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全基因组重测序是对已有参考基因组序列的物种进行个体或群体全基因组测序的过程。通过与参考基因组序列的比对，可以检测出全基因组范围的各种变异信息，如单核苷酸多态（ＳＮＰ）、插入缺失突变（ＩｎＤｅｌ）、拷贝数变异（ＣＮＶ）和机构变异（ＳＶ），从而获得个体或群体的分子遗传特征。全基因组重测序在遗传变异检测、性状基因定位、遗传图谱构建和遗传进化研究等方面有广泛应用。
全基因组重测序数据分析的关键一步是序列比对（ｍａｐｐｉｎｇ）。比对过程一般分为两步：首先归类整理ｒｅａｄｓ数据或参考基因组序列，然后使用适当的算法进行比对和定位ｒｅａｄｓ序列。
基因组重测序在动物、植物、微生物和昆虫等方面都有广泛的应用。通过基因比对，可以预测与动物重要性状有关的候选基因，定位QTL，分析群体进化过程等。在植物、微生物和昆虫方面，基因组重测序有助于分子育种、功能和进化研究。研究结果有助于理解各种进化力如何相互影响，从而影响相关物种之间的基因组进化。
全基因组重测序可以全面扫描基因组上的变异信息，一次性挖掘大量的生物标记物。该技术具有高准确性、良好的可重复性和精确的定位，已被广泛应用于疾病和癌症的基因组研究。
[1] 李国治，邓卫东。基因组测序技术及其应用研究进展。安徽农业科学，Ｊ．Ａｎｈｕｉ Ａｇｒｉｃ．Ｓｃｉ．２０１８，４６（２２）：２０－２２，２５
[2] 宋志芳，芦春莲，曹洪战.全基因组重测序及其在动物育种的研究进展。畜牧与兽医2017年第49卷第11期
显示全部全基因组重测序是对已有参考基因组序列的物种进行个体或群体全基因组测序的过程。通过与参考基因组序列的比对，可以检测出全基因组范围的各种变异信息，如单核苷酸多态（ＳＮＰ）、插入缺失突变（ＩｎＤｅｌ）、拷贝数变异（ＣＮＶ）和机构变异（ＳＶ），从而获得个体或群体的分子遗传特征。全基因组重测序在遗传变异检测、性状基因定位、遗传图谱构建和遗传进化研究等方面有广泛应用。
全基因组重测序数据分析的关键一步是序列比对（ｍａｐｐｉｎｇ）。比对过程一般分为两步：首先归类整理ｒｅａｄｓ数据或参考基因组序列，然后使用适当的算法进行比对和定位ｒｅａｄｓ序列。
基因组重测序在动物、植物、微生物和昆虫等方面都有广泛的应用。通过基因比对，可以预测与动物重要性状有关的候选基因，定位QTL，分析群体进化过程等。在植物、微生物和昆虫方面，基因组重测序有助于分子育种、功能和进化研究。研究结果有助于理解各种进化力如何相互影响，从而影响相关物种之间的基因组进化。
全基因组重测序可以全面扫描基因组上的变异信息，一次性挖掘大量的生物标记物。该技术具有高准确性、良好的可重复性和精确的定位，已被广泛应用于疾病和癌症的基因组研究。
[1] 李国治，邓卫东。基因组测序技术及其应用研究进展。安徽农业科学，Ｊ．Ａｎｈｕｉ Ａｇｒｉｃ．Ｓｃｉ．２０１８，４６（２２）：２０－２２，２５
[2] 宋志芳，芦春莲，曹洪战.全基因组重测序及其在动物育种的研究进展。畜牧与兽医2017年第49卷第11期
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全基因组测序是对未知基因组序列的物种进行个体的基因组测序。全基因组测序经历了三代的技术发展。第一代测序技术是以Sanger的双脱氧链终止法和Maxam化学降解法为基础发展而来的各种DNA测序技术。第二代测序技术是在第一代技术的基础上不断改进，形成了以高通量测序为特点的技术。第三代测序技术是以单分子测序技术为基础的新一代测序方式。
全基因组测序技术在多个领域有着广泛的应用。首先，它可以用于罕见病例的病因学诊断，通过定位基因序列的突变位点，为临床治疗提供新的思路和方法。其次，它可以用于流行病和常见病的预测和治疗，通过研究普通疾病的致病原，发现罕见变异并预测发病风险。此外，全基因组测序技术还可以应用于癌症研究、遗传学、个性化治疗以及瘢痕研究等领域。
[1] 滕国栋综述，陈敏亮审校。全基因组测序技术的发展和应用。中闭美容医学2013年2月第22卷第4期ChineseJournalofAestheticMedicine．Feb．2013．V01．22．No．4.
[2] 李桂澜，匡华.高通量测序技术在食品微生物检测中的应用。第10卷第15期2019年8月食品安全质量检测学报
显示全部全基因组测序是对未知基因组序列的物种进行个体的基因组测序。全基因组测序经历了三代的技术发展。第一代测序技术是以Sanger的双脱氧链终止法和Maxam化学降解法为基础发展而来的各种DNA测序技术。第二代测序技术是在第一代技术的基础上不断改进，形成了以高通量测序为特点的技术。第三代测序技术是以单分子测序技术为基础的新一代测序方式。
全基因组测序技术在多个领域有着广泛的应用。首先，它可以用于罕见病例的病因学诊断，通过定位基因序列的突变位点，为临床治疗提供新的思路和方法。其次，它可以用于流行病和常见病的预测和治疗，通过研究普通疾病的致病原，发现罕见变异并预测发病风险。此外，全基因组测序技术还可以应用于癌症研究、遗传学、个性化治疗以及瘢痕研究等领域。
[1] 滕国栋综述，陈敏亮审校。全基因组测序技术的发展和应用。中闭美容医学2013年2月第22卷第4期ChineseJournalofAestheticMedicine．Feb．2013．V01．22．No．4.
[2] 李桂澜，匡华.高通量测序技术在食品微生物检测中的应用。第10卷第15期2019年8月食品安全质量检测学报
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基因治疗是一种新兴的生物医学技术，通过将正常遗传基因或治疗遗传基因迁移到人类靶细胞中，以改正遗传基因缺陷或发挥疗效，从而超越传统治疗的目标。与传统治疗不同，基因治疗直接针对疾病的根本原因——遗传基因异常。
随着人类基因组计划和精准医学计划的实施，我们对分子水平的认知有了突破。基因编辑是一种常用的研究遗传性疾病的基因治疗方法，通过对实验动物进行基因编辑，可以获得基因缺陷动物或纠正已有的基因缺陷动物。
基因治疗的关键是将具有相应功能的基因片段导入基因缺陷患者的细胞中。这一导入过程通常依赖于病毒基因转运载体，目前常用的病毒基因转运载体有慢病毒载体、腺病毒载体和腺相关病毒载体。
[1] 顾湘，郭维维，杨仕明。基因治疗与遗传性耳聋。Chinese Scientific Journal of Hearing and Speech Rehabilitation. doi：lO．3969/j．issn．1672-4933．2019．04．009
[2] Lander Es. The heroes of CRISPR[J]. Cell, 2016, 164(1-2): 18-28.
显示全部基因治疗是一种新兴的生物医学技术，通过将正常遗传基因或治疗遗传基因迁移到人类靶细胞中，以改正遗传基因缺陷或发挥疗效，从而超越传统治疗的目标。与传统治疗不同，基因治疗直接针对疾病的根本原因——遗传基因异常。
随着人类基因组计划和精准医学计划的实施，我们对分子水平的认知有了突破。基因编辑是一种常用的研究遗传性疾病的基因治疗方法，通过对实验动物进行基因编辑，可以获得基因缺陷动物或纠正已有的基因缺陷动物。
基因治疗的关键是将具有相应功能的基因片段导入基因缺陷患者的细胞中。这一导入过程通常依赖于病毒基因转运载体，目前常用的病毒基因转运载体有慢病毒载体、腺病毒载体和腺相关病毒载体。
[1] 顾湘，郭维维，杨仕明。基因治疗与遗传性耳聋。Chinese Scientific Journal of Hearing and Speech Rehabilitation. doi：lO．3969/j．issn．1672-4933．2019．04．009
[2] Lander Es. The heroes of CRISPR[J]. Cell, 2016, 164(1-2): 18-28.
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在获得一个基因序列后，需要进行生物信息学分析，以发掘其中的信息并指导进一步的实验研究。基因序列分析可以通过多种方法，如染色体定位分析、内含子／外显子分析、ORF分析、表达谱分析等，来阐明基因的基本信息。此外，通过启动子预测、CpG岛分析和转录因子分析等方法，可以识别调控区的顺式作用元件，为基因的调控研究提供基础。另外，通过蛋白质基本性质分析、疏水性分析、跨膜区预测、信号肽预测、亚细胞定位预测和抗原性位点预测等方法，可以对基因编码蛋白的性质进行初步判断和预测。特别是通过疏水性分析和跨膜区预测，可以预测基因是否为膜蛋白，从而对实验研究方向的确定具有重要参考意义。
通过对H9N2亚型禽流感病毒分离毒株的HA基因进行同源性、遗传进化和基因序列分析，为我国H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化提供了数据。通过继续流感病毒的监测和研究，可以为该亚型禽流感的防控和疫苗研制提供参考依据。
[1]陈朗，彭乔烽，刘云红，郑天宇，朱乔峰，刘丽霞。奶牛DQA2基因序列特征分析。图分类号：S823.3 文献标识码：A 文章编号：1004-4264（2019）06-0001-05
[2]杨志远,林健,王小蕾,刘立新,赵际成,潘洁,刘月焕,段会娟。一株H9N亚型禽流感病毒的鉴定与HA基因序列分析。动物医学进展,2019 ,40 (9):13-18
显示全部在获得一个基因序列后，需要进行生物信息学分析，以发掘其中的信息并指导进一步的实验研究。基因序列分析可以通过多种方法，如染色体定位分析、内含子／外显子分析、ORF分析、表达谱分析等，来阐明基因的基本信息。此外，通过启动子预测、CpG岛分析和转录因子分析等方法，可以识别调控区的顺式作用元件，为基因的调控研究提供基础。另外，通过蛋白质基本性质分析、疏水性分析、跨膜区预测、信号肽预测、亚细胞定位预测和抗原性位点预测等方法，可以对基因编码蛋白的性质进行初步判断和预测。特别是通过疏水性分析和跨膜区预测，可以预测基因是否为膜蛋白，从而对实验研究方向的确定具有重要参考意义。
通过对H9N2亚型禽流感病毒分离毒株的HA基因进行同源性、遗传进化和基因序列分析，为我国H9N2亚型禽流感病毒的遗传进化提供了数据。通过继续流感病毒的监测和研究，可以为该亚型禽流感的防控和疫苗研制提供参考依据。
[1]陈朗，彭乔烽，刘云红，郑天宇，朱乔峰，刘丽霞。奶牛DQA2基因序列特征分析。图分类号：S823.3 文献标识码：A 文章编号：1004-4264（2019）06-0001-05
[2]杨志远,林健,王小蕾,刘立新,赵际成,潘洁,刘月焕,段会娟。一株H9N亚型禽流感病毒的鉴定与HA基因序列分析。动物医学进展,2019 ,40 (9):13-18
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基因突变是指基因组DNA分子发生的突然的、可遗传的变异现象，与许多疾病的发生密切相关。例如，癌症通常是由一系列体细胞DNA变化导致的失控细胞增殖引起的，其中的“变化”指的是特定的DNA序列突变。随着生物医学领域测序技术的飞速发展，越来越多面向临床样本的基因测序实验产生了大量的基因突变信息，为临床的靶向治疗提供了指导。
面对多种基因突变类型，制定一种统一的命名方式来确定突变的名称对于突变数据的共享和使用具有极大意义。人类基因组变异学会（Human Genome Variation Society，HGVS）提出了一种标准的基因突变命名法，用于命名在DNA、RNA和蛋白序列中发现的突变，并对其进行长期维护和版本管理。目前，这种命名法已被广泛使用并被推荐为通用的基因突变命名法。
由于基因突变发生的随机性、不定向性以及基因作为一条核苷酸序列所具有的结构特性，基因突变的种类是非常多样的。根据其分子的大小，基因突变可分为小的DNA链内部的突变（包括单核苷酸突变、插入、删除、复制等）、大的染色体突变（拷贝数变异、易位、倒位等）以及基因融合等；根据其碱基突变对多肽链中氨基酸序列的影响，基因突变又可分为同义突变、错义突变和无义突变等；按照突变的致病程度，2013年美国医学遗传学和基因组学学院（American College of Medical Genetics and Genomics，ACMG）在重新修订的序列突变的标准和指南中将突变分为致病的、可能致病、意义不明确、可能良性和良性5个大类。
1. Den Dunnen JT, Dalgleish R, Maglott DR, et al. HGVS Recommendations for the Description of Sequence Variants: 2016 Update[J]. Human Mutation, 2016, 37(6): 564-569.
