ANTI-CD20抗体的应用及结构研究？ 背景 [1-3] ANTI-CD20抗体是一种能够特异性结合CD20的单克隆抗体，主要用于多种免疫学实验，如Western Blot、IHC-P、IF、ELISA、Co-IP等。 检测原理：采用双抗体夹心法来测定样本中CD20的水平。首先，在微孔板上包被纯化的CD20抗体，形成固相抗体。然后，依次加入CD20和HRP标记的CD20抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后，加入底物TMB进行显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，然后在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅与样品中CD20的浓度呈正相关。最后，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中CD20的浓度。 CD20表达于除浆细胞外的各个发育分化阶段的B细胞表面，通过调节跨膜钙离子流动对B细胞起作用，在B细胞增殖和分化中起重要的调节作用。CD20抗原是一种B细胞分化抗原，仅位于前B细胞和成熟B细胞，它在95%以上的B细胞性淋巴瘤中表达，而在造血干细胞、血浆细胞和其他正常组织中不表达。 CD20是一种血细胞分化抗原，用于标记血细胞在分化和成熟过程中的细胞表面。除浆细胞外的各个发育分化阶段的B细胞表面都表达CD20，它通过调节跨膜钙离子流动对B细胞起作用，在B细胞增殖和分化中起重要的调节作用。 应用 [4][5] 新型重组抗CD20人鼠嵌合单克隆抗体结构与功能研究 本研究使用液相色谱-电喷雾离子化四极杆飞行时间质谱（LC-ESI-Q-TOF）技术，通过交替高低能量碰撞扫描、源内诱导解离和二级质谱的方法，从质量肽图水平到完整蛋白亚单位水平，再到游离寡糖水平逐级研究CMAB304的结构，特别是其寡聚糖结构特征，并与原研药进行对比分析，以确证解析CMAB304的糖链结构。 研究发现，CMAB304与原研药具有相同的蛋白质一级结构（氨基酸序列），但两种抗体的重链Fc段上的糖形相对比例存在明显差异，尤其是CMAB304在非岩藻糖基化糖形方面的含量明显升高。这一结果表明，CMAB304可能具有更高的体外ADCC活性。 体外活性研究结果显示，CMAB304与FcγRIIIa（Fc gamma receptor IIIa，CD16a）的结合活力和ADCC效应均较强，但在补体依赖的细胞毒效应（CDC）方面两者之间没有明显差异。这一发现进一步证实了CMAB304与原研药在糖形相对比例水平上的差异。 通过流式竞争法检测I期临床研究中受试者的血液样本，获取其血清药物浓度，并使用WinNonLin（Pharsight Corp，6.1版）药动学分析应用软件进行房室模型拟合，以探索CMAB304的药动学和体内代谢规律。 参考文献 [1]John R.Gasdaska,Steven Sherwood,Jeffrey T.Regan,Lynn F.Dickey. An afucosylated anti-CD20 monoclonal antibody with greater antibody-dependent cellular cytotoxicity and B-cell depletion and lower complement-dependent cytotoxicity than rituximab. Molecular Immunology.2012(3) [2]P.P.Tak,P.J.Mease,M.C.Genovese,J.Kremer,B.Haraoui,Y.Tanaka,C.O.Bingham,A.Ashrafzadeh,H.Travers,S.Safa‐Leathers,S.Kumar,W.Dummer. Safety and efficacy of ocrelizumab in patients with rheumatoid arthritis and an inadequate response to at least one tumor necrosis factor inhibitor: Results of a forty‐eight‐week randomized,double‐blind,placebo‐controlled,parallel‐group phase III trial. Arthritis&Rheumatism.2012(2) [3]Matthew J.Barth,Francisco J.Hernandez‐Ilizaliturri,CoryMavis,Ping‐ChiaoTsai,John F.Gibbs,GeorgeDeeb,Myron S.Czuczman. Ofatumumab demonstrates activity against rituximab‐sensitive and‐resistant cell lines,lymphoma xenografts and primary tumour cells from patients with B‐cell lymphoma. British Journal of Haematology.2012(4) [4]Stephen A.Beers,Claude H.T.Chan,Ruth R.French,Mark S.Cragg,Martin J.Glennie. CD20 as a Target for Therapeutic Type I and II Monoclonal Antibodies. Seminars in Hematology.2010(2) [5]李先平.新型重组抗CD20人鼠嵌合单克隆抗体结构与功能研究[D].第二军医大学,2013.查看更多
