什么是DAB显色试剂盒? DAB显色试剂盒是一种用于免疫组化显色的试剂盒,可以在细胞或组织的免疫组化或原位杂交过程中使用。它利用辣根过氧化物酶(HRP)进行显色,产生棕色沉淀物。 DAB显色试剂盒中的DAB是指3,3-N-二氨基苯胺四盐酸盐,是辣根过氧化物酶最敏感、最常用的底物。在辣根过氧化物酶的作用下,DAB会产生棕色沉淀物。这种棕色沉淀物不溶于水、乙醇和二甲苯,因此在DAB显色后,可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。过氧化物酶会使底物发生反应,在反应部位产生棕色沉淀物。标本的显色时间一般为室温下的5-20分钟,之后可以在显微镜下观察显色情况,显色充分后应及时脱水封固。显色的终产物可以直接在光镜下观察,也可以经过OsO4处理后增加反应产物的电子密度,用于电镜观察。 如何使用DAB显色试剂盒? 1. 对于组织切片、细胞样品或膜,在与辣根过氧化物酶标记的抗体或其他形式的探针孵育后,使用适当的洗涤液进行洗涤,每次洗涤3-5分钟,重复3-5次。对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品,在适当固定后,也使用适当的洗涤液进行洗涤。 2. 将试剂A和B等量混合,配制成DAB染色工作液。 3. 在最后一次洗涤完毕后,去除洗涤液,加入适量的DAB染色工作液,确保样品能够被充分覆盖。 4. 在室温避光条件下孵育样品,时间可以在3-30分钟或更长时间(最长可达24小时),直至显色达到预期的深浅。 5. 去除DAB染色工作液,用蒸馏水洗涤1-2次,以终止显色反应。 6. 对于组织切片或细胞样品,显色反应终止后,如果需要可以使用中性红染色液进行染色以便于观察。对于膜,显色反应终止后,可以在室温下晾干并避光保存。 DAB显色试剂盒的应用 在弥漫性轴索损伤和免疫组织化学研究中的应用 弥漫性轴索损伤(DAI)的诊断一直是神经科学、法医病理学实践和研究中的一个重要难题,特别是对于伤后迅速死亡的DAI案例,缺乏客观准确的检测方法。 以往的检测方法主要在亚细胞水平上检测轴索损伤后的形态学变化和某些生物标记物的表达变化,主要通过银染法和免疫组织化学染色方法来检测轴索损伤。然而,这些方法在诊断DAI时存在一些缺陷,比如银染法无法发现急性期的轴索损伤,而各种免疫组织化学的生物标记物无法区分原发性和继发性的轴索断裂。同时,这些标记物严重依赖于轴索损伤后的形态改变,即只有在轴索出现明显形态改变的时间窗内才具有诊断价值。轴索损伤后,髓鞘、轴膜、轴索内微结构甚至轴索间隙的改变都可以引起损伤局部区域水分子的弥散特征改变,而且随着损伤时间的延长,水分子的弥散也可能出现一定的变化规律。 参考文献 [1] Low expression of DAB2IP contributes to malignant development and poor prognosis in hepatocellular carcinoma[J]. Xiaojing Zhang, Ning Li, Xianzheng Li, Wei Zhao, Yudan Qiao, Li Liang, Yanqing Ding. Journal of Gastroenterology and Hepatology. 2012(6) [2] Epothilone B Confers Radiation Dose Enhancement in DAB2IP Gene Knock-Down Radioresistant Prostate Cancer Cells[J]. Zhaolu Kong, Pavithra Raghavan, Daxing Xie, Thomas Boike, Sandeep Burma, David Chen, Arup Chakraborty, Jer-Tsong Hsieh, Debabrata Saha. International Journal of Radiation Oncology, Biology, Physics. 2010(4) [3] Inactivation of Ras GTPase-activating proteins promotes unrestrained activity of wild-type Ras in human liver cancer[J]. Diego F. Calvisi, Sara Ladu, Elizabeth A. Conner, Daekwan Seo, Jer-Tsong Hsieh, Valentina M. Factor, Snorri S. Thorgeirsson. Journal of Hepatology. 