2. Richards S, Aziz N, Bale S, et al. Standards and guidelines for the interpretation of sequence variants: a joint consensus recommendation of the American College of Medical Genetics and Genomics and the Association for Molecular Pathology[J]. Genetics in Medicine, 2015, 17(5): 405-423.
显示全部基因突变是指基因组DNA分子发生的突然的、可遗传的变异现象，与许多疾病的发生密切相关。例如，癌症通常是由一系列体细胞DNA变化导致的失控细胞增殖引起的，其中的“变化”指的是特定的DNA序列突变。随着生物医学领域测序技术的飞速发展，越来越多面向临床样本的基因测序实验产生了大量的基因突变信息，为临床的靶向治疗提供了指导。
面对多种基因突变类型，制定一种统一的命名方式来确定突变的名称对于突变数据的共享和使用具有极大意义。人类基因组变异学会（Human Genome Variation Society，HGVS）提出了一种标准的基因突变命名法，用于命名在DNA、RNA和蛋白序列中发现的突变，并对其进行长期维护和版本管理。目前，这种命名法已被广泛使用并被推荐为通用的基因突变命名法。
由于基因突变发生的随机性、不定向性以及基因作为一条核苷酸序列所具有的结构特性，基因突变的种类是非常多样的。根据其分子的大小，基因突变可分为小的DNA链内部的突变（包括单核苷酸突变、插入、删除、复制等）、大的染色体突变（拷贝数变异、易位、倒位等）以及基因融合等；根据其碱基突变对多肽链中氨基酸序列的影响，基因突变又可分为同义突变、错义突变和无义突变等；按照突变的致病程度，2013年美国医学遗传学和基因组学学院（American College of Medical Genetics and Genomics，ACMG）在重新修订的序列突变的标准和指南中将突变分为致病的、可能致病、意义不明确、可能良性和良性5个大类。
1. Den Dunnen JT, Dalgleish R, Maglott DR, et al. HGVS Recommendations for the Description of Sequence Variants: 2016 Update[J]. Human Mutation, 2016, 37(6): 564-569.
2. Richards S, Aziz N, Bale S, et al. Standards and guidelines for the interpretation of sequence variants: a joint consensus recommendation of the American College of Medical Genetics and Genomics and the Association for Molecular Pathology[J]. Genetics in Medicine, 2015, 17(5): 405-423.
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基因敲除小鼠是通过基因敲除技术培养出的小鼠模型，常用于临床和科研实验中的动物模型。
基因敲除技术是一种新型分子生物学技术，起源于20世纪80年代，主要基于同源重组原理。它通过将标记基因定点地整合到目标细胞基因组的特定位点，实现对细胞内目的基因的敲除。
基因敲除技术已经广泛应用于动植物、微生物，有多种方法可供选择，包括同源重组法、随机插入突变法、RNA干扰法、ZFNs法、TALEs法，以及目前热门的CRISPR/Cas9系统介导的基因敲除技术。基于同源重组的方法包括RecA系统同源重组法、Red系统同源重组法、基于自杀载体的同源重组法和基于温敏型质粒的同源重组法。
[1] 王雪，黄建忠，李力。基因敲除技术在微生物中的应用。微生物学杂志，2019年8月，第39卷第4期。
显示全部基因敲除小鼠是通过基因敲除技术培养出的小鼠模型，常用于临床和科研实验中的动物模型。
基因敲除技术是一种新型分子生物学技术，起源于20世纪80年代，主要基于同源重组原理。它通过将标记基因定点地整合到目标细胞基因组的特定位点，实现对细胞内目的基因的敲除。
基因敲除技术已经广泛应用于动植物、微生物，有多种方法可供选择，包括同源重组法、随机插入突变法、RNA干扰法、ZFNs法、TALEs法，以及目前热门的CRISPR/Cas9系统介导的基因敲除技术。基于同源重组的方法包括RecA系统同源重组法、Red系统同源重组法、基于自杀载体的同源重组法和基于温敏型质粒的同源重组法。
[1] 王雪，黄建忠，李力。基因敲除技术在微生物中的应用。微生物学杂志，2019年8月，第39卷第4期。
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基因测序是通过测定基因的碱基序列来研究基因的技术。第一代测序技术是以Sanger的双脱氧链终止法和Maxam化学降解法为基础发展而来的，虽然操作过程复杂、耗时长、费用高昂，但易掌握且精确度高。随着现代生物技术和计算机技术的发展，第二代测序技术逐渐形成，具有高通量测序的特点，可以方便地对一个物种的基因组或转录组进行测序。第二代测序技术保持了高准确度，大大降低了测序成本并极大地提高了测序速度。而基于单分子测序技术的第三代测序技术虽然存在成本高和测序错误率高的缺陷，但仍然具有重要的意义。
近年来，基因测序已成为相关平台的常规操作，并被视为新的商业机会。然而，基因测序意味着个体基因密码的数字化，并可能被公开和滥用。基因作为生命的密码，一旦泄露，可能会对个体和国家构成损害，因此需要制定基本规则来约束。
1.滕国栋综述，陈敏亮审校。全基因组测序技术的发展和应用。中闭美容医学2013年2月第22卷第4期ChineseJournalofAestheticMedicine．Feb．2013．V01．22．No．4.
2.李桂澜，匡华.高通量测序技术在食品微生物检测中的应用。第10卷第15期2019年8月食品安全质量检测学报
显示全部基因测序是通过测定基因的碱基序列来研究基因的技术。第一代测序技术是以Sanger的双脱氧链终止法和Maxam化学降解法为基础发展而来的，虽然操作过程复杂、耗时长、费用高昂，但易掌握且精确度高。随着现代生物技术和计算机技术的发展，第二代测序技术逐渐形成，具有高通量测序的特点，可以方便地对一个物种的基因组或转录组进行测序。第二代测序技术保持了高准确度，大大降低了测序成本并极大地提高了测序速度。而基于单分子测序技术的第三代测序技术虽然存在成本高和测序错误率高的缺陷，但仍然具有重要的意义。
近年来，基因测序已成为相关平台的常规操作，并被视为新的商业机会。然而，基因测序意味着个体基因密码的数字化，并可能被公开和滥用。基因作为生命的密码，一旦泄露，可能会对个体和国家构成损害，因此需要制定基本规则来约束。
1.滕国栋综述，陈敏亮审校。全基因组测序技术的发展和应用。中闭美容医学2013年2月第22卷第4期ChineseJournalofAestheticMedicine．Feb．2013．V01．22．No．4.
2.李桂澜，匡华.高通量测序技术在食品微生物检测中的应用。第10卷第15期2019年8月食品安全质量检测学报
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基因甲基化是一种表观遗传修饰方式，通过甲基转移酶家族在胞嘧啶C5位上转移甲基，形成5-甲基胞嘧啶。这种修饰通常发生在富含CpG碱基的CpG岛上，并导致基因表达的稳定沉默。每个甲基化位点的状态由局部的DNA甲基转移酶、DNA去甲基化酶的活性和DNA转录效率决定，并受到表观遗传修饰网络的调控。为了探测全基因组范围内的甲基化状态，可以使用甲基化DNA免疫共沉淀测序技术，该技术通过抗5-甲基胞嘧啶抗体特异性结合DNA5-甲基胞嘧啶的方式，富集全基因组中的DNA甲基化区段，并进行高通量测序。
基因甲基化作为一种重要的表观遗传修饰策略，在原核生物、动物、植物等多种生物的基本生物学过程中发挥着重要作用。它通过稳定染色质结构、调控基因表达和参与基因重组等方式影响生物体的功能。在真菌中，DNA甲基化可能参与形态建成、逆境胁迫和次级代谢过程。目前，研究人员主要使用甲基化敏感扩增多态性（MSAP）技术来分析基因组范围内的甲基化状态变化，该技术利用同尾酶Hpa II和Msp II对CCGG序列中的胞嘧啶甲基化反应的不同。
1.黄金献,李栋,李聪,时庆,鞠秀丽。三维和二维培养的脐带间充质干细胞DNA甲基化水平比较。山东大学学报（医学版）第57卷第11期。
2.宋 爽，刘 宇，高 琪，赵 爽，王守现，宋庆港。高温胁迫下香菇基因组甲基化差异分析。中国食用菌 2019，38（10）：9-11，16。
显示全部基因甲基化是一种表观遗传修饰方式，通过甲基转移酶家族在胞嘧啶C5位上转移甲基，形成5-甲基胞嘧啶。这种修饰通常发生在富含CpG碱基的CpG岛上，并导致基因表达的稳定沉默。每个甲基化位点的状态由局部的DNA甲基转移酶、DNA去甲基化酶的活性和DNA转录效率决定，并受到表观遗传修饰网络的调控。为了探测全基因组范围内的甲基化状态，可以使用甲基化DNA免疫共沉淀测序技术，该技术通过抗5-甲基胞嘧啶抗体特异性结合DNA5-甲基胞嘧啶的方式，富集全基因组中的DNA甲基化区段，并进行高通量测序。
基因甲基化作为一种重要的表观遗传修饰策略，在原核生物、动物、植物等多种生物的基本生物学过程中发挥着重要作用。它通过稳定染色质结构、调控基因表达和参与基因重组等方式影响生物体的功能。在真菌中，DNA甲基化可能参与形态建成、逆境胁迫和次级代谢过程。目前，研究人员主要使用甲基化敏感扩增多态性（MSAP）技术来分析基因组范围内的甲基化状态变化，该技术利用同尾酶Hpa II和Msp II对CCGG序列中的胞嘧啶甲基化反应的不同。
1.黄金献,李栋,李聪,时庆,鞠秀丽。三维和二维培养的脐带间充质干细胞DNA甲基化水平比较。山东大学学报（医学版）第57卷第11期。
2.宋 爽，刘 宇，高 琪，赵 爽，王守现，宋庆港。高温胁迫下香菇基因组甲基化差异分析。中国食用菌 2019，38（10）：9-11，16。
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基因突变是一种随机且不定向的现象，其发生频率非常低。然而，通过定点突变技术，我们可以有针对性地对已知基因的特定碱基进行增删或转换，从而改变相应的氨基酸序列和蛋白质结构。因此，基因定点突变技术在蛋白质工程研究中扮演着重要的角色。
寡核苷酸介导的定点突变：首先，我们利用转基因技术将目标基因插入到M13噬菌体的正链DNA上，形成含有目标基因的单链DNA。然后，我们使用化学合成的含有突变碱基的寡核苷酸片段作为引物，启动单链DNA的复制过程。这段寡核苷酸引物将成为新合成的DNA子链的一部分。将其转入细胞后，经过不断复制，我们可以获得突变的DNA分子。
盒式定点突变：该方法利用一段人工合成的含有突变序列的寡核苷酸片段，取代野生型基因中相应的序列。
PCR介导的定点突变：利用PCR技术进行定点突变，不仅可以大量扩增突变体，还可以在所设计的引物的5'端加入合适的限制酶酶切位点，为PCR扩增产物的克隆提供方便。此外，基因编辑技术CRISPR/Cas9也可以用于构建基因定点突变的细胞株。
1. 胡文斌. 基因定点突变技术简介. 生物学教学, 2013年, 第38卷, 第12期.
