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跑胶怎么会太多杂带？ 是酶，还是引物啊？还是退火温度影响？查看更多 4个回答 . 17人已关注

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浅析细胞转染效率低下的原因？ 1、细胞太少或细胞密度太大细胞密度对转染效率有一定的影响。不同的转染试剂，要求转染时的最适细胞密度各不相同，即使同一种试剂，也会因不同的细胞类型或应用而异。转染时过高或者过低的细胞密度会导致转染效率降低，乃至表达水平偏低。因此如果选用新的细胞系或者新的转染试剂，最好能够进行优化实验并为以后的实验建立一个稳定方法，包括适当的接种量和培养时间等。阳离子脂质体具有微量的细胞毒性而往往需要更高的铺板密度或者更多的悬浮细胞数，有的要求细胞90%汇片；而有些多胺或者非脂质体的配方则要求在40%-80%之间，尽量在细胞最适的生理状态下转染，以求最佳的转染效果。 2、电压过大做电转的时候，如果电压太大，往往会发生细胞大量死亡的情况。不同的细胞，需要的电压是不一样的。 3、未加血清血清一度曾被认为会降低转染效率，老一代的转染方法往往要求转染前后洗细胞或者在无血清培养基条件下转染，但有些对此敏感的细胞如原代细胞会受到损伤，甚至死亡导致转染效率极低。不过转染产品配方几经革新后的今天，对于主流的转染试剂来说，血清的存在已经不会影响转染效率，甚至还有助于提高转染效率，如阳离子聚合物等。转染后未及时加入血清，会导致细胞大量死亡。一般要在转染后的4-6小时换液且换为有血清的培养基。也可以在原来的无血清培养基里面滴加血清。 4、细胞污染细胞污染也是造成细胞死亡，转染效率低下的一大原因。首先，转染细胞用的质粒必须保证无菌。而现在市场上的一般的质粒提取试剂盒都做不到绝对无菌。如果同一个实验室同时培养不同种类的细胞，那就可能发生交叉污染，即使遵循最严格的分离操作规程这种情况也有可能发生。 5、转染载体的构建转染载体的构建（病毒载体，质粒DNA，RNA，PCR产物，寡核苷酸等）也影响转染结果。病毒载体对特定宿主细胞感染效率较高，但不同病毒载体有其特定的宿主，有的还要求特定的细胞周期，如逆转录病毒需侵染分裂期的宿主细胞，此外还需考虑一些安全问题（如基因污染）。除载体构建外，载体的形态及大小对转染效率也有不同的影响，如前面提到的超螺旋及线性DNA对瞬时和稳定转染的影响。如果基因产物对细胞有毒性作用，转染也很难进行，因此选择组成或可调控，强度合适的启动子也很重要，同时做空载体及其它基因的相同载体构建的转染正对照可排除毒性影响的干扰。转染用的质粒首先要保证数量，一般为2μg以上。质粒纯度不够或者含有细菌LPS或其他对细胞有毒害作用的物质，也会影响转染效率。这个时候，就应该对质粒进行纯化和浓缩。 6、试剂过期有时候转染效率低下，还要考虑会不会存在试剂过期的情况。 7、不注意细节在转染之前更换一次37℃预温的培养基，可提高转染效率。脂质体和DNA/RNA混合物应当一滴一滴地滴下来，从培养皿一边滴到另一边，边滴边轻摇培养皿，以确保均匀分布和避免局部高浓度。这些都是一些细枝末节，但是，如果不注意的话，也会造成转染效率低下。 8、细胞状态不好有时会存在不恰当的细胞密度，转染时融合度应为70%-90%。细胞状态不好，会导致转染效率低下。一般进行转染的细胞应该处于对数生长期。如果是贴壁细胞的话，贴壁率应该在70-80%；如果是悬浮细胞的话，应该是6X105个/孔（24孔板），一般是转染前一天换液，转染前用无血清培养基或PBS洗细胞一次。转染的整个过程都不应该有抗生素。 9、在转染过程中使用抗菌素在转染过程中不要使用氯霉素，青霉素或链霉素，因为阳离子脂质体试剂使细胞更敏感。对于稳定转染，筛选抗生素加入的太快，在加入筛选性抗生素前至少预留24-48h使细胞表达抗性基因。查看更多 1个回答 . 15人已关注

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含量计算？ 已知标准曲线及吸光度，怎么求含量及浓度查看更多 3个回答 . 19人已关注

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PID管道编号？ 管道材质发生变化，管道号需要重新编号吗？如果一根管道先后走两种不同的介质，其管道的物料代号又该如何命名？查看更多 1个回答 . 5人已关注

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硅藻土改性？ 有童鞋做过硅藻土上负载Fe3+或者Al3+离子吗查看更多 2个回答 . 4人已关注

