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猫七姑娘

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化工主管

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氢化钙干燥吡啶这么操作? 现在要保证反应物无水，文献上是说要用氢化钙干燥吡啶，氯仿。请问各位该怎么操作呢？因为我知道氢化钙很活泼，自己又没有操作过，万一操作不好，很怕出事情，所以请大家帮忙说具体点了，谢谢大家的帮助！查看更多 1个回答 . 18人已关注

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MTT实验酶标仪检测的波长到底是490还是570? 我做MTT一直是用的490，突然今天我室友问我用的490还是570，我就意识到我看文献也经常看到用570的，但我不明白这两个波长有什么区别？求高人解答？查看更多 1个回答 . 20人已关注

#酶标仪

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贴壁效果不好的问题该怎么解决? 刚开始养HEK293T细胞，下一步是打算做质粒脂质体转染用的。但是现在刚把细胞复苏之后发现，293T贴壁效果不好，换液的时候用PBS轻柔的洗了一下下就大块大块的掉细胞。看着我心肝儿都颤了。。。我用的DMEM+10%FBS+ 抗生素（青霉素和链霉素）；隔一天换液。现在想跟各位大神请教一下：1）大概几天传代比较好（现在感觉我的培养瓶前半部分细胞密度可能只有40%-50%，但是后半部密度可能有80%了）？2）传代是按1:3传还是按1:4传？3）贴壁效果不好的问题该怎么解决？对后期转染有影响吗？查看更多 1个回答 . 20人已关注

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关于桩基础与桩承台的连接问题? 在工程中桩基础的钢筋要锚入桩承台一定长度，以保证固接。如果桩基础钢筋不锚入承台，将桩基础视为地基处理部分，如同CFG桩一样，而把桩承台视为基础来看，是否可以设计要求？查看更多 1个回答 . 3人已关注

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地下连续墙施工会出现哪些质量缺陷? 地下连续墙的施工方法是建造深基础工程和地下构筑物的一项新技术，广泛应用于高层建筑，地铁基坑工程，其施工技术和工艺较复杂，质量要求严，施工难度较大，如施工操作不当易出现各类质量问题，影响工程进行和墙体质量。一般会出现哪些质量缺陷？查看更多 1个回答 . 7人已关注

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大家有什么好的硼烷的合成方法? 我最近在作手性氨基醇催化还原苯乙酮的实验，途径是用硼氢化钠和三氟化硼乙醚原位制得硼烷还原苯乙酮。可是一直没有得到产物。分析了好久原因，觉得应该是可能硼烷根本就没有制备到。各位大侠谁知道这种方法如何才能保证硼烷能得到呢？查看更多 1个回答 . 19人已关注

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细胞裂解做Western，贴壁细胞直接加裂解液，还是消化后加裂解液? 细胞裂解做Western，贴壁细胞直接加裂解液，还是消化后加裂解液？还有裂解多久？查看更多 1个回答 . 4人已关注

#ester

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Hoechst 33342应该见到DNA物质就会染色, 为什么会拒染? 我看到别人说干细胞拒染Hoechst 33342 . 1.我之前认为, Hoechst 33342 作为胞核染色剂 ,应该见到DNA物质就会染色, 难道干细胞会拒染吗? 2. 请问Hoechst 33342 与Hoechst 33258 有何区别? 查看更多 4个回答 . 2人已关注

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不经过衍生化，可以用气相测定葡萄糖的纯度么? 我想用GC/MS测定葡萄糖的纯度，我看到文献里都是对葡萄糖进行了衍生化，然后用气相测定。请问不经过衍生化，可以用气相测定葡萄糖的纯度么？这个检测方法有国家或者行业标准么？查看更多 1个回答 . 8人已关注

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冻干有晶型，为什么? 我现在在做一个冻干，做出来的样品做晶型检测是有晶型的，看到一些帖子说冻干一般情况是无定型的。什么原因会导致我这种结果呢？查看更多 4个回答 . 15人已关注

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最近在做Western P53蛋白，发现随着加药浓度升高蛋白表达量反而下降，这是为什么? 请教各位，本人最近在做Western P53蛋白，发现随着加药浓度升高蛋白表达量反而下降，理论上将药物是诱导细胞凋亡的。上样量50ug，曝光10min左右。请各位赐教！不胜感激！查看更多 4个回答 . 15人已关注

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亲水防雾方面？ 请问有从事亲水性防雾工作的吗？我们主要应用在塑料膜和片材上，有原因交流的请站内私信您的联系方式。查看更多 4个回答 . 9人已关注