2. 谭开秀, 刘承杰. 2000. 基因体外定点突变技术的研究进展. 前卫医药杂志, 17(4): 256-257.
3. 胡美浩. 1993. 定点突变及非定点突变技术的新进展. 生物工程进展, 13(6): 1-4. 显示全部
基因突变是一种随机且不定向的现象，其发生频率非常低。然而，通过定点突变技术，我们可以有针对性地对已知基因的特定碱基进行增删或转换，从而改变相应的氨基酸序列和蛋白质结构。因此，基因定点突变技术在蛋白质工程研究中扮演着重要的角色。
寡核苷酸介导的定点突变：首先，我们利用转基因技术将目标基因插入到M13噬菌体的正链DNA上，形成含有目标基因的单链DNA。然后，我们使用化学合成的含有突变碱基的寡核苷酸片段作为引物，启动单链DNA的复制过程。这段寡核苷酸引物将成为新合成的DNA子链的一部分。将其转入细胞后，经过不断复制，我们可以获得突变的DNA分子。
盒式定点突变：该方法利用一段人工合成的含有突变序列的寡核苷酸片段，取代野生型基因中相应的序列。
PCR介导的定点突变：利用PCR技术进行定点突变，不仅可以大量扩增突变体，还可以在所设计的引物的5'端加入合适的限制酶酶切位点，为PCR扩增产物的克隆提供方便。此外，基因编辑技术CRISPR/Cas9也可以用于构建基因定点突变的细胞株。
1. 胡文斌. 基因定点突变技术简介. 生物学教学, 2013年, 第38卷, 第12期.
2. 谭开秀, 刘承杰. 2000. 基因体外定点突变技术的研究进展. 前卫医药杂志, 17(4): 256-257.
3. 胡美浩. 1993. 定点突变及非定点突变技术的新进展. 生物工程进展, 13(6): 1-4.
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肠道是哺乳动物体内最大的消化器官，其中含有数量巨大的细菌菌群，形成了极其复杂的细菌微生态系统，肠道微生态系统中的菌群结构、数量和种类的变化与机体的健康和疾病有着密切的关系。粪便的主要成分是微生物的菌体和食物残渣，其中包含着重要的肠道微生物信息，可以间接地反映肠道微生物的变化情况。近年来随着分子生物学研究和技术的发展，利用分子生物学技术和方法从粪便中提取肠道微生物总DNA，并对相关疾病进行研究取得了许多突破。但是粪便中含有的成分非常复杂，其中含有的色素、多糖和纤维素等物质对TaqDNA聚合酶有抑制的作用；脂类、酸类、多酚等有机物在DNA提取过程中很难去除，这些杂质不但易导致目标DNA的降解，还直接影响到后续研究的准确性。因此，以粪便为标本提取细菌基因组DNA进行肠道微生态研究的关键是能否提取到高质量的粪便细菌基因组DNA。
(1)改良CTAB方法：分别在预处理过的500μL样品中加入30μL、10%SDS，3μL蛋白酶K（20g／L） ，4μL RNaseA后混匀，37°C水浴１h；每管中加入100μL NaCL（5mol／L） ，颠倒混匀后加入80μL的CTAB／NaCL（10%CTAB，0.7mol／L NaCL） ，轻轻混匀；放入65°C水浴１０min；加入等体积酚／氯仿／异戊醇（比例为25∶24∶1）混合液，混匀后12000r／min、离心10min，取上清；上清液中加入0.6倍体积的异丙醇，轻轻混匀，12000r／min、离心10min，弃上清；沉淀用1mL预冷的75%乙醇洗涤后，7500r／min离心5min，弃乙醇，在洁净工作台中稍加干燥，溶于30μL TE缓冲液中。
(2)试剂盒方法：将预处理好的样品，分别按照粪便细菌基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）说明书的步骤进行提取。
［１］吴林根，余观夏，王国兴．高校实验室安全全过程管理［J］ ．实验室研究与探索，2014，33(8) ：300-303．
［２］黄桂兰，刘景全，刘石磊，等．实验室安全的影响因素与保障体系［J］ ．实验室研究与探索，2014，33(7) ：301-304．
［３］李志红．100起实验室安全事故统计分析及对策研究［J］ ．实验技术与管理，2014，31(4) ：210-213．216
［４］罗国勋．质量管理与可靠性［M］ ．北京：高等教育出版社，2005．
［５］樊树海，蔡虹，王宇乾，等．基于截距的抽样特性曲线性能评价［J］ ．工业工程，2011(5) ：62-65．
［6］张杰１，张晓鹏１，李鹏高１，赵志强.小鼠粪便细菌基因组DNA提取方法比较。实验技术与管理 第34卷第12期2017年12月
显示全部肠道是哺乳动物体内最大的消化器官，其中含有数量巨大的细菌菌群，形成了极其复杂的细菌微生态系统，肠道微生态系统中的菌群结构、数量和种类的变化与机体的健康和疾病有着密切的关系。粪便的主要成分是微生物的菌体和食物残渣，其中包含着重要的肠道微生物信息，可以间接地反映肠道微生物的变化情况。近年来随着分子生物学研究和技术的发展，利用分子生物学技术和方法从粪便中提取肠道微生物总DNA，并对相关疾病进行研究取得了许多突破。但是粪便中含有的成分非常复杂，其中含有的色素、多糖和纤维素等物质对TaqDNA聚合酶有抑制的作用；脂类、酸类、多酚等有机物在DNA提取过程中很难去除，这些杂质不但易导致目标DNA的降解，还直接影响到后续研究的准确性。因此，以粪便为标本提取细菌基因组DNA进行肠道微生态研究的关键是能否提取到高质量的粪便细菌基因组DNA。
(1)改良CTAB方法：分别在预处理过的500μL样品中加入30μL、10%SDS，3μL蛋白酶K（20g／L） ，4μL RNaseA后混匀，37°C水浴１h；每管中加入100μL NaCL（5mol／L） ，颠倒混匀后加入80μL的CTAB／NaCL（10%CTAB，0.7mol／L NaCL） ，轻轻混匀；放入65°C水浴１０min；加入等体积酚／氯仿／异戊醇（比例为25∶24∶1）混合液，混匀后12000r／min、离心10min，取上清；上清液中加入0.6倍体积的异丙醇，轻轻混匀，12000r／min、离心10min，弃上清；沉淀用1mL预冷的75%乙醇洗涤后，7500r／min离心5min，弃乙醇，在洁净工作台中稍加干燥，溶于30μL TE缓冲液中。
(2)试剂盒方法：将预处理好的样品，分别按照粪便细菌基因组DNA提取试剂盒（离心柱型）说明书的步骤进行提取。
［１］吴林根，余观夏，王国兴．高校实验室安全全过程管理［J］ ．实验室研究与探索，2014，33(8) ：300-303．
［２］黄桂兰，刘景全，刘石磊，等．实验室安全的影响因素与保障体系［J］ ．实验室研究与探索，2014，33(7) ：301-304．
［３］李志红．100起实验室安全事故统计分析及对策研究［J］ ．实验技术与管理，2014，31(4) ：210-213．216
［４］罗国勋．质量管理与可靠性［M］ ．北京：高等教育出版社，2005．
［５］樊树海，蔡虹，王宇乾，等．基于截距的抽样特性曲线性能评价［J］ ．工业工程，2011(5) ：62-65．
［6］张杰１，张晓鹏１，李鹏高１，赵志强.小鼠粪便细菌基因组DNA提取方法比较。实验技术与管理 第34卷第12期2017年12月
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DKW培养基是一种含有丰富的大量和微量元素及维生素的培养基，适用于多种木本植物细胞培养和组织培养。为了配置DKW培养基，我们需要称取42.23g本品并溶解于1L蒸馏水或去离子水中，然后使用氢氧化钠调节pH值至6.2±0.1（25℃），加热煮沸溶解后进行高压灭菌。配置好的DKW培养基可以用于细胞培养的实验。
细胞培养是一种在无菌条件下模拟体内正常生理状态的方法，用于分离培养动物或植物组织细胞，并使其在体外培养容器中长期生长或繁殖。植物细胞培养是在离体条件下，通过将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体培养基中进行震荡培养，从而获得大量细胞群体的一种技术。根据培养对象和培养系统的不同，植物细胞培养可以分为多种类型。
牡丹是一种优良的观赏、药用和油料物种，因此对于牡丹试管苗的培养基选择非常重要。本研究以‘洛阳红’鳞芽为材料，从不同的培养基中研究了试管苗的形态指标、生理指标和组培环境条件对其生长的影响。研究结果表明，MS和DKW培养基对‘洛阳红’牡丹试管苗的生长效果较好。在适宜的光照条件下，提供适宜的变温条件也有助于试管苗的健康生长。
[1]Characterization of sequence-related amplified polymorphism markers analysis of tree peony bud sports[J].Xiaoyan Han,Liangsheng Wang,Zheng’an Liu,D.R.Jan,Qingyan Shu.Scientia Horticulturae.2007(3)
[2]Comparison of anthocyanins in non-blotches and blotches of the petals of Xibei tree peony[J].Jingjing Zhang,Liangsheng Wang,Qingyan Shu,Zheng’an Liu,Chonghui Li,Jie Zhang,Xiaolei Wei,Daike Tian.Scientia Horticulturae.2007(2)
[3]Micropropagation of tree peony(Paeonia suffruticosa)[J].Margherita Beruto,Luca Lanteri,Cristina Portogallo.Plant Cell,Tissue and Organ Culture.2004(2)
[4]Leaf traits as indicators of resource‐use strategy in floras with succulent species[J].FernandaVendramini,SandraDíaz,Diego E.Gurvich,Peter J.Wilson,KenThompson,John G.Hodgson.New Phytologist.2002(1)
[5]郭倩.不同培养基对‘洛阳红’牡丹试管苗生长的影响[D].河南科技大学,2014.
显示全部DKW培养基是一种含有丰富的大量和微量元素及维生素的培养基，适用于多种木本植物细胞培养和组织培养。为了配置DKW培养基，我们需要称取42.23g本品并溶解于1L蒸馏水或去离子水中，然后使用氢氧化钠调节pH值至6.2±0.1（25℃），加热煮沸溶解后进行高压灭菌。配置好的DKW培养基可以用于细胞培养的实验。
细胞培养是一种在无菌条件下模拟体内正常生理状态的方法，用于分离培养动物或植物组织细胞，并使其在体外培养容器中长期生长或繁殖。植物细胞培养是在离体条件下，通过将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体培养基中进行震荡培养，从而获得大量细胞群体的一种技术。根据培养对象和培养系统的不同，植物细胞培养可以分为多种类型。
牡丹是一种优良的观赏、药用和油料物种，因此对于牡丹试管苗的培养基选择非常重要。本研究以‘洛阳红’鳞芽为材料，从不同的培养基中研究了试管苗的形态指标、生理指标和组培环境条件对其生长的影响。研究结果表明，MS和DKW培养基对‘洛阳红’牡丹试管苗的生长效果较好。在适宜的光照条件下，提供适宜的变温条件也有助于试管苗的健康生长。
[1]Characterization of sequence-related amplified polymorphism markers analysis of tree peony bud sports[J].Xiaoyan Han,Liangsheng Wang,Zheng’an Liu,D.R.Jan,Qingyan Shu.Scientia Horticulturae.2007(3)
[2]Comparison of anthocyanins in non-blotches and blotches of the petals of Xibei tree peony[J].Jingjing Zhang,Liangsheng Wang,Qingyan Shu,Zheng’an Liu,Chonghui Li,Jie Zhang,Xiaolei Wei,Daike Tian.Scientia Horticulturae.2007(2)
[3]Micropropagation of tree peony(Paeonia suffruticosa)[J].Margherita Beruto,Luca Lanteri,Cristina Portogallo.Plant Cell,Tissue and Organ Culture.2004(2)
[4]Leaf traits as indicators of resource‐use strategy in floras with succulent species[J].FernandaVendramini,SandraDíaz,Diego E.Gurvich,Peter J.Wilson,KenThompson,John G.Hodgson.New Phytologist.2002(1)
[5]郭倩.不同培养基对‘洛阳红’牡丹试管苗生长的影响[D].河南科技大学,2014.