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PAMAM合成与纯化（请江湖大神伸手救救将毕业的小硕）？发帖背景：小硕，半路出家，跟的小老板在做dendrimer，所以毕业课题做dendrons，因为设计的分子不是完整的PAMAM，所以不能买现成的，要自己合发帖目的：希望江湖大神能够给小女子指点一二、不求倾其所有，但求真心实意；如果有相同的问题待解决，希望能够讨论共同进步研究困境：（1）依据D. A. Tomalia1985年早期的文献和专利，和一些一级期刊的合成条件合成G0.5、G1.0、G1.5，目前发现G0.5的迈克尔加成反应不像理论上能够完全反应、基本无副反应；过柱子纯化，但只能得到50-60%的G0.5（基本所有的文献都能得到98%以上），对反应试剂进行除水重蒸馏、反应溶剂定量、N2保护，反应温度进行控制，均没有得到改善，反应48h后TLC判断反应终点，反应起始物仍有一部分没有反应？？？不明白噢；（2）G1.5产物纯化困难，使用 EA:MeOH（30:1）洗脱，基本得不到纯的产物，要疯了要疯了。。。（3）PAMAM合成的难点在纯化？？？星语心愿：真心科研、求帮助、求解脱查看更多 3个回答 . 1人已关注

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酵母表达公司推荐？ 有哪些做酵母表达比较靠谱的公司，可以推荐几个吗查看更多 2个回答 . 11人已关注

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纤维素气凝胶的成型样子是如何的? 我做了好多次纤维素气凝胶了，按照一些文献要求调节ph，可是调节ph后，水凝胶变硬了，分散不均匀。如果不调节ph，就是很均匀的状态。大家是怎么做的呀？下图是未调节的状态如果有人知道，可以直接回复帖子，或者加我qq.1536334937 真是麻烦大家了查看更多 1个回答 . 13人已关注

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想了解下硅丙乳液中有机硅含量能占总单体量的多少? 我添加7%的A151，总是有部分凝胶，文献上那么高的添加量咋做的？查看更多 1个回答 . 10人已关注

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一起交流交流——能保持乳白的乳胶避孕套制造方法？现本人最近一直苦恼如何做出保持乳白色的天然橡胶膜套，采用浸泡的方式制样。现有的硫化体系是采用(S/ZnO/ZDC/Px/BHT老化剂264/ 干酪素 /NF），可是现有样品老化（70℃加速老化）一段时间都会出现发黄现象。市面上杜蕾斯乳胶套都不会发黄，说明天然乳胶是有办法达到不发黄的效果的。有对这方面专家或者有了解的大神们一起交流交流。感谢拉！！分享网上一篇类似硫化方法 http://www.doc88.com/p-310986102454.html （新人金币不多，分分钟试过金币少于15个不能回帖尴尬。）查看更多 3个回答 . 8人已关注

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做SPEEK复合膜，用哪种型号的PEEK比较好？ 想要做SPEEK复合膜，用哪种型号的PEEK比较好呢？查看更多 1个回答 . 11人已关注

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磁畴尺寸、形状对磁性能的影响？磁畴尺寸、形状对磁性能有什么影响，尤其是饱和磁化强度。磁畴从较大尺寸，不规则形状变为小尺寸、接近圆形且均匀分布，对饱和磁化强度有何影响？有没有相关的文献。查看更多 2个回答 . 4人已关注

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Au纳米粒子？ 想要浓缩50nm左右的Au纳米粒子，需要用什么规格的超滤管来浓缩。查看更多 2个回答 . 13人已关注

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核电（Nuclear Power）？ 查看更多 1个回答 . 8人已关注

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沸点？ 查看更多 1个回答 . 15人已关注

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过柱子干法装样？ 干法装样的时候可能样品加的太快了，胶面被砸的不平整（接触面一边高一边低），影响大么？查看更多 5个回答 . 16人已关注

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亚甲基蓝的DPV氧化峰产生过程如何表示? 万能的朋友，现在是用MB修饰的电极扫了DPV，范围-0.5V~0.1 V，对应MB的氧化峰，求助涉及到MB怎么反应哇，失几个电子，生成什么东西呢？查看更多 3个回答 . 18人已关注

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光催化二氧化碳浓度测定？ 没有仪器情况下用什么简便方法可以测定二氧化碳浓度查看更多 2个回答 . 16人已关注

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请问谁那里有近几年来降解甲基橙的文献啊？ 请问谁那里有近几年来降解甲基橙的文献啊，越多越好查看更多 1个回答 . 13人已关注

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关于国内低温机封技术进步的交流？目前-196℃低温机械密封属于比较高端的技术，材料非常重要。低温机械密封分为低压和高压两者外观一样，内部材料，设计，价格，就完全不一样了。特别是-196℃低温干气密封同样分为低压和高压，左旋和右旋。干气密封特别金贵普通低温干气密封也要好几万，高压的干气密封10多万到20多万。目前国内大部分使用进口产品，严重制约了生产效率，又造成成本居高不下，钱都被国外赚走不少。加上国内国情，很多人没有担当精神，高端机封国产很难有机会使用。往往是先输出给国外，然后到国内。其实我们国内也有很多优秀的生产设计厂家。通过多年的努力，设计能力，加工技术，材料把关很多方面完全超越了进口产品，时间能证明一切，让中国制造更加强大。感兴趣的朋友可以留言大家交流低温密封技术，让大家共同进步。查看更多 2个回答 . 18人已关注

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简介

职业：山东鸿基换热技术有限公司 - 化工研发

学校：郑州大学 - 化工学院

地区：黑龙江省

个人简介：最成功的说谎者是那些使最少量的谎言发挥最大的作用的人。查看更多

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