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呆檬

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给排水工程师

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生物医学工程

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请问如何用RT－PCR的方法怎么检测p38，JNK，ERK通路? 最近读了很多文献，均未发现有使用RT－PCR的方法怎么检测p38，JNK，ERK通路的报道。常使用的方法有：免疫沉淀法；Western Blot；ELISA等方法。还有一些和大家一起学习！查看更多

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化药

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工艺技术

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对羟基苯甲酸乙酯作为反应原料，希望合成对乙氧基苯甲酸乙酯，有什么推荐的路线吗? 应该和被提取的东西有关系，普通而言是加大展开剂极性效果。过柱前，算好氯仿，乙醚和乙酸的比例，再冲柱。你的产品是不是是含有羧酸基团？酸在TLC 上肯定要加酸的，如果含有胺基团的话，要加三乙胺或者碳酸钾。查看更多

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化学学科

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二酮α溴代的问题？ 说明条件还是需要缓和，再降温或用四氯化碳稀释试试... 文献里只用了冰醋酸，用四氯化碳可以吗？我是想用NBS试试会不会有一些改观。查看更多

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生物医学工程

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abaqus如何加载已频率为X轴，加速度为Y轴的载荷? 你要进行的并不是模态分析，而是振动分析！查看更多

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生物医学工程

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工艺技术

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超声破碎中遇到的困难和如何提取胞质蛋白? 我觉得超声前的冻融意义不大，还可能导致一些本来水溶性的蛋白聚集或变性，所以后面wash完，会有更多的杂蛋白留在pellet里。可以考虑加点溶菌酶，作用一段时间在去超声。发酵完离心获得菌体pellet和sup，sup中很有可能是有活性的蛋白，可以直接纯化。这样可以避开包涵体复性的复杂过程。超声破碎的时候，一定要注意控温！同时，pellet进行超声破碎，及纯化前的wash 和变性提取。wash的目的主要是在纯化前降低杂蛋白的量，一定程度上减少纯化的负担。超声的buffer中不一定要有还原剂，要根据你的蛋白来定，不过wash buffer和extract buffer一般是要加还原剂的。wash buffer中的urea浓度可以为1~4M，Triton X-100一般在0.5~5%，要根据你的蛋白来具体情况具体对待，一般的包涵体是不会提取出来的，可以做个预实验，跑个SDS-PAGE就可以看出来的。这样可以得到比较纯的蛋白，然后再进行纯化和复性。wash的条件摸好后，可以多处理一些，将待提取的pellet放在-80保存，可以保存很久，然后以此为起点，进行下面的纯化。查看更多

#超声破碎

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化药

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怎样提高细胞总蛋白提取浓度，求提细胞总蛋白的方法? 你还要看你的细胞有多少，75mm2培养皿的细胞融合约90%时，我是用200μl的裂解液加磷酸酶抑制剂2μl，100mM氟化钠2μl,100mM原钒酸钠2μl，100mM PMSF2μl.冰上裂解30min，再12000g离心5min，取上清，测出来的蛋白深度一般是6.0μg/μl。组织蛋白就要先在匀浆机匀浆后离心再取上清就行，其他的一样。查看更多

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生物医学工程

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如何改进HepG2 细胞培养条件? 感觉是消化的问题，是否消化过头查看更多

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生物医学工程

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如何证明药物A是通过抑制JNK激酶的活性来实现药效A的? 药物A有没有对照呢？关键是你的药物是什么性质的？信号分子？抗体？小分子化合物？1、使用药物A和对照以后，检测jnk信号通路相关蛋白的变化.应该是药物A有相应变化，对照无。2、如果你的药物A是细胞因子或者信号分子，，可以用相应中和抗体，看看能不能使药效消失。3、最好的办法是使用药物A以后，你重新激活JNK激酶，看看药效A能不能消失活减弱。可以通过转染JNK通路下游效应分子的质粒来实现。查看更多