人载脂蛋白C3(APO C3)ELISA试剂盒的工作原理是什么? 人载脂蛋白C3(APO C3)ELISA试剂盒是一种用于检测样品中人载脂蛋白C3(APO C3)水平的双抗体一步夹心法。该试剂盒采用了一种特殊的原理，通过在预先包被人载脂蛋白C3(Apo-C3)捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品和HRP标记的检测抗体。经过温育和洗涤后，使用底物TMB进行显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，然后在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中的人载脂蛋白C3(Apo-C3)水平呈正相关。最后，使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），并计算样品的浓度。 人载脂蛋白C3(APO C3)检测原理图 如何操作该试剂盒？ 1. 从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。 2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加入不同浓度的标准品50μL。 3. 样本孔中加入待测样本50μL，空白孔不加。 4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60分钟。 5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1分钟，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。 6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分钟。 7. 每孔加入终止液50μL，15分钟内，在450nm波长处测定各孔的OD值。 该试剂盒有哪些应用？ 它如何与动脉粥样硬化脑梗死和超敏C反应蛋白相关？ 该试剂盒可以用于研究急性动脉粥样硬化脑梗死与血浆载脂蛋白C3（Apo-C3）和超敏C反应蛋白（hs-CRP）的关系。 研究方法：收集了急性动脉粥样硬化脑梗死患者（男性38例，女性22例）作为实验组，年龄范围为43-79岁，平均年龄为（58.46±7.24）岁；同时收集了30例健康体检者（男性17例，女性13例）作为对照组，年龄范围为42-72岁，平均年龄为（56.86+7.71）岁。记录并比较了两组的一般情况，如血糖、血压、血脂和既往史。 使用酶联免疫分析法检查了两组血浆Apo-C3水平，并使用免疫比浊法检查了两组血浆hs-CRP水平，比较了两组Apo-C3和hs-CRP浓度的差异。 结果如下： 1. 实验组血浆Apo-C3水平明显高于对照组，高甘油三酯血症、高VLDL和糖尿病患者的血浆Apo-C3水平也明显高于对照组，差异具有统计学意义（p<0.01）。 2. Apo-C3水平与脑梗死面积呈正相关。 3. 不稳定斑块的Apo-C3水平明显高于稳定斑块，二者之间存在统计学差异（p<0.01）。 4. 实验组急性期的血浆hs-CRP水平明显高于对照组，差异具有统计学意义（p<0.01）。随着病情好转，hs-CRP水平逐渐下降，但仍高于对照组，差异具有统计学意义（p<0.01）。 结论如下： 1. Apo-C3与动脉粥样硬化脑梗死密切相关，血浆Apo-C3升高可能导致血浆甘油三酯、VLDL和血糖的升高。 2. 血浆hs-CRP的下降可以提示病情好转。 参考文献 [1] Sarwar N, Danesh J, Eiriksdottir G, et al. Triglycerides and the risk of coronary heart disease: 10,158 incident cases among 262,525 participants in 29 Western prospective studies. Circulation. 2007. [2] Cohn, J.S., Patterson, B.W., Uffelman, K.D. Rate of production of plasma and very-low-density lipoprotein (VLDL) apolipoprotein C-III is strongly related to the concentration and level of production of VLDL triglyceride in male subjects with different body weights and levels of insulin sensitivity. The Journal of Clinical Endocrinology. 2004. [3] Nordestgaard BG, Benn M, Schnorhr P, et al. Nonfasting triglycerides and risk of myocardial infarction, ischemic heart disease, and death in men and women. The Journal of The American Medical Association. 2007. [4] Sundaram M, Zhong S, Khalil MB, et al. Expression of apolipoprotein CIII in McA-RH7777 cells enhances VLDL assembly and secretion under lipid-rich conditions. Journal of Lipid Research. 2010. [5] 胡林壮. 动脉粥样硬化脑梗死与载脂蛋白C3、超敏C反应蛋白水平的相关性研究[D]. 安徽医科大学, 2011. 查看更多
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