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神经干细胞程序冻存液是一种无血清细胞冷冻培养基，用于实验室研究目的。该产品经过了细菌、真菌和支原体检测，并采用冰袋保存运输。为了维持产品稳定性，请勿反复冻融相关产品。
神经干细胞程序冻存液具有以下特点：
神经干细胞的冻存步骤如下：
复苏步骤如下：
[1] 赵新利 杨波 宋来君 杜英 阮丽荣 李红伟 张志强，人胚神经干细胞的冻存与复苏。《郑州大学学报：医学版》2003年 第1期。
显示全部神经干细胞程序冻存液是一种无血清细胞冷冻培养基，用于实验室研究目的。该产品经过了细菌、真菌和支原体检测，并采用冰袋保存运输。为了维持产品稳定性，请勿反复冻融相关产品。
神经干细胞程序冻存液具有以下特点：
神经干细胞的冻存步骤如下：
复苏步骤如下：
[1] 赵新利 杨波 宋来君 杜英 阮丽荣 李红伟 张志强，人胚神经干细胞的冻存与复苏。《郑州大学学报：医学版》2003年 第1期。
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间质干细胞无蛋白非程序冻存液是一种特殊配方，专门用于冻存间质干细胞。它能够显著降低冻存过程中冰晶对细胞的损伤，提高细胞的复苏率和活力。与此同时，该冻存液不含任何外源蛋白成分，减少了细胞污染的机会。而且，使用该冻存液无需繁琐的程序冻存步骤，节省了大量时间和精力。该产品经过了细菌、真菌和支原体的检测，质量得到了有效控制。然而，需要注意的是，该产品仅供科研使用，不可用于治疗等其他方面。
该冻存液具有以下特点：
即用型产品，方便快捷；
复苏率高达90%，远超普通冻存液的70%效率；
无需程序冻存，细胞可直接置于-80°C冰箱，省事省时；
无血清无蛋白配方，成分明确，不影响细胞的生长和分化潜能及其他应用。
[1] 杨东斌 宋来君 杨波 李祥生；不同人羊膜间充质干细胞冻存液冻存细胞效果比较。郑州大学学报(医学版) 2009年3期。 显示全部
间质干细胞无蛋白非程序冻存液是一种特殊配方，专门用于冻存间质干细胞。它能够显著降低冻存过程中冰晶对细胞的损伤，提高细胞的复苏率和活力。与此同时，该冻存液不含任何外源蛋白成分，减少了细胞污染的机会。而且，使用该冻存液无需繁琐的程序冻存步骤，节省了大量时间和精力。该产品经过了细菌、真菌和支原体的检测，质量得到了有效控制。然而，需要注意的是，该产品仅供科研使用，不可用于治疗等其他方面。
该冻存液具有以下特点：
即用型产品，方便快捷；
复苏率高达90%，远超普通冻存液的70%效率；
无需程序冻存，细胞可直接置于-80°C冰箱，省事省时；
无血清无蛋白配方，成分明确，不影响细胞的生长和分化潜能及其他应用。
[1] 杨东斌 宋来君 杨波 李祥生；不同人羊膜间充质干细胞冻存液冻存细胞效果比较。郑州大学学报(医学版) 2009年3期。
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间充质干细胞无血清培养基通过避免传统含胎牛血清的培养基所带来的异源成分和成分不明确等缺点，采用一系列可替代胎牛血清的组分，包括必需和非必需氨基酸、维生素、激素、生长因子、有机和无机化合物以及其他补给成分。
1. 在实验开始前一小时，将无血清添加剂成分放置于2-8°C进行溶解，并轻轻摇晃试剂瓶使冻融的成分充分混合。
2. 使用75%酒精消毒试剂瓶的开口外壁。
3. 待试剂瓶上的酒精挥发干净后，无菌打开各个试剂瓶。
4. 将添加剂加入间充质干细胞无血清基础培养基中。
5. 无菌吸取基础培养基洗涤添加剂瓶，尽可能将添加剂的所有成分完整地加入基础培养基中。
6. 重复上述步骤两到三遍。
7. 轻轻摇晃基础培养基瓶子，使各种成分充分混匀，并将配制好的完全培养基放置于4℃保存。
该培养基适用于多种来源的人类间充质干细胞的生长，如脐带（UCM-hMSC）、骨髓（BM-hMSC）、脂肪组织（AT-hMSC）等。
[1] 杨婷、陈广华、薛胜利、乔曼、刘慧文、田竤、乔淑敏、陈峰、陈志哲、孙爱宁 吴德沛。血清和含胎牛血清培养基培养的脐带间充质干细胞生物学特性比较研究。中华血液学杂志 显示全部
间充质干细胞无血清培养基通过避免传统含胎牛血清的培养基所带来的异源成分和成分不明确等缺点，采用一系列可替代胎牛血清的组分，包括必需和非必需氨基酸、维生素、激素、生长因子、有机和无机化合物以及其他补给成分。
1. 在实验开始前一小时，将无血清添加剂成分放置于2-8°C进行溶解，并轻轻摇晃试剂瓶使冻融的成分充分混合。
2. 使用75%酒精消毒试剂瓶的开口外壁。
3. 待试剂瓶上的酒精挥发干净后，无菌打开各个试剂瓶。
4. 将添加剂加入间充质干细胞无血清基础培养基中。
5. 无菌吸取基础培养基洗涤添加剂瓶，尽可能将添加剂的所有成分完整地加入基础培养基中。
6. 重复上述步骤两到三遍。
7. 轻轻摇晃基础培养基瓶子，使各种成分充分混匀，并将配制好的完全培养基放置于4℃保存。
该培养基适用于多种来源的人类间充质干细胞的生长，如脐带（UCM-hMSC）、骨髓（BM-hMSC）、脂肪组织（AT-hMSC）等。
[1] 杨婷、陈广华、薛胜利、乔曼、刘慧文、田竤、乔淑敏、陈峰、陈志哲、孙爱宁 吴德沛。血清和含胎牛血清培养基培养的脐带间充质干细胞生物学特性比较研究。中华血液学杂志
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免疫细胞无血清培养基是一种用于体外诱导和扩增脐带血或外周血中分离的单核细胞向CIK细胞进行培养的培养基。
1、不含血清和细胞因子的培养基。
2、不含异源动物成分，化学成分经过限定的培养基。
3、具有优越的培养性能，支持高密度单核细胞的培养。
1、长期增殖培养DC细胞、CIK细胞和NK细胞。
2、长期增殖培养PBL细胞和TIL细胞。
3、长期增殖培养单核细胞和巨噬细胞。
4、长期增殖培养T淋巴细胞。
1、采集和分离外周血，使用Ficoll密度梯度离心法分离并收集单核细胞。
2、接种和诱导活化单核细胞
1) 在0天时，计数细胞并按照细胞密度2x106cell/mL接种到相应体积的培养液中。添加YC001诱导因子和10%自体血浆。
2) 在1天时（24小时），向已接种细胞的培养液中添加YC002、YC003和YC004诱导因子。将YC005添加到未使用的培养基中备用。
3、连续培养和扩增细胞
1) 在3天时，添加新鲜培养液，将细胞密度调整至(0.6-0.8)x106cell/mL。同时添加新加入培养液体积的10%自体血浆。补液比例大致为1：2（原有培养液体积：新加培养液体积）。
2) 在5天时，添加新鲜培养液，将细胞密度调整至(0.6-0.8)x106cell/mL。补液比例大致为1：3。
3) 在7天时，添加新鲜培养液，将细胞密度调整至(0.6-0.8)x106cell/mL。补液比例大致为1：2。
4) 在9天时，将剩余的培养液全部加入。
4、收获细胞
在培养周期结束后，根据细胞数量收获细胞。
[1] 孙婧、陈红松、高燕、王松霞、张毅、王宇；无血清培养基与完全培养基对体外诱导免疫细胞支持作用的比较。中国肿瘤生物治疗杂志。 显示全部
免疫细胞无血清培养基是一种用于体外诱导和扩增脐带血或外周血中分离的单核细胞向CIK细胞进行培养的培养基。
1、不含血清和细胞因子的培养基。
2、不含异源动物成分，化学成分经过限定的培养基。
3、具有优越的培养性能，支持高密度单核细胞的培养。
1、长期增殖培养DC细胞、CIK细胞和NK细胞。
2、长期增殖培养PBL细胞和TIL细胞。
3、长期增殖培养单核细胞和巨噬细胞。
4、长期增殖培养T淋巴细胞。
1、采集和分离外周血，使用Ficoll密度梯度离心法分离并收集单核细胞。
2、接种和诱导活化单核细胞
1) 在0天时，计数细胞并按照细胞密度2x106cell/mL接种到相应体积的培养液中。添加YC001诱导因子和10%自体血浆。
2) 在1天时（24小时），向已接种细胞的培养液中添加YC002、YC003和YC004诱导因子。将YC005添加到未使用的培养基中备用。
3、连续培养和扩增细胞
1) 在3天时，添加新鲜培养液，将细胞密度调整至(0.6-0.8)x106cell/mL。同时添加新加入培养液体积的10%自体血浆。补液比例大致为1：2（原有培养液体积：新加培养液体积）。
2) 在5天时，添加新鲜培养液，将细胞密度调整至(0.6-0.8)x106cell/mL。补液比例大致为1：3。
3) 在7天时，添加新鲜培养液，将细胞密度调整至(0.6-0.8)x106cell/mL。补液比例大致为1：2。
4) 在9天时，将剩余的培养液全部加入。
4、收获细胞
在培养周期结束后，根据细胞数量收获细胞。
[1] 孙婧、陈红松、高燕、王松霞、张毅、王宇；无血清培养基与完全培养基对体外诱导免疫细胞支持作用的比较。中国肿瘤生物治疗杂志。
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骨髓间充质干细胞血清型程序冻存液是一种特殊配方，用于冻存骨髓间充质干细胞。它能够降低冻存过程中冰晶对细胞的损伤，提高细胞复苏率和活力。该产品经过了细菌、真菌和支原体检测，质量得到保证。冻存液应保存于2-8°C，有效期为三年。为了保持产品的稳定性，请避免反复冻融。
骨髓间充质干细胞冻存液具有以下特点：
以下是骨髓间充质干细胞冻存的步骤：
复苏：
[1] 佟明华；雷香丽；王亚萍；孔祥平；罗显荣。大鼠骨髓间充质干细胞的纯化、冻存及成瘤性分析。中国组织工程研究。
显示全部骨髓间充质干细胞血清型程序冻存液是一种特殊配方，用于冻存骨髓间充质干细胞。它能够降低冻存过程中冰晶对细胞的损伤，提高细胞复苏率和活力。该产品经过了细菌、真菌和支原体检测，质量得到保证。冻存液应保存于2-8°C，有效期为三年。为了保持产品的稳定性，请避免反复冻融。
骨髓间充质干细胞冻存液具有以下特点：
以下是骨髓间充质干细胞冻存的步骤：
复苏：
[1] 佟明华；雷香丽；王亚萍；孔祥平；罗显荣。大鼠骨髓间充质干细胞的纯化、冻存及成瘤性分析。中国组织工程研究。
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Western及IP细胞裂解液是一种非变性条件下裂解细胞的溶液，可用于PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀和ELISA等实验。该裂解液含有多种抑制剂，如20mM Tris (pH 7.5)、150mM NaCl、1% Triton X-100、sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、EDTA、Na3VO4和leupeptin等，可有效抑制蛋白降解并维持蛋白间相互作用。
对于培养细胞样品：
1. 充分混匀Western及IP细胞裂解液，加入PMSF使其浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞，去除培养液后加入适量的裂解液，用枪吹打使裂解液和细胞充分接触。
3. 对于悬浮细胞，离心收集细胞后加入裂解液，用手指轻弹使细胞裂解充分。
4. 充分裂解后，离心取上清，可进行后续实验。
对于组织样品：
1. 将组织剪切成细小碎片。
2. 充分混匀Western及IP细胞裂解液，加入PMSF使其浓度为1mM。
3. 按比例加入裂解液，用玻璃匀浆器匀浆使组织裂解充分。
4. 充分裂解后，离心取上清，可进行后续实验。
参考文献：
[1] Zhang X, Chen S, Wang Y. Honokiol up-regulates prostacyclin synthease protein expression and inhibits endothelial cell apoptosis. Eur J Pharmacol. 2007 Jan 5;554(1):1-7.