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生物医学工程

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本人最近一直在做RhoA-GTP的pull down，用的方法也是经典的RBD结合的方法，可是总是检？ WB用的RhoA抗体效价和WB技术效果也很重要。查看更多

#pull

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生物医学工程

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微生物

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质粒转染和病毒转染有什么本质上的区别? 我最近也是在纠结这个载体问题，大家都说用病毒转染转染率高但是很麻烦，我怕用脂质体转染了细胞后，传几代后荧光变弱，再接着做动物实验会不好荧光成像。查看更多

#质粒转染

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生物医学工程

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微生物

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用带GFP标签的microRNA质粒能用于luciferase实验吗? 这个实验还要谨慎考虑一下，GFP的绿色荧光可能会干扰luciferase检测结果。另外你说的microRNA带GFP标签，你要保证两个东西都要有表达且保持活性，建议你最好把这两个东西构建成两个转录单位，由两个启动子分别起始两个东西的转录，查看更多

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生物医学工程

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如何进行BLAST的本地化? 其实国内南京农业大学做了一个很小很方便的软件可以进行简单的BLAST，但必须你自己先找到序列才行的，软件名是：BioXM，你可以试试查看更多

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生物医药

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检测炎性细胞因子这方面，BMDM和RAW264.7巨噬细胞有什么区别么? Raw是肿瘤细胞。你就是做mtDNA对炎症小体的影响咯，没必要绕这么大一圈啊，按照你的说法，只加LPS就引起线粒体自噬，你直接在加LPS的情况下再加入线粒体自噬抑制剂不就可以引起mtDNA释放了么，然后不就激活NLRP3炎症小体了么。然而如果你用LPS+ATP的方法再加线粒体自噬抑制剂不就和别人做的一模一样了么，哪来的新意？如果你有特异性清除mtDNA的方法是可以说明问题的。又或者你直接转染mtDNA作为inducer岂不是更好，当然这是设想，mtDNA的获取也有难度。以上是针对你疑问的解答，最后谈谈我的看法。首先以我的了解，双链DNA所激活的炎症小体不是NLRP3而是AIM2炎症小体，所以对于你的假设我就觉得很有疑问，暂时没有相关mtDNA激活NLRP3的报导，如果有，你做了也没新意了。因此还是劝你好好再查阅文献验证下你假说的可能性大小。查看更多

#巨噬细胞

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化学学科

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文献里PPt是什么意思啊?"固体"吗? 从前文看,应该是中和后生成的盐,但没有看过有这样表示的.查看更多

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生物医学工程

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黄土地区的土样不需要进行原位测试吗? 要进行原位测试，比如标贯，因为黄土承载力的确定主要依据物理性质确定。查看更多

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仪器设备

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内浮顶罐要加带芯人孔吗? 内浮顶罐要加带芯人孔查看更多

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生物医学工程

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在提取蛋白的时候，裂解离心之后，上清液最上边总是会有白色絮状物质离不下去，对实验有影响吗? 根据我的经验，基本没影响查看更多

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化学学科

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零价钯制备氯化钯？将钯粉加入盛有盐酸的反应器中，在搅拌下通入空气进行氧化反应，生成氯化钯溶液，经溶液提纯、过滤、蒸发浓缩、冷却结晶、离心分离、干燥，制得氯化钯成品。Pd+2HCl+0.5O2→PdCl2+H2O查看更多

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说・吧

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大家现在从事环境方面哪些工作? 环工女大三，准备考研，不知道选哪个方向，还请前辈们指导一下水和气都可以查看更多

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化学学科

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汽提工艺流程简介.ppt？ 很多啊挣得盆满钵满了吧查看更多

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简介

职业：上海河图工程股份有限公司 - 给排水工程师

学校：湖南化工职业技术学院 - 自动化

地区：云南省

个人简介：以吾人数十年必死之生命，立国家亿万年不死之根基，其价值之重可知。查看更多

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