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冷吹曲线会出现多个峰值是什么原因? 在分子筛纯化器再生时，有时冷吹曲线会出现多个峰值是什么原因？查看更多 1个回答 . 3人已关注

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本人最近一直在做RhoA-GTP的pull down，用的方法也是经典的RBD结合的方法，可是总是检？本人最近一直在做RhoA-GTP的pull down，用的方法也是经典的RBD结合的方法。可是总是检测不出来RhoA-GTP。具体实验流程如下：100mL BL-21摇到OD值0.8-0.9之间时用终浓度为1mM 的IPTG诱导 GST-RBD的表达，温度为33.5°C。摇2个小时左右（期间每个小时的取200uL菌，后期用作考染证明诱导表达），收集菌体并用冰PBS洗一遍。用CST的10xCell Lysis Buffer稀释到1x的裂解液去裂解细菌，并在冰上超生15s，共8次，每次间隔1min。12000rpm，4°C，30min，取上清并加入已经处理好的GSH beads（Sigma）。4°C rolling 1h。洗珠子，并用裂解液平衡珠子。同样的裂解液裂解细胞，快速将细胞裂解液混匀，12000rpm，4°C，15min。取2/3上清加入珠子4°C rolling 45min，取1/3上清用丙酮浓缩做Total RhoA。离心弃上清，并洗珠子。最后加Laemmli Buffer ，100°C，10min，上样WB检测。可是我一直没有检测到RhoA-GTP，不知道是我的方法有问题还是细胞根本就没有RhoA-GTP，我用的是A549细胞，serum starvation 16h 之后加的100uM 双氧水诱导RhoA激活。望RhoA-GTP Pull Down有经验的人给指点一下。查看更多 4个回答 . 11人已关注

#pull

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关于API质量标准的问题？ API有一个成品质量标准，稳定性研究时有一个稳定性质量标准，API供制剂使用时，会进行放行检验，这是就会有一个放行质量标准，请问这三个标准之间是什么关系，能使用同一个标准吗？查看更多 4个回答 . 14人已关注

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可以用Sal酶切位点重新构建的质粒有那几样? 本人手上有个慢病毒的质粒，目的基因是通过SalI酶切位点插入的，我想将这个基因切下来重新构建，希望有经验的前辈能够指点，可以选择些什么样的质粒呀，最好是带有GFP标记的非病毒质粒，还有个问题请教就是，病毒载体是不是不需要类似于G418筛选的标记呀？如果我找到个质粒，将这个基因连上去之后，怎么才能鉴别/筛选目的基因正反向的问题？谢谢了！查看更多 3个回答 . 12人已关注

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单抗仿制药，原研药未在国内上市，能按新药申报吗? 《生物类似药研发与评价技术指导原则》中提到，做生物类似药临床比对试验研究用的参照药，应在我国批准注册。如果我们想做一个国外单抗的生物类似药，一级结构、表达系统、生产工艺等与原研药基本相同，如果按照生物类似药申报，做到临床的话需要与原研药比对，但是原研药未在国内上市，临床比对就没法做，为了避免这一情况，是否能够将生物类似药按照新药申报呢？这样就省略了复杂的比对，也解决了原研药无法获得的问题。查看更多 2个回答 . 13人已关注

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如何再增加硅胶表面的羟基? 硅胶经过高温焙烧后，表面的羟基会发生缩合反应而失去，那么如何再增加硅胶表面的羟基？用盐酸处理其表面可以生成羟基吗？为什么一般文献里说用低浓度盐酸处理硅胶表面，可以活化其表面的羟基查看更多 2个回答 . 8人已关注

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碳酸二甲酯取代光气做甲酰化反应何注意事项? 不知道大家有没有做过碳酸二甲酯取代光气做甲酰化反应？此中有何注意事项？R-NH-R 的-NH-上可不可用碳酸二甲酯进行取代以制得 N-CO-OCH3 ? 查看更多 2个回答 . 6人已关注

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如何将环糊精接到碳纳米管上? 实验室要做这方面内容，没有大致思路，各位大神有做过的，给讲一讲。谢谢查看更多 1个回答 . 8人已关注

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简介

职业：国峰清源生物能源有限公司 - 化工主管

学校：湖南科技大学 - 化学化工学院

地区：山东省

个人简介：无聊就是无话可说，也无事可做！寂寞就是无聊时，耳朵塞着耳机……发呆！查看更多

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