[2]. Cheng BQ, Geng Y, Wu JB, Jiang B. Influences of inhibiting Galectin-3 by RNA interference technique on the proliferation and apoptosis of human colorectal cancer cells LOVO. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research. 2007;Vol 11(16):3104-3107.
[3]. Dong X, Wang JN, Huang YZ, Guo LY, Kong X. Cell-penetrating Peptide PEP-1-mediated Transduction of Enhanced Green Fluorescent Protein into Human Aortic Smooth Muscle Cells. J YMC.2007 Apr;26(2):71. 显示全部
Western及IP细胞裂解液是一种非变性条件下裂解细胞的溶液，可用于PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀和ELISA等实验。该裂解液含有多种抑制剂，如20mM Tris (pH 7.5)、150mM NaCl、1% Triton X-100、sodium pyrophosphate、β-glycerophosphate、EDTA、Na3VO4和leupeptin等，可有效抑制蛋白降解并维持蛋白间相互作用。
对于培养细胞样品：
1. 充分混匀Western及IP细胞裂解液，加入PMSF使其浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞，去除培养液后加入适量的裂解液，用枪吹打使裂解液和细胞充分接触。
3. 对于悬浮细胞，离心收集细胞后加入裂解液，用手指轻弹使细胞裂解充分。
4. 充分裂解后，离心取上清，可进行后续实验。
对于组织样品：
1. 将组织剪切成细小碎片。
2. 充分混匀Western及IP细胞裂解液，加入PMSF使其浓度为1mM。
3. 按比例加入裂解液，用玻璃匀浆器匀浆使组织裂解充分。
4. 充分裂解后，离心取上清，可进行后续实验。
参考文献：
[1] Zhang X, Chen S, Wang Y. Honokiol up-regulates prostacyclin synthease protein expression and inhibits endothelial cell apoptosis. Eur J Pharmacol. 2007 Jan 5;554(1):1-7.
[2]. Cheng BQ, Geng Y, Wu JB, Jiang B. Influences of inhibiting Galectin-3 by RNA interference technique on the proliferation and apoptosis of human colorectal cancer cells LOVO. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research. 2007;Vol 11(16):3104-3107.
[3]. Dong X, Wang JN, Huang YZ, Guo LY, Kong X. Cell-penetrating Peptide PEP-1-mediated Transduction of Enhanced Green Fluorescent Protein into Human Aortic Smooth Muscle Cells. J YMC.2007 Apr;26(2):71.
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动物细胞蛋白质提取过程中，有些蛋白质难以溶解，需要使用变性裂解液进行提取。这种裂解液适用于不溶性细胞骨架、膜蛋白、高度疏水蛋白，或者集聚并形成沉淀的蛋白，以及体外翻译产生的蛋白。它可以用于SDS-PAGE、等电点聚焦和2-D电泳。
在常温下运输后，将溶液A和溶液B放在-20°C环境中保存，保质期为两年。
1. 贴壁细胞，去除培养液，用PBS洗涤。
2. 悬浮细胞，离心收集，再次用PBS洗涤。
3. 每107个细胞或100 mm培养板或150 cm2培养瓶，加入1 mL溶液A和10 μL溶液B。
4. 冰上放置5-10分钟，可用枪头轻轻吹打促进细胞裂解。
5. 轻轻倾斜培养皿使裂解产物流向瓶皿的一边或一角，然后将其转移到1.5 mL离心管。
6. 在冰上放置5分钟，期间剧烈震荡3-4次，每次30秒。
7. 以12000 rpm（12830g），4°C离心5分钟，取上清，即可进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
1. 将组织剪切成细小的碎片。
2. 每100毫克组织加入1 mL溶液A和10 μL溶液B。
3. 置于玻璃匀浆器冰上均质30～50次，或使用超声破碎细胞，每次30秒，3～4次，每次间隔1分钟，置于冰上冷却。
4. 均质或超声破碎细胞后，镜检细胞破碎率不小于90%，同时组织已经完全裂解，没有明显的小组织块。
5. 将匀浆物转移到1.5 mL离心管，在冰上放置10分钟，期间剧烈震荡3-4次。
6. 以12000 rpm，4°C离心5分钟，取上清，即可进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
已经提取的细胞骨架膜蛋白、膜蛋白或高度疏水蛋白，或者集聚并形成沉淀的蛋白的溶解方法如下：
将1-5 mg的相关蛋白质样品加入1 mL的溶液A和10 μL溶液B混合，静置30分钟，涡旋震荡1分钟，离心后取上清。
1. 若溶液A有沉淀析出，可置于30°C水浴中保温10分钟，并震荡混匀，待沉淀完全溶解后，冷却至室温后即可使用。
2. 裂解液中蛋白样品含有影响因子，不能用Bradford法和BCA法测定蛋白浓度，但可使用改良型Lowry法或非干扰型蛋白定量试剂盒测定。
3. 在细胞裂解时，如果在进行步骤4前裂解液比较粘，可以先匀浆或超声以剪断基因组，再离心取上清。
[1] 王义强 谭晓风 陈介南 周小慧 孙吉康；银杏雌树成熟叶cDNA文库的构建。《中南林业科技大学学报：自然科学版》2009年 第1期。
显示全部动物细胞蛋白质提取过程中，有些蛋白质难以溶解，需要使用变性裂解液进行提取。这种裂解液适用于不溶性细胞骨架、膜蛋白、高度疏水蛋白，或者集聚并形成沉淀的蛋白，以及体外翻译产生的蛋白。它可以用于SDS-PAGE、等电点聚焦和2-D电泳。
在常温下运输后，将溶液A和溶液B放在-20°C环境中保存，保质期为两年。
1. 贴壁细胞，去除培养液，用PBS洗涤。
2. 悬浮细胞，离心收集，再次用PBS洗涤。
3. 每107个细胞或100 mm培养板或150 cm2培养瓶，加入1 mL溶液A和10 μL溶液B。
4. 冰上放置5-10分钟，可用枪头轻轻吹打促进细胞裂解。
5. 轻轻倾斜培养皿使裂解产物流向瓶皿的一边或一角，然后将其转移到1.5 mL离心管。
6. 在冰上放置5分钟，期间剧烈震荡3-4次，每次30秒。
7. 以12000 rpm（12830g），4°C离心5分钟，取上清，即可进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
1. 将组织剪切成细小的碎片。
2. 每100毫克组织加入1 mL溶液A和10 μL溶液B。
3. 置于玻璃匀浆器冰上均质30～50次，或使用超声破碎细胞，每次30秒，3～4次，每次间隔1分钟，置于冰上冷却。
4. 均质或超声破碎细胞后，镜检细胞破碎率不小于90%，同时组织已经完全裂解，没有明显的小组织块。
5. 将匀浆物转移到1.5 mL离心管，在冰上放置10分钟，期间剧烈震荡3-4次。
6. 以12000 rpm，4°C离心5分钟，取上清，即可进行后续的电泳、Western或免疫沉淀操作。
已经提取的细胞骨架膜蛋白、膜蛋白或高度疏水蛋白，或者集聚并形成沉淀的蛋白的溶解方法如下：
将1-5 mg的相关蛋白质样品加入1 mL的溶液A和10 μL溶液B混合，静置30分钟，涡旋震荡1分钟，离心后取上清。
1. 若溶液A有沉淀析出，可置于30°C水浴中保温10分钟，并震荡混匀，待沉淀完全溶解后，冷却至室温后即可使用。
2. 裂解液中蛋白样品含有影响因子，不能用Bradford法和BCA法测定蛋白浓度，但可使用改良型Lowry法或非干扰型蛋白定量试剂盒测定。
3. 在细胞裂解时，如果在进行步骤4前裂解液比较粘，可以先匀浆或超声以剪断基因组，再离心取上清。
[1] 王义强 谭晓风 陈介南 周小慧 孙吉康；银杏雌树成熟叶cDNA文库的构建。《中南林业科技大学学报：自然科学版》2009年 第1期。
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823Cells是一种人胃腺癌细胞（低分化），具有上皮样的形态特征，能够在RPMI1640+10%FBS培养基中贴壁生长。细胞的传代比例为1:3，每2-3天更换培养基。细胞可以保存在无血清细胞冻存液中。
在收到细胞之后，先不要打开瓶盖，用酒精擦拭瓶身，然后将瓶子放在培养箱中静置一段时间，以稳定细胞状态。接下来，在倒置显微镜下观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议在收到细胞时拍摄一张整体外观照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，然后在显微镜下拍摄细胞的状态，分别使用100倍和200倍放大倍数）。同时，观察和记录细胞在运输过程中是否受到污染。
复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管放入37℃水浴中快速摇晃解冻，然后加入5mL培养基并混合均匀。在1000RPM的条件下离心5分钟，去除上清液，补充4-6mL完全培养基并充分混合。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中并在过夜的条件下培养。第二天更换培养基并检查细胞密度。当细胞密度达到80%-90%时，可以进行传代培养。
细胞冻存：当细胞的生长状态良好时，可以进行细胞冻存。对于贴壁细胞，先去除培养基，然后加入少量胰酶，使细胞变圆脱落。在1000RPM的条件下离心8-10分钟，去除上清液，然后按照90%FBS+10%DMSO的比例加入血清和DMSO进行冻存。
[1] Bo Leng，Xiao-Dan Liu，Qing-Xi Chen；Inhibitory effects of anticancer peptide from Mercenaria on the BGC-823 cells and several enzymes。《FEBS letters》 2005
显示全部823Cells是一种人胃腺癌细胞（低分化），具有上皮样的形态特征，能够在RPMI1640+10%FBS培养基中贴壁生长。细胞的传代比例为1:3，每2-3天更换培养基。细胞可以保存在无血清细胞冻存液中。
在收到细胞之后，先不要打开瓶盖，用酒精擦拭瓶身，然后将瓶子放在培养箱中静置一段时间，以稳定细胞状态。接下来，在倒置显微镜下观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议在收到细胞时拍摄一张整体外观照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，然后在显微镜下拍摄细胞的状态，分别使用100倍和200倍放大倍数）。同时，观察和记录细胞在运输过程中是否受到污染。
复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管放入37℃水浴中快速摇晃解冻，然后加入5mL培养基并混合均匀。在1000RPM的条件下离心5分钟，去除上清液，补充4-6mL完全培养基并充分混合。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中并在过夜的条件下培养。第二天更换培养基并检查细胞密度。当细胞密度达到80%-90%时，可以进行传代培养。