2010(2) [4] Decreased Expression of the RAS-GTPase Activating Protein RASAL1 Is Associated With Colorectal Tumor Progression[J]. Miki Ohta, Motoko Seto, Hideaki Ijichi, Koji Miyabayashi, Yotaro Kudo, Dai Mohri, Yoshinari Asaoka, Motohisa Tada, Yasuo Tanaka, Tsuneo Ikenoue, Fumihiko Kanai, Takao Kawabe, Masao Omata. Gastroenterology. 2009(1) [5] 李上勋. 弥漫性轴索损伤弥散张量成像及免疫组织化学研究[D]. 华中科技大学, 2012. 查看更多
小鼠抗C-MYC抗体的应用及其与胃癌的关联? 小鼠抗C-MYC抗体是一种HRP山羊多克隆抗体,能够特异性结合C-MYC。该抗体在多种实验中被广泛应用于C-MYC的检测,包括ICC/IF、Dotblot、ELISA、IHC-P、IHC-Fr、Immunomicroscopy和WB等。 抗原与抗体的特异性结合取决于它们之间的结构互补性和亲和性。除了分子构型的互补性外,抗原表位和抗体超变区必须密切接触才能产生足够的结合力。 c-myc基因是myc基因家族的重要成员之一,它是一种可易位基因和可调节基因,也是一种促进细胞分裂和肿瘤发展的基因。C-myc基因的产物是62KD的磷酸化蛋白P62c-mgc,它在细胞核内定位,具有转化细胞的能力,并在调节细胞生长、分化和恶性转化中发挥作用。 C-Myc蛋白的结构包括转录激活区、非特异DNA结合区、核靶序列、碱性区、螺旋一环一螺旋(HLH)和亮氨酸拉链区。在已知的转录因子中,C-Myc蛋白可以介导蛋白的寡聚化,并以特异性序列方式与DNA相互作用。 研究发现,C-Myc蛋白的碱性区在与DNA结合时会形成螺旋结构。该区域是C-Myc蛋白与DNA特异序列结合的部位。 褪黑素对小鼠胃癌c-Myc和p53表达的影响研究 本研究旨在探讨褪黑素对胃癌相关基因c-Myc和p53表达的影响,并研究其可能的抑制肿瘤机制。 研究方法如下: 建立小鼠前胃癌细胞株MFC褪黑素干预模型,观察细胞形态变化。 建立荷胃癌小鼠模型,给予不同浓度褪黑素干预,并观察肿瘤生长情况。 应用免疫细胞化学染色方法定位细胞中c-Myc和p53蛋白的表达。 应用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹技术分析褪黑素干预后细胞和肿瘤组织中c-Myc和p53的表达变化。 应用免疫组织化学方法定量检测肿瘤组织中c-Myc和p53蛋白的表达变化。 参考文献 [1] Gryko M, Pryczynicz A, Guzińska-Ustymowicz K, Kamocki Z, Zar?ba K, Kemona A, K?dra B. Immunohistochemical assessment of apoptosis-associated proteins: p53, Bcl-xL, Bax and Bak in gastric cancer cells in correlation with clinical and pathomorphological factors. Advances in Medical Sciences. 2012(1). [2] B?ckelman C, Koskensalo S, Hagstr?m J, Lundin M, Ristim?ki A, Haglund C. CIP2A overexpression is associated with c-Myc expression in colorectal cancer. Cancer Biology & Therapy. 2012(5). [3] Ford AC, Axon AT. Epidemiology of Helicobacter pylori infection and Public Health Implications. Helicobacter. 2010. [4] Ding SZ, Goldberg JB, Hatakeyama M. Helicobacter pylori infection, oncogenic pathways and epigenetic mechanisms in gastric carcinogenesis. Future Oncol. 2010(5). [5] Gong Xi. 褪黑素对小鼠胃癌c-Myc和p53表达的影响[D]. 福建医科大学, 2012.查看更多