小鼠肠微血管细胞试剂盒的应用及其对小鼠原位结肠癌生长的影响？ 背景： [1-6] 小鼠肠微血管细胞试剂盒是一种用于培养小鼠肠微血管细胞的试剂盒。该试剂盒包含多种组分，如组织解离液、组织处理缓冲液、成纤维抑制剂、组织洗液、生长因子及血清、基础培养基和预备液。 微血管是心血管系统中的微细血管，只能在显微镜下观察到。它们是连接小动脉和小静脉的细小血管，分布于各种组织和器官中，形成一个网状结构，也被称为终末血管床。小鼠肠微血管细胞可以保持原始细胞的分化状态，可用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。通过使用小鼠肠微血管细胞试剂盒中提供的肠微血管组织分离体系，可以分离出肠微血管细胞，尽管肠微血管组织具有很强的机械韧性，但经过EDTA/EGTA处理的肠微血管组织会改变微血管细胞的某些功能特性。 应用： [7][8] 巨噬细胞金属弹力酶基因转染CT-26细胞对小鼠原位结肠癌生长及微血管生成的影响 巨噬细胞金属弹力酶（MME）是基质金属蛋白酶（MMP）家族的一员，也被称为MMP-12。与其他MMP成员不同，MME能够分解纤溶酶原，产生具有抑制血管内皮细胞增殖作用的血管抑素（angiostatin），从而抑制肿瘤细胞的生长，在抗肿瘤血管生成中起重要作用。本研究通过PCR扩增编码MME基因结构域Ⅰ和Ⅱ的cDNA片段，并将其克隆入真核细胞表达载体中，然后将构建的真核细胞表达载体转染到小鼠CT-26结肠癌细胞中。通过RT-PCR、免疫细胞化学和Western blot等方法，鉴定MME mRNA和重组蛋白在CT-26细胞中的表达。 通过体外分解胶原蛋白和明胶酶谱方法，鉴定了MME重组蛋白的酶活性。建立了MME转染组和对照组的小鼠原位结肠癌种植模型，观察了MME对原发性结肠癌生长的影响，并通过免疫组织化学、原位杂交和Western blot等方法检测了肿瘤组织中的微血管密度和VEGF的表达。 参考文献 [1] Matrix metalloproteinases (MMPs) and their physiological inhibitors (TIMPs) are differentially expressed during excisional skin wound repair. Madlener M, Parks WC and Werner S. Experimental Cell Research. 1998. [2] Mouse macrophage metalloelastase gene transfer into a murine melanoma suppresses primary tumor growth by halting angiogenesis. Gorrin-Rivas MJ, Arii S, Furutani M et al. Clinical Cancer Research. 2000. [3] Emphysema and metalloelastase expression in mouse lung induced by cigarette smoke. Valenca SS, da Hora K, Castro P et al. Toxicologic Pathology. 2004. [4] Macrophage metalloelastase, MMP-12, cleaves human apolipoprotein(a) in the linker region between kringles IV-4 and IV-5. Edelstein C, Shapiro SD, Klezovitch 0 et al. Journal of Biological Chemistry. 1999. [5] Hyaluronan and type III pro-collagen peptide concentrations in bronchoalveolar lavage fluid in idiopathic pulmonary fibrosis. Bjermer L, Lundgren R and Hallgren R. Thorax. 1989. [6] Macrophage metalloelastase as a major factor for glomerular injury in anti-glomerular basement membrane nephritis. Kaneko Y, Sakatsume M, Xie Y et al. J Immunol. 2003. [7] Lung morphometry and MMP-12 expression in rats treated with intraperitoneal nicotine. Valenca SS, de Souza da Fonseca A, da Hora K et al. Experimental and Toxicologic Pathology. 2004. [8] 石海.巨噬细胞金属弹力酶基因转染CT-26细胞对小鼠原位结肠癌生长及微血管生成的影响[D].安徽医科大学,2005. 查看更多
如何进行小鼠肺癌细胞LLC的原代培养? 小鼠肺癌细胞LLC是一种稳定的原代细胞系，常用于研究生物体细胞的生长、代谢和繁殖。本文介绍了LLC细胞的来源以及原代培养的方法。 原代培养是从生物体中获取组织或器官的一部分进行培养的方法，可以更接近于生物体内的生活状态。原代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动上相似性大。常用的原代培养方法有组织块培养和分散细胞培养。 组织块培养是将剪碎的组织块直接移植在培养瓶壁上，加入培养基后进行培养。分散细胞培养则是将组织块用机械法或化学法使细胞分散。对于LLC细胞的原代培养，可以使用蛋白水解酶或金属离子螯合剂来消化细胞间的结合物，然后经过机械轻度振荡，使其成为单细胞。 LLC细胞的应用 建立稳定表达IL-12的LLC细胞系及IL-12活性检测 白介素-12（IL-12）是一种具有抗瘤活性的细胞因子。通过构建能在真核细胞内稳定表达小鼠IL-12的质粒，可以建立稳定表达IL-12的LLC细胞系，从而为研究IL-12的免疫调节机制和抗瘤免疫反应提供基础。 具体方法是通过聚合酶链反应（PCR）扩增IL-12的片段，将其连接到真核表达载体上，然后转染到LLC细胞中。通过流式细胞仪观察细胞周期和凋亡，并使用G418筛选获得阳性克隆。最后，通过RT-PCR和ELISA检测IL-12的表达和活性。 结果表明成功构建了稳定表达IL-12的LLC细胞系，并且该细胞系具有IL-12的生物学活性。 参考文献 [1] Local administration of IL-12-transfected dendritic cells induces antitumor immune responses to colon adenocarcinoma in the liver in mice. Yuji Satoh, Clemens Esche, Andrea Gambotto, et al. Journal Of Experimental Therapeutics And Oncology. 1998. [2] Combining radiation therapy with interleukin-3 gene immunotherapy. Chiang,-C-S, Hong,-J-H, Wu,-Y-C, et al. Cancer-Gene-Ther. 2000. [3] Adenovirus-medited gene therapy for human head neck squamous cell cancer in a nude mouse model. Mally B W J R, Chen S H, Schwartz M R, et al. Cancer Research. 1995. [4] Anaphylactic shock due to recombinant human interleukin-3. Mittelman,-M, Zeidman,-A, Fradin,-Z, et al. Eur-J-Haematol. 1999. [5] 尹晓玲. 建立稳定表达IL-12的小鼠Lewis肺癌细胞系及IL-12活性检测[D]. 重庆医科大学, 2006.查看更多
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