细胞冻存：当细胞的生长状态良好时，可以进行细胞冻存。对于贴壁细胞，先去除培养基，然后加入少量胰酶，使细胞变圆脱落。在1000RPM的条件下离心8-10分钟，去除上清液，然后按照90%FBS+10%DMSO的比例加入血清和DMSO进行冻存。
[1] Bo Leng，Xiao-Dan Liu，Qing-Xi Chen；Inhibitory effects of anticancer peptide from Mercenaria on the BGC-823 cells and several enzymes。《FEBS letters》 2005
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231细胞是从一位51岁女性乳腺癌患者的胸水中分离得到的。这种细胞可以在裸鼠和BALB/c小鼠中形成低分化腺癌。它们表达WNT7B癌基因。
为了保证细胞的良好增殖能力，需要在37℃、100%空气、无菌恒温培养条件下进行培养。正确的培养方法对于细胞的复苏、传代和冻存非常重要。
以下是细胞传代的步骤：
1. 当细胞融合度达到90%以上时，进行细胞传代。
2. 预热培养基至37°C。
3. 在超净台上，弃掉培养基，加入2-5ml的PBS清洗细胞，然后加入1ml的胰酶消化细胞。
4. 当观察到细胞变圆并开始脱离瓶壁时，加入5ml的培养基终止消化。
5. 用移液器轻轻吹打瓶壁上剩余的细胞，将细胞吹散。
6. 将细胞移入离心管中，以1000rpm离心5分钟。
7. 弃掉上清液，加入5ml含有10% FBS的培养基，将细胞重悬后转移到没有透气孔的T25瓶中。确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间，细胞密度为1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶)。
8. 将培养瓶盖拧紧后放入37°C的无菌培养箱中进行培养。
以下是细胞冻存的步骤：
1. 预热培养基至37°C。
2. 消化细胞后进行细胞计数。
3. 在计数区域内数四个计数区的总细胞数，活细胞不被染色，无活性细胞染成蓝色。
4. 计算细胞密度和细胞活性。
5. 当细胞密度达到传代密度且细胞活性在90%以上时，可以进行细胞冻存。
6. 将要冻存的细胞移入离心管中，以1000rpm离心5分钟。
7. 弃掉上清液，用70%培养液+20% FBS+10% DMSO的混合液重悬细胞，并调整细胞密度为1-3×106/ml。
[1] 林宇，岳丽玲，蒋丽艳；岩大戟内酯B对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响。《中国实验方剂学杂志》
显示全部231细胞是从一位51岁女性乳腺癌患者的胸水中分离得到的。这种细胞可以在裸鼠和BALB/c小鼠中形成低分化腺癌。它们表达WNT7B癌基因。
为了保证细胞的良好增殖能力，需要在37℃、100%空气、无菌恒温培养条件下进行培养。正确的培养方法对于细胞的复苏、传代和冻存非常重要。
以下是细胞传代的步骤：
1. 当细胞融合度达到90%以上时，进行细胞传代。
2. 预热培养基至37°C。
3. 在超净台上，弃掉培养基，加入2-5ml的PBS清洗细胞，然后加入1ml的胰酶消化细胞。
4. 当观察到细胞变圆并开始脱离瓶壁时，加入5ml的培养基终止消化。
5. 用移液器轻轻吹打瓶壁上剩余的细胞，将细胞吹散。
6. 将细胞移入离心管中，以1000rpm离心5分钟。
7. 弃掉上清液，加入5ml含有10% FBS的培养基，将细胞重悬后转移到没有透气孔的T25瓶中。确保细胞贴壁后融合度在25-50%之间，细胞密度为1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶)。
8. 将培养瓶盖拧紧后放入37°C的无菌培养箱中进行培养。
以下是细胞冻存的步骤：
1. 预热培养基至37°C。
2. 消化细胞后进行细胞计数。
3. 在计数区域内数四个计数区的总细胞数，活细胞不被染色，无活性细胞染成蓝色。
4. 计算细胞密度和细胞活性。
5. 当细胞密度达到传代密度且细胞活性在90%以上时，可以进行细胞冻存。
6. 将要冻存的细胞移入离心管中，以1000rpm离心5分钟。
7. 弃掉上清液，用70%培养液+20% FBS+10% DMSO的混合液重悬细胞，并调整细胞密度为1-3×106/ml。
[1] 林宇，岳丽玲，蒋丽艳；岩大戟内酯B对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响。《中国实验方剂学杂志》
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人气管平滑肌细胞(HTSMC)是从人气管组织中提取的原代细胞，可用于研究人气管相关功能和疾病。平滑肌纤维形状长梭形，无横纹，受自主神经支配，为不随意肌。该肌肉收缩缓慢而持久，细胞核位于中央，形状为长椭圆形或杆状，收缩时核可扭曲成螺旋形。平滑肌纤维大小不一，一般长200μm，直径8μm。
哮喘的发生和持续状态与免疫-神经机制密切相关，神经生长因子(NGF)作为联系气道免疫与神经机制的中介物质，在哮喘的发病过程中起着重要作用。Rho GTP酶是一种重要的Ras相关单体GTP酶，通过激活其下游靶分子Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rock)调节细胞的多种行为与功能。近年来的研究发现，Rho/Rock信号转导通路参与多种平滑肌和非平滑肌功能异常相关疾病的发生机制，但在支气管哮喘中NGF是否通过Rho/Rock信号转导通路引起气管平滑肌的收缩、气道阻力增加，进而引起哮喘的发生、发展和持续尚不清楚。通过对NGF和Rho/Rock信号转导通路的相关研究，可以进一步探讨哮喘的发病机制，以及抗NGF抗体和Rock抑制剂在哮喘治疗中的作用。
[1] Lorenzo A.Calò, Ugo Vertolli, Elisa Pagnin, Verdiana Ravarotto, Paul A.Davis, Mario Lupia, Elena Naso, Giuseppe Maiolino, Agostino Naso. Increased rho kinase activity in mononuclear cells of dialysis and stage 3–4 chronic kidney disease patients with left ventricular hypertrophy: Cardiovascular risk implications. Life Sciences. 2016.
[2] Yasin Shaifta, Nneka Irechukwu, Jesus Prieto‐Lloret, Charles E MacKay, Keisha A Marchon, Jeremy P T Ward, Greg A Knock. Divergent modulation of Rho‐kinase and Ca2+ influx pathways by Src family kinases and focal adhesion kinase in airway smooth muscle. British Journal of Pharmacology. 2015.
[3] Augusto Orlandi, Luigino Calzetta, Elena Doldo, Chiara Tarquini, Maria Gabriella Matera, Daniela Passeri. Brain natriuretic peptide modulates calcium homeostasis and epidermal growth factor receptor gene signalling in asthmatic airways smooth muscle cells. Pulmonary Pharmacology & Therapeutics. 2015.
[4] 项蔷薇, 李海静, 罗运春, 王强, 朱妍艳, 李昌崇. 哮喘小鼠肺组织Rho、ROCK信号通路与气道炎症及选择性拮抗剂Y-27632的干预. 中国免疫学杂志. 2010.
[5] 方秀斌, 刘晓湘, 张鸿. 实验性哮喘时神经生长因子对神经激肽A的上调作用. 中国病理生理杂志. 2004.
[6] 陈晶莹. NGF调控RHO/ROCK信号转导通路在哮喘发病机制中的研究. 中国医科大学, 2018.
显示全部人气管平滑肌细胞(HTSMC)是从人气管组织中提取的原代细胞，可用于研究人气管相关功能和疾病。平滑肌纤维形状长梭形，无横纹，受自主神经支配，为不随意肌。该肌肉收缩缓慢而持久，细胞核位于中央，形状为长椭圆形或杆状，收缩时核可扭曲成螺旋形。平滑肌纤维大小不一，一般长200μm，直径8μm。
哮喘的发生和持续状态与免疫-神经机制密切相关，神经生长因子(NGF)作为联系气道免疫与神经机制的中介物质，在哮喘的发病过程中起着重要作用。Rho GTP酶是一种重要的Ras相关单体GTP酶，通过激活其下游靶分子Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(Rock)调节细胞的多种行为与功能。近年来的研究发现，Rho/Rock信号转导通路参与多种平滑肌和非平滑肌功能异常相关疾病的发生机制，但在支气管哮喘中NGF是否通过Rho/Rock信号转导通路引起气管平滑肌的收缩、气道阻力增加，进而引起哮喘的发生、发展和持续尚不清楚。通过对NGF和Rho/Rock信号转导通路的相关研究，可以进一步探讨哮喘的发病机制，以及抗NGF抗体和Rock抑制剂在哮喘治疗中的作用。
[1] Lorenzo A.Calò, Ugo Vertolli, Elisa Pagnin, Verdiana Ravarotto, Paul A.Davis, Mario Lupia, Elena Naso, Giuseppe Maiolino, Agostino Naso. Increased rho kinase activity in mononuclear cells of dialysis and stage 3–4 chronic kidney disease patients with left ventricular hypertrophy: Cardiovascular risk implications. Life Sciences. 2016.
[2] Yasin Shaifta, Nneka Irechukwu, Jesus Prieto‐Lloret, Charles E MacKay, Keisha A Marchon, Jeremy P T Ward, Greg A Knock. Divergent modulation of Rho‐kinase and Ca2+ influx pathways by Src family kinases and focal adhesion kinase in airway smooth muscle. British Journal of Pharmacology. 2015.
[3] Augusto Orlandi, Luigino Calzetta, Elena Doldo, Chiara Tarquini, Maria Gabriella Matera, Daniela Passeri. Brain natriuretic peptide modulates calcium homeostasis and epidermal growth factor receptor gene signalling in asthmatic airways smooth muscle cells. Pulmonary Pharmacology & Therapeutics. 2015.
[4] 项蔷薇, 李海静, 罗运春, 王强, 朱妍艳, 李昌崇. 哮喘小鼠肺组织Rho、ROCK信号通路与气道炎症及选择性拮抗剂Y-27632的干预. 中国免疫学杂志. 2010.
[5] 方秀斌, 刘晓湘, 张鸿. 实验性哮喘时神经生长因子对神经激肽A的上调作用. 中国病理生理杂志. 2004.
[6] 陈晶莹. NGF调控RHO/ROCK信号转导通路在哮喘发病机制中的研究. 中国医科大学, 2018.
