. Ed 2002,41,2107. 10. Teichmann, M.; Descotes, G.; Lafont, D. Synthesis 1993,889. 11. Jordan, A. D.; Luo, C.; Reitz, A. B. J. Org. Chem. 2003, 68, 8693 12. Sparks, R, B.; Polam, P.; Zhu, W. Y.; Crawley, M. L.; Takvorian, A.; McLaughlin, E.; Wei, M.; Ala, P. J.; Gonneville, L.; Taylor, N.; Li, Y. L.; Wynn, R.; Bum, T. C.; Liu, P. C. C.; Combs, A. P. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2007,17, 736. 来源：现代有机合成试剂 查看更多
5-甲基吡嗪-2-羧酸的应用及合成方法？ 5-甲基吡嗪-2-羧酸是一种黄橙色固体，常用于精细化工原料和有机合成中间体。它在香料香精、药物分子和生物活性分子的合成中有广泛应用。例如，5-甲基吡嗪-2-羧酸是降血脂药物阿莫西司的关键合成中间体。 5-甲基吡嗪-2-羧酸在医药领域的用途 5-甲基吡嗪-2-羧酸可用于合成和修饰药物分子，特别是用于合成降血脂药物分子阿莫西司。阿莫西司是一种能够降低甘油三酯和总胆固醇浓度的药物，通过抑制脂肪组织的分解和脂蛋白的合成来实现。 5-甲基吡嗪-2-羧酸的应用转化 图1 展示了5-甲基吡嗪-2-羧酸的应用转化过程。具体方法是将5-甲基吡嗪-2-羧酸与甲醇反应，加入催化剂并回流反应5小时，然后蒸发溶剂得到粗品，最后通过重结晶提纯得到目标产物。 图2 展示了另一种5-甲基吡嗪-2-羧酸的应用转化方法。将5-甲基吡嗪-2-羧酸与甲醇和浓硫酸反应，回流搅拌反应24小时，然后加入水合肼继续回流反应8小时，最后通过减压浓缩和重结晶得到纯的目标产物。 参考文献 [1] Ahmad, Mushtaq et al Pakistan Journal of Pharmaceutical Sciences, 29(3), 811-817; 2016 [2] Miniyar, P. B. et al Arabian Journal of Chemistry, 10(1), 41-46; 2017 查看更多
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