兔抗体测序服务的应用及优势? 背景 兔抗体测序服务采用了一种名为"Database Assisted Shotgun Sequencing"(DASS)的技术,结合了鸟枪法和抗体序列数据库,为兔抗体测序提供了卓越的服务。兔抗体具有高特异性和亲和性,对于多克隆抗体和单克隆抗体都非常重要。近年来,兔单克隆抗体的应用越来越受到关注,因为兔单克隆抗体可以进行无限量的生产供应。 人和小鼠都有五种类型的抗体,而兔只有其中的四种。兔单克隆抗体主要是IgG类型,但兔只有一种IgG亚型。由于兔与大部分研究用模式生物有较大的种间距,因此在过去的十几年里,人们一直在努力制备兔单克隆抗体。与小鼠单抗相比,兔单抗具有相似的特异性和较高的灵敏度,这使得兔单抗具有更高的稀释比。此外,对于某些情况下的染色效果,不需要进行抗原修复操作。 应用 兔抗体测序服务可以用于兔单克隆抗体的筛选和鉴定。通过使用兔抗体测序服务,可以对兔单克隆抗体进行筛选和鉴定,以牛血清蛋白和卵清蛋白为载体蛋白,合成人工抗原。通过免疫兔脾细胞和骨髓瘤细胞的杂交,可以获得稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株。然后,通过兔抗体测序服务对单个杂交细胞进行兔抗体鉴定,从而筛选出只分泌特定抗体的杂交细胞。 优势 DASS(Database Assisted Shotgun Sequencing)技术利用先进的质谱仪和强大的数据处理算法,生成大量序列信息,并使用最新的计算程序对MS/MS光谱进行从头测序。与传统测序方法相比,DASS技术可以提取更多的目标抗体序列信息。传统测序方法只能检测蛋白消化后的部分肽段序列,并与已知的蛋白数据库进行比对,推算出可能性较高的蛋白和序列。而蛋白质从头测序技术可以根据肽键断裂处的离子质量差推断氨基酸序列,不依赖任何蛋白质数据库,可以对未知蛋白质进行精准测序。 蛋白质序列的准确测定对于研究蛋白功能表位、检测商业单克隆抗体、疫苗和试剂盒等药物具有重要作用。虽然目前已有很多对蛋白质测序的研究,但是对蛋白质精准测序的速度和准确性仍然有待提高。 参考文献 [1] Identification of turkey biliary metabolites of ractopamine hydrochloride and the metabolism and distribution of synthetic [14C]ractopamine glucuronides in the turkey (J). Smith D J, Feil V J and Paulson G D. 2000. [2] Effects of ractopamine at different dietary protein levels on growth performance and carcass characteristics in finishing pigs (J). Xiao R J, Xu Z R and Chen H L. Animal Feed Science and Technology. 1999. [3] Effects of ractopamine HCl stereoisomers on growth, nitrogen retention, and carcass composition in rats (J). Ricke E A, Smith D J, Feil V J, Larsen G L and Caton J S. The Journal of Animal Ecology. 1999. [4] Growth characteristics of rats receiving ractopamine hydrochloride and the metabolic disposition of ractopamine hydrochloride after oral or intraperitoneal administration (J). Smith D J and Paulson G D. The Journal of Animal Ecology. 1994. [5] Capillary electrophoretic separation and quantitation of ractopamine stereoisomers using cyclodextrins as chiral additives (J). Inout T and Chang J P. Journal of Liquid Chromatography and Related Technologies. 2003. [6] New animal drugs for use in animal feeds: Ractopamine hydrochloride (J). FDA. Federal Register. 2000. [7] Development of an immunoassay for the β-adrenergic agonist ractopamine (J). Shelver W L and Smith D J. Journal of Immunoassay. 2000. [8] 张建群, 杨扬, 王艺熹, 张铭, 裘霁, 郑晓冬. β-肾上腺素受体激动剂莱克多巴胺兔单克隆抗体的制备[J]. 农业生物技术学报, 2007(03): 398-403. 查看更多
6磷酸果糖激酶抗体的应用及其在结直肠癌中的研究意义是什么? 背景 [1-3] 6磷酸果糖激酶抗体是一种能够特异性结合6磷酸果糖激酶的免疫蛋白。该抗体是通过将6磷酸果糖激酶注射到无菌动物体内进行系统免疫后,在其血清中纯化制得的高纯度免疫蛋白。6-磷酸果糖激酶是糖酵解途径中的关键酶,由四个亚基组成,是一个四聚体。该酶的活性受到ATP/AMP和H+浓度的显著影响。目前认为6-磷酸果糖激酶的催化效率最低,因此它是糖酵解的限速酶。 应用 [4][5] 用于6-磷酸果糖-2-激酶在结直肠癌中的表达、临床意义及作用研究 结直肠癌(colorectal cancer, CRC)是人类最常见的消化系统恶性肿瘤之一,其发生率和死亡率呈明显上升趋势。肿瘤细胞侵袭生长和远处转移需要大量的营养和能量代谢,因此肿瘤细胞需要调节自身能量代谢状态以满足其快速生长和侵袭转移的需求,即代谢重编程。其中,"有氧糖酵解"是肿瘤糖代谢的主要方式,抑制糖酵解可以明显抑制肿瘤增殖和侵袭转移。 6-磷酸果糖激酶-2/果糖双磷酸酶-2(6-Phosphofructokinase-2/fructose-2,6-bisphosphatase, PFKFB)催化合成反应Fru-6-P+ATP→Fru-2,6-BP+ADP和水解反应Fru-2,6-BP+H2O→Fru-6-P+P。2,6-双磷酸果糖是6-磷酸果糖激酶-1(6-phosphofructo-1-kinase, PFK-1)的变构激活剂和糖酵解最有效的刺激剂。研究了PFKFB在CRC和癌旁组织中的表达情况,评估了PFKFB与HIF-1α之间的表达相关性,并探讨了其与患者临床病理特征、预后等的关系。从中选出对CRC患者预后相关性最大的基因作为目的基因,并观察目的基因敲低后对CRC细胞糖代谢、增殖和侵袭转移能力的影响。这为临床上CRC患者的预后指标和糖代谢靶向治疗提供了新的对策和思路。 参考文献 [1]Prevention of colorectal cancer:How many tools do we have in our basket?[J].Luca Roncucci,Francesco Mariani.European Journal of Internal Medicine.2015 [2]The potential role of HIF on tumour progression and dissemination[J].Sandeep Unwith,Hailin Zhao,Lindsay Hennah,Daqing Ma.Int.J.Cancer.2015(11) [3]Heterogeneity of glycolysis in cancers and therapeutic opportunities[J].Marc O.Warmoes,Jason W.Locasale.Biochemical Pharmacology.2014 [4]Hypoxia-Inducible Factor 1 and Cardiovascular Disease[J].Gregg L.Semenza.Annual Review of Physiology.2014 [5]魏莱.6-磷酸果糖-2-激酶在结直肠癌中的表达、临床意义及作用[D].第三军医大学,2017. 查看更多