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转基因食品的安全性备受关注，许多国家都采取了谨慎措施，要求对转基因食品进行明确标识。然而，由于经济利益和政治目的的驱使，一些不法商家仍然不遵守这一规定。这可能导致未经标识的外源基因混入食品中，侵犯人们的知情权。因此，检验机构需要及时发现并杜绝这种现象的发生。为了维护国家的安全，许多国家还规定了转基因食品中转基因成分的下限，并要求在出口之前提供含量检测报告。这进一步对检测机构提出了严格要求，因此完善检验标准变得非常迫切。
转基因大豆品系DP305423用于检测转基因大豆品系DP305423。
操作流程：
第一步，制备模板；第二步，添加模板；第三步，进行扩增反应。
1. 本试剂具有高灵敏度。为了防止污染，实验应进行分区操作。第一区：样本制备区。第二区：扩增及产物检测区。最好在分区之间进行物理性隔离，以避免人为因素引起的污染。
2. 在实验过程中，应穿戴工作服和乳胶手套，并使用移液器。所有实验产生的废弃物应及时处理。
3. 严格按照操作步骤进行实验，试剂配制和加样等步骤应在冰上进行。
4. 反应液中的成分对光敏感，应避光保存。不需要使用的试剂应避免解冻，推荐在使用前将反应液离心30秒。
5. 反应结束后，扩增管应置于密封袋内丢弃，并在当天清理。禁止开盖，因为开盖容易造成气溶胶污染。
6. 不同批号的试剂请勿混合使用，应在有效期内使用。
[1]曲秋颖。转基因大豆、玉米、油菜品系鉴定方法。中国海洋大学硕士学位论文。
显示全部转基因食品的安全性备受关注，许多国家都采取了谨慎措施，要求对转基因食品进行明确标识。然而，由于经济利益和政治目的的驱使，一些不法商家仍然不遵守这一规定。这可能导致未经标识的外源基因混入食品中，侵犯人们的知情权。因此，检验机构需要及时发现并杜绝这种现象的发生。为了维护国家的安全，许多国家还规定了转基因食品中转基因成分的下限，并要求在出口之前提供含量检测报告。这进一步对检测机构提出了严格要求，因此完善检验标准变得非常迫切。
转基因大豆品系DP305423用于检测转基因大豆品系DP305423。
操作流程：
第一步，制备模板；第二步，添加模板；第三步，进行扩增反应。
1. 本试剂具有高灵敏度。为了防止污染，实验应进行分区操作。第一区：样本制备区。第二区：扩增及产物检测区。最好在分区之间进行物理性隔离，以避免人为因素引起的污染。
2. 在实验过程中，应穿戴工作服和乳胶手套，并使用移液器。所有实验产生的废弃物应及时处理。
3. 严格按照操作步骤进行实验，试剂配制和加样等步骤应在冰上进行。
4. 反应液中的成分对光敏感，应避光保存。不需要使用的试剂应避免解冻，推荐在使用前将反应液离心30秒。
5. 反应结束后，扩增管应置于密封袋内丢弃，并在当天清理。禁止开盖，因为开盖容易造成气溶胶污染。
6. 不同批号的试剂请勿混合使用，应在有效期内使用。
[1]曲秋颖。转基因大豆、玉米、油菜品系鉴定方法。中国海洋大学硕士学位论文。
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中文名称：肿瘤抑制基因野生型P53单抗
英文名称：Anti-P53(wt-p53)
宿主来源：兔/鼠
性状：冻干粉或液体
浓度：1mg/ml
亚型：IgG
产品规格：0.1ml/0.2ml
交叉反应：人，大鼠，小鼠，犬，猪，羊等
应用：WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500（石蜡切片需做抗原修复）
1.保存原则：避免反复冻融
2.短期保存的抗体：如抗体几周内就会使用，收到后推荐在2-8℃保存，2-8℃短暂保存数周对抗体活性没有影响。
3.长期保存的抗体：如抗体需超过1个月后才会使用，请酌情分装后于-20℃保存。
4.建议：将抗体保存在冰箱里层，避免温度变化造成反复冻融。
*避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。反复冻融过程中，冰晶会对抗体的空间结构造成破坏，导致蛋白变性形成多聚体，从而降低抗体的结合能力，加快抗体降解速度。
1.高度特异性，特异性是抗原抗体反应的最主要特征，特定抗原决定簇只与特定抗体结合；
2.可逆性:抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为：Ag+AbAg·Ab；
3.适当浓度和比例；
4.敏感性:在测定血清中某一物质的含量时，化学比色法的敏感度为mg/ml水平，酶反应测定法
5.酸碱度:合适的pH为6-8。
6.温度:37℃通常是抗原体反应最适温度。
[1] 武军华，魏文清，贾培媛，赵 宇，王晨宇，刘 晶，王玉霞。肿瘤抑制蛋白质P53单克隆抗体的制备及其免疫活性分析。中国药理学与毒理学杂志2011年 10月第25卷第5期。
显示全部中文名称：肿瘤抑制基因野生型P53单抗
英文名称：Anti-P53(wt-p53)
宿主来源：兔/鼠
性状：冻干粉或液体
浓度：1mg/ml
亚型：IgG
产品规格：0.1ml/0.2ml
交叉反应：人，大鼠，小鼠，犬，猪，羊等
应用：WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500（石蜡切片需做抗原修复）
1.保存原则：避免反复冻融
2.短期保存的抗体：如抗体几周内就会使用，收到后推荐在2-8℃保存，2-8℃短暂保存数周对抗体活性没有影响。
3.长期保存的抗体：如抗体需超过1个月后才会使用，请酌情分装后于-20℃保存。
4.建议：将抗体保存在冰箱里层，避免温度变化造成反复冻融。
*避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。反复冻融过程中，冰晶会对抗体的空间结构造成破坏，导致蛋白变性形成多聚体，从而降低抗体的结合能力，加快抗体降解速度。
1.高度特异性，特异性是抗原抗体反应的最主要特征，特定抗原决定簇只与特定抗体结合；
2.可逆性:抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为：Ag+AbAg·Ab；
3.适当浓度和比例；
4.敏感性:在测定血清中某一物质的含量时，化学比色法的敏感度为mg/ml水平，酶反应测定法
5.酸碱度:合适的pH为6-8。
6.温度:37℃通常是抗原体反应最适温度。
[1] 武军华，魏文清，贾培媛，赵 宇，王晨宇，刘 晶，王玉霞。肿瘤抑制蛋白质P53单克隆抗体的制备及其免疫活性分析。中国药理学与毒理学杂志2011年 10月第25卷第5期。
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线粒体呼吸链复合物I试剂盒是一种用于定量检测线粒体呼吸链复合物I（NADH－辅酶Q还原酶）活性的比色法试剂。它采用合成辅酶Q同功类似物和特异性抑制剂的反应系统，通过测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低来测定酶活性。这是一种经典而权威的技术方法。
线粒体呼吸链复合物I试剂盒适用于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。它可以应用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究领域。
[1]周亮 ， 林敏仕 ， 尹恝。线粒体呼吸链复合物Ⅰ缺陷与海洛因海绵状白质脑病的关系。《南方医科大学学报》
显示全部线粒体呼吸链复合物I试剂盒是一种用于定量检测线粒体呼吸链复合物I（NADH－辅酶Q还原酶）活性的比色法试剂。它采用合成辅酶Q同功类似物和特异性抑制剂的反应系统，通过测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）氧化后峰值的降低来测定酶活性。这是一种经典而权威的技术方法。
线粒体呼吸链复合物I试剂盒适用于各种纯化线粒体样品（动物、人体、酵母）以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）－辅酶Q还原酶的特异性活性检测。它可以应用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究领域。
[1]周亮 ， 林敏仕 ， 尹恝。线粒体呼吸链复合物Ⅰ缺陷与海洛因海绵状白质脑病的关系。《南方医科大学学报》
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条件性基因敲除小鼠是一种通过基因敲除技术制作的动物模型，其特点是目的基因在特定组织或细胞中不表达，而在其他组织或细胞中正常表达。
优势：与全基因敲除相比，条件性基因敲除小鼠能够避免胚胎致死和复杂的表型问题。同时，由于目的基因只在特定组织中失活，这种模型可以用于研究该基因在特定组织中的功能，而在其他组织中仍能正常表达。
限制：设计条件性基因敲除小鼠需要对基因进行全面的分析，以避免敲除导致内源性基因表达下调或截短蛋白的表达。此外，获得组织特异性敲除小鼠需要与表达重组酶的小鼠进行交配，相比全基因敲除小鼠模型，繁殖时间至少需要多交配一代。
条件性基因敲除小鼠主要通过染色体位点特异性重组酶系统来实现，其中最常用的是Cre-LoxP系统。这一系统在待敲除的目的基因序列两端各放置一个LoxP序列，从而得到Floxed（Flanked by loxP）小鼠。在与表达Cre重组酶的小鼠杂交之前，floxed小鼠的目的基因表达完全正常，避免了全基因敲除可能导致的胚胎致死。而当floxed小鼠与组织特异性表达Cre重组酶的小鼠杂交后，就可以获得目的基因在特定组织或细胞中被敲除的小鼠，而在其他组织或细胞中仍然正常表达。
通过与不同的Cre重组酶小鼠杂交，floxed小鼠的目的基因敲除可以发生在小鼠的任何组织或细胞中。此外，结合控制Cre重组酶表达的诱导系统，还可以实现对目的基因表达的时空两方面调控。
研究具有胚胎致死性目的基因；
探究目的基因在特定组织中的生理或病理功能；
确认药物的靶标；
进行药物的毒理学研究。
[1] 王晶；董芳芳；李晓锋；舒冰；施杞；王拥军；周重建。益气化瘀方减轻HIF-1α条件性基因敲除小鼠椎间盘退变的研究。《第十九届全国中西医结合骨伤科学术研讨会论文汇编》2012年。 显示全部
条件性基因敲除小鼠是一种通过基因敲除技术制作的动物模型，其特点是目的基因在特定组织或细胞中不表达，而在其他组织或细胞中正常表达。
优势：与全基因敲除相比，条件性基因敲除小鼠能够避免胚胎致死和复杂的表型问题。同时，由于目的基因只在特定组织中失活，这种模型可以用于研究该基因在特定组织中的功能，而在其他组织中仍能正常表达。
限制：设计条件性基因敲除小鼠需要对基因进行全面的分析，以避免敲除导致内源性基因表达下调或截短蛋白的表达。此外，获得组织特异性敲除小鼠需要与表达重组酶的小鼠进行交配，相比全基因敲除小鼠模型，繁殖时间至少需要多交配一代。
条件性基因敲除小鼠主要通过染色体位点特异性重组酶系统来实现，其中最常用的是Cre-LoxP系统。这一系统在待敲除的目的基因序列两端各放置一个LoxP序列，从而得到Floxed（Flanked by loxP）小鼠。在与表达Cre重组酶的小鼠杂交之前，floxed小鼠的目的基因表达完全正常，避免了全基因敲除可能导致的胚胎致死。而当floxed小鼠与组织特异性表达Cre重组酶的小鼠杂交后，就可以获得目的基因在特定组织或细胞中被敲除的小鼠，而在其他组织或细胞中仍然正常表达。
通过与不同的Cre重组酶小鼠杂交，floxed小鼠的目的基因敲除可以发生在小鼠的任何组织或细胞中。此外，结合控制Cre重组酶表达的诱导系统，还可以实现对目的基因表达的时空两方面调控。
研究具有胚胎致死性目的基因；
探究目的基因在特定组织中的生理或病理功能；
确认药物的靶标；
进行药物的毒理学研究。
[1] 王晶；董芳芳；李晓锋；舒冰；施杞；王拥军；周重建。益气化瘀方减轻HIF-1α条件性基因敲除小鼠椎间盘退变的研究。《第十九届全国中西医结合骨伤科学术研讨会论文汇编》2012年。
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双荧光素酶被广泛应用于验证MIRNA与靶目标基因结合位点的研究。作为理想的报告基因，双荧光素酶在哺乳动物细胞中没有内源性表达，因此可以通过转录完成后立即产生功能性的荧光素酶。与单一报告基因实验相比，双报告基因实验通过共转染的“对照”作为内参，为实验提供一个基准线，从而最大程度上减小实验条件、细胞活性和转染效率等外在因素对实验结果的影响，使得数据更可靠。Dual-Luciferase双荧光素酶报告基因检测系统可以同时表达萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶，两者没有种源同源性并对应不同的反应底物，因此不会产生交叉干扰。通过双荧光素酶报告基因系统，可以有效验证miRNA与靶目标基因结合位点、转录因子和启动子结合位点。
miRNA主要通过作用于靶基因的3'UTR发挥作用。可以将目的基因的3'UTR区域构建到载体中报告基因luciferase的后面，通过比较过表达或干扰miRNA后，观察报告基因表达的改变（通过监测荧光素酶的活性变化），从而定量反映miRNA对目的基因的抑制作用。此外，还可以通过定点突变等方法进一步确定miRNA与靶基因3'UTR的作用位点。本实验的目的是验证hsa-mir-21与靶基因Tropomyosin 1 3'UTR是否发生作用，并进一步确定hsa-mir-21与靶基因Tropomyosin 1 3'UTR的作用位点。
[1] 印翠，张俊玲，施志仪，孙文慧，孙近近。应用于miRNA靶标检测的双荧光素酶报告载体的构建及鉴定。《生物技术通报》2015年 第12期。 显示全部
双荧光素酶被广泛应用于验证MIRNA与靶目标基因结合位点的研究。作为理想的报告基因，双荧光素酶在哺乳动物细胞中没有内源性表达，因此可以通过转录完成后立即产生功能性的荧光素酶。与单一报告基因实验相比，双报告基因实验通过共转染的“对照”作为内参，为实验提供一个基准线，从而最大程度上减小实验条件、细胞活性和转染效率等外在因素对实验结果的影响，使得数据更可靠。Dual-Luciferase双荧光素酶报告基因检测系统可以同时表达萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶，两者没有种源同源性并对应不同的反应底物，因此不会产生交叉干扰。通过双荧光素酶报告基因系统，可以有效验证miRNA与靶目标基因结合位点、转录因子和启动子结合位点。
miRNA主要通过作用于靶基因的3'UTR发挥作用。可以将目的基因的3'UTR区域构建到载体中报告基因luciferase的后面，通过比较过表达或干扰miRNA后，观察报告基因表达的改变（通过监测荧光素酶的活性变化），从而定量反映miRNA对目的基因的抑制作用。此外，还可以通过定点突变等方法进一步确定miRNA与靶基因3'UTR的作用位点。本实验的目的是验证hsa-mir-21与靶基因Tropomyosin 1 3'UTR是否发生作用，并进一步确定hsa-mir-21与靶基因Tropomyosin 1 3'UTR的作用位点。
[1] 印翠，张俊玲，施志仪，孙文慧，孙近近。应用于miRNA靶标检测的双荧光素酶报告载体的构建及鉴定。《生物技术通报》2015年 第12期。
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醋酸舍莫瑞林是一种人工合成的生长激素释放素，具有调节生长的效应。研究表明，神经肽/神经递质、激素及细胞因子是神经系统、内分泌系统及免疫系统三大系统间相互调节的"共同语言"。免疫系统除了具有自身的调节机制外，还受到神经-内分泌-免疫网络的调节。
研究发现，醋酸舍莫瑞林可以提高免疫抑制小鼠的细胞免疫功能，使受抑制的免疫功能恢复至接近正常水平。高剂量的醋酸舍莫瑞林作用更为明显，但剂量间没有显著性差异，说明其作用不依赖于剂量。醋酸舍莫瑞林可能通过促进生长激素(GH)的释放来发挥作用。GH是一种垂体前叶激素，对免疫系统有广泛影响，可以促进免疫细胞的分化和功能增强。此外，醋酸舍莫瑞林还可能具有增强免疫机能的作用，具体机制需要进一步研究。
研究还发现，醋酸舍莫瑞林可以增加免疫功能低下小鼠的胸腺和脾脏质量，提高单核吞噬细胞的吞噬功能，增强小鼠的非特异性免疫功能。此外，醋酸舍莫瑞林还可以对抗环磷酰胺对淋巴细胞的抑制作用，恢复T细胞的增殖能力。它还可以增加血清中IL-2的含量。这些研究结果表明，醋酸舍莫瑞林具有一定的免疫调节作用，可以恢复受抑制的免疫功能。
[1] 醋酸舍莫瑞林的免疫活性研究
[2] 醋酸舍莫瑞林拮抗环磷酰胺免疫抑制作用的实验研究
显示全部醋酸舍莫瑞林是一种人工合成的生长激素释放素，具有调节生长的效应。研究表明，神经肽/神经递质、激素及细胞因子是神经系统、内分泌系统及免疫系统三大系统间相互调节的"共同语言"。免疫系统除了具有自身的调节机制外，还受到神经-内分泌-免疫网络的调节。
研究发现，醋酸舍莫瑞林可以提高免疫抑制小鼠的细胞免疫功能，使受抑制的免疫功能恢复至接近正常水平。高剂量的醋酸舍莫瑞林作用更为明显，但剂量间没有显著性差异，说明其作用不依赖于剂量。醋酸舍莫瑞林可能通过促进生长激素(GH)的释放来发挥作用。GH是一种垂体前叶激素，对免疫系统有广泛影响，可以促进免疫细胞的分化和功能增强。此外，醋酸舍莫瑞林还可能具有增强免疫机能的作用，具体机制需要进一步研究。
研究还发现，醋酸舍莫瑞林可以增加免疫功能低下小鼠的胸腺和脾脏质量，提高单核吞噬细胞的吞噬功能，增强小鼠的非特异性免疫功能。此外，醋酸舍莫瑞林还可以对抗环磷酰胺对淋巴细胞的抑制作用，恢复T细胞的增殖能力。它还可以增加血清中IL-2的含量。这些研究结果表明，醋酸舍莫瑞林具有一定的免疫调节作用，可以恢复受抑制的免疫功能。
[1] 醋酸舍莫瑞林的免疫活性研究
[2] 醋酸舍莫瑞林拮抗环磷酰胺免疫抑制作用的实验研究
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AGL1菌株是一种C58, RecA型背景的农杆菌，其核基因中含有筛选标签rif和carb，这使得该菌株对利福平和羧苄青霉素具有抗性。为了方便转化操作，AGL1菌株携带了无自身转运功能的琥珀碱型hi质粒phiBo542Dh-DNA。该质粒含有转入植物基因组所必需的vir基因，而phiBo542Dh-DNA质粒自身的转移功能已被破坏。此外，该质粒还含有链霉素抗性标签strep，使得AGL1菌株适用于水稻、拟南芥、杨树等植物的转基因操作。经过pCAMBIA2301质粒检测，AGL1菌株的转化效率可达到5X 103cfu/ug。
1. 取出保存在-80℃的农杆菌感受态细胞，等待其部分融化，然后将其插入冰中。每100ul感受态细胞中加入1ug质粒DNA（体积不大于10ul），用手拨打管底混匀，然后依次在冰上静置5分钟、液氮中5分钟、37℃水浴中5分钟、冰浴中5分钟。
2. 加入700ul无抗生素的LB或YEB液体培养基，在28℃下振荡培养2~3小时。
3. 以6000rpm离心一分钟，收集菌体，留取约10ul上清液，轻轻吹打重悬菌块，然后涂布于含有相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放置于28℃培养箱中培养2-3天。
1. 最好在冰上融化感受态细胞。
2. 在混入目的DNA时应轻柔操作。
3. 当平板中只含有50ug/ml kan时，28℃培养48小时即可；当平板中同时加入50ug/ml kan和20ug/ml rif时，需在28℃下培养60小时；如果使用的平板含有50ug/ml rif，则需要在28℃下培养82-90小时。
[1] 杨佳，怡荣，张立全，牛一丁，王秀珍，哈斯阿古拉。月见草△6-脂肪酸脱氢酶基因转化油菜的研究。华北农学报。
显示全部AGL1菌株是一种C58, RecA型背景的农杆菌，其核基因中含有筛选标签rif和carb，这使得该菌株对利福平和羧苄青霉素具有抗性。为了方便转化操作，AGL1菌株携带了无自身转运功能的琥珀碱型hi质粒phiBo542Dh-DNA。该质粒含有转入植物基因组所必需的vir基因，而phiBo542Dh-DNA质粒自身的转移功能已被破坏。此外，该质粒还含有链霉素抗性标签strep，使得AGL1菌株适用于水稻、拟南芥、杨树等植物的转基因操作。经过pCAMBIA2301质粒检测，AGL1菌株的转化效率可达到5X 103cfu/ug。
1. 取出保存在-80℃的农杆菌感受态细胞，等待其部分融化，然后将其插入冰中。每100ul感受态细胞中加入1ug质粒DNA（体积不大于10ul），用手拨打管底混匀，然后依次在冰上静置5分钟、液氮中5分钟、37℃水浴中5分钟、冰浴中5分钟。
2. 加入700ul无抗生素的LB或YEB液体培养基，在28℃下振荡培养2~3小时。
3. 以6000rpm离心一分钟，收集菌体，留取约10ul上清液，轻轻吹打重悬菌块，然后涂布于含有相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放置于28℃培养箱中培养2-3天。
1. 最好在冰上融化感受态细胞。
2. 在混入目的DNA时应轻柔操作。
3. 当平板中只含有50ug/ml kan时，28℃培养48小时即可；当平板中同时加入50ug/ml kan和20ug/ml rif时，需在28℃下培养60小时；如果使用的平板含有50ug/ml rif，则需要在28℃下培养82-90小时。
[1] 杨佳，怡荣，张立全，牛一丁，王秀珍，哈斯阿古拉。月见草△6-脂肪酸脱氢酶基因转化油菜的研究。华北农学报。
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ADP核糖基化因子6抗体是一种多克隆兔源抗体，可与人、小鼠、大鼠、猪、鸡、马等多种生物交叉反应。该抗体可应用于多种实验方法，包括免疫印迹(WB)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组化(IHC)和免疫荧光(IF)等。其分子量约为20kDa，性状可为冻干粉末或液体，浓度为1mg/1ml。
ADP核糖基化因子(ADP-ribosylation factor, ARF)是Ras基因超家族的成员，属于约20kDa的鸟嘌呤核苷酸结合蛋白。除了作为霍乱毒素ADP-核糖转移酶的辅助因子共同作用于G蛋白a亚基，ARF还参与囊泡运输和调节磷脂酶D的活性，在细胞内物质运输和信号转导过程中具有重要的生理功能。
1.直接兔疫荧光法测抗原
基本原理：将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。该方法简便、特异性高，非特异性荧光染色较少。但敏感性较低，每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。常用于微生物的快速检查以及肾炎活检和皮肤活检的免疫病理检查。
2.试剂与仪器
- 磷酸盐缓冲盐水(PBS)：0.01mol/L，pH7.4
- 荧光标记的抗体溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS进行稀释
- 缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸盐缓冲液1份配制
- 搪瓷桶三只(内有0.01mol/L，pH7.4的PBS 1500ml)
- 有盖搪瓷盒一只(内铺一层浸湿的纱布垫)
- 荧光显微镜
- 玻片架
- 滤纸
- 37°C温箱等
[1] 王磊；宿红艳；王昌留；穆春华。ADP核糖基化因子的结构及其功能机制。细胞生物学杂志
显示全部ADP核糖基化因子6抗体是一种多克隆兔源抗体，可与人、小鼠、大鼠、猪、鸡、马等多种生物交叉反应。该抗体可应用于多种实验方法，包括免疫印迹(WB)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组化(IHC)和免疫荧光(IF)等。其分子量约为20kDa，性状可为冻干粉末或液体，浓度为1mg/1ml。
ADP核糖基化因子(ADP-ribosylation factor, ARF)是Ras基因超家族的成员，属于约20kDa的鸟嘌呤核苷酸结合蛋白。除了作为霍乱毒素ADP-核糖转移酶的辅助因子共同作用于G蛋白a亚基，ARF还参与囊泡运输和调节磷脂酶D的活性，在细胞内物质运输和信号转导过程中具有重要的生理功能。
1.直接兔疫荧光法测抗原
基本原理：将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。该方法简便、特异性高，非特异性荧光染色较少。但敏感性较低，每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。常用于微生物的快速检查以及肾炎活检和皮肤活检的免疫病理检查。
2.试剂与仪器
- 磷酸盐缓冲盐水(PBS)：0.01mol/L，pH7.4
- 荧光标记的抗体溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS进行稀释
- 缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸盐缓冲液1份配制
- 搪瓷桶三只(内有0.01mol/L，pH7.4的PBS 1500ml)
- 有盖搪瓷盒一只(内铺一层浸湿的纱布垫)
- 荧光显微镜
- 玻片架
- 滤纸
- 37°C温箱等
[1] 王磊；宿红艳；王昌留；穆春华。ADP核糖基化因子的结构及其功能机制。细胞生物学杂志
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