首页
全部版块
热门版块
化学
生物学
药学
通用分类
工艺技术
问题13w
化学学科
问题13w
仪器设备
问题12w
安全环保
问题4w
材料科学
问题1w
化药
问题1w
工艺技术
问题13w
化学学科
问题13w
仪器设备
问题12w
安全环保
问题4w
材料科学
问题1w
日用化工
问题2k
精细化工
问题1k
生物医学工程
问题7k
细胞及分子
问题4k
微生物
问题2k
动植物
问题609
化药
问题1w
中药
问题243
生物医药
问题220
回答
问题
待回答
文章
视频
登录
加入盖德
洛尘
影响力
73.10
经验值
192.00
粉丝
3
上海古朵生物
关注
已关注
私信
他的提问 886
他的回答 845
来自话题:
工艺技术
,
ELISA测定技术的发展和质量控制?
elisa实验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。然而,影响ELISA试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 一、 elisa试剂盒 测定技术的发展 科研测定技术的发展主要在于方法学的发展,而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用。目前,分子生物学正在并最终肯定会让我们对整个生命科学有一个全面而彻底的认识,其对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有效的,它使我们对以前一些难以检测的生物活性物质的测定变得轻而易举,并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。 1、基因工程试剂对免疫测定技术发展的影响 免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应,所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料,如抗原抗体, 酶 等。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原,而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体,而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各总化学合成方法制备。近年来,随着分子生物学的发展,使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂,各种新型使用的测定方法也不断出现。 2、基因工程 较早用于免疫测定的基因工程抗原是HBcAg和HBsAg,这两种基因工程抗原的出现,较好地解决了抗HBc和HBe的测定问题。因为要从病毒本身去大量获取这两种纯抗原较为困难,并且这一点对于难培养的病原微生物来说,如HIV、HCV和梅毒螺旋体等都有些共性。
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
细胞培养基本要点?
(一)准备和安装过滤器 清洗好过滤器,干燥,放入一张孔径0.22μm的微孔滤膜,用布包装好,15磅20 min进行高压灭菌处理。 在超净台内打开过滤器架好,胶管一端接入滤泵再插入待除菌的液体中,出口端胶管深入到已消毒好的瓶子中。用泵过滤,过滤后要检查滤膜是否完好无损。 (二)合成培养基的配制 1、根据细胞目录中的说明,按下表选择合适品牌及货号的培养基干粉,用适量超纯水充分溶解。 2、 按要求添加碳酸氢钠、谷氨酸钠、HEPES等,充分搅拌使之溶解。 3、 调 pH至7.2左右。 4、 加水至zui终体积。 5、 在超净台中对溶液进行滤过除菌,分装入250 mL或500 mL玻璃瓶中,用翻帽塞塞紧瓶口。 6、 瓶口封好,4℃冰箱贮存。 (三)小牛血清的处理 市场上出售的小牛血清一般做了灭菌处理,但在使用前还应做热灭活处理,即通过加热的方法破坏补体(近来也有观点认为热灭活处理是不必要的)。胎牛血清不必灭活。 1、 将血清加热至56℃并保持30 min,其间要不时轻轻晃动,使受热均匀,防止沉淀析出。 2、 处理后的血清贮存于4℃。 3、 小牛血清在使用前zui好进行筛选以掌握血清的质量。 (四)生长培养基的配制 除无血清培养之外,各种合成培养基在使用前需加入一定量的小牛血清或胎牛血清和抗菌素。 培养基分装成小瓶(100~200 mL)以便使用,翻帽塞塞紧瓶口。 按如下比例配制: 基本培养基占80%~90%,小牛血清或胎牛血清占10%~20%。 按1%体积分数加入双抗贮存液(青霉素+链霉素),使青霉素和链霉素的终浓度分别为100 U/mL和100 μ/mL,。 (五)冻存细胞的复苏 应遵守慢冻快融的原则。先将水浴锅调至37-37。5度,取出冻存的细胞迅速放入后将细胞面浸至水面以下不断摇动至融化。 在无菌台内将完全培养基加入50ml的小培养瓶内,约5ml左右,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞,置培养并内轻轻摇晃,使细胞均匀后置培养箱内培养。 (六)传代: 贴壁细胞: 对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱(或PBS洗1-3次)。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml,按此比例进行消化,(根据经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml完全培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后分置其它无菌培养瓶内,加入完全培养基后继续培养或实验。 悬浮细胞: 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入完全培养基继续培养,如要高浓度可先离心1000rpm,5min后加入完全培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养。 (七)冻存 将贴壁细胞消化后离心收集,悬浮细胞直接离心收集,以完全培养基或胎牛血清重悬细胞至终浓度约106/ml。加入10%的DMSO。以每管1~2ml分装至冻存管中。用绝热材料包裹置-70摄氏度冰箱冷冻过一夜。次日保存到液氮中。 (八)注意事项 玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:1)高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上; 无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净,紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上; 培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验:将血清按10%加入培养基内,用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取完全培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天,肉眼见无浑浊或沉淀等异物。分装后置4度保存; 消化液(pH7.8)或其它加入液,应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌,分装成支置-20度保存; 培养箱应先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍(如有紫外线的应照射1小时以上,如有高温灭菌的应按程序来菌)。至少每月一次。 进入操作时应注意先清洗双手及手腕,然后用75%酒精擦拭,操作时注意无菌台内空间层次。手及物品不要在暴露的瓶口上方来往,如果数量较多,培养瓶应放在与酒精灯平行地方便于操作,瓶与瓶之间应相隔一定的距离,开瓶(盖)时应先用75%酒精反复擦拭或用灯烧,打开后应用灯先烧口,然后烧盖。用完后同样操作。整个操作过程尽量在无菌台靠里面一点。
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
elisa试剂盒为什么要用血清检查?
ELISA其实是能够测一些安排、细胞等样本的,可是因为安排、细胞是固体样本,要对其进行破碎,获取被检物质;而在获取被检物质时破碎方法(如机械破碎、超声破碎、裂解液裂解等)、获取液的成份等存在区别,终究致使获取程度有所区别,然后难以树立正常参考值;而血清或血浆样本就不存在因获取进程致使的误差而且收集时又十分便利,因而一般临床常选用血清、血浆做为检查对象。 运用注意事项: 1、Elisa试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可运用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保留。 2、浓洗刷液也许会有结晶分出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗刷时不影响成果。 3、各步加样均应运用加样器,并常常校正其准确性,以避免实验误差。一次加样时刻控制在5分钟内,如标本数量多,引荐运用排枪加样。 4、请每次测定的同时做规范曲线,尽量做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于规范品孔榜首孔OD值的),请先用样品稀释液稀释必定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5、严格按说明书的操作进行,实验成果断定必须以酶标仪读数为准. 6、本试剂不同批号组分不得混用。 7、封板膜只限一次性运用,以避免交叉污染。 8、一切样品,洗刷液和各种废弃物都应按传染物处理。 9、底物请避光保留。
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
配制培养基的基本原则 ?
1. 选择适宜的营养物质 培养基应含有微生物生长繁殖所需的各种营养物质,并且各营养物质的浓度和配比适合。总体而言,所有微生物生长繁殖均需要培养基中含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源。但由于微生物营养类型复杂,不同微生物对营养物质的需求是不一样的。因此,首先要根据不同微生物的营养需求配制针对性强 的培养基。自养型微生物能从简单的无机物合成自身需要的糖、脂类、 蛋白质 、 核酸 、 维生素 等复杂的有机物,因此,培养自养型微生物的培养基完全可以(或应该)由简单的无机物组成。培养异养型微生物需要在培养基中添加有机物,而且不同类型异养型微生物的营养要求差别很大,因此,其培养基组成也相差很远。 2.营养物质浓度及配比合适 培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好,营养物质浓度过低时不能满足微生物的正常生长,浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用。另外,培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和(或)代谢产物的形成和积累,其中碳氮比(C/N)的影响较大。 3.适宜的pH 培养基的pH必须控制在一定的范围内,以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的最适pH条件各不相同,一般来讲,细菌与放线菌适于在 pH7~7.5范围内生长,酵母菌和霉菌通常在pH4.5~6范围内生长。值得注意的是,在微生物生长繁殖和代谢过程中,由于营养物质被分解利用和代谢产物的形成与积累,会导致培养基pH发生变化,若不对培养基pH条件进行控制,往往导致微生物生长速度或(和)代谢产物产量降低。因此,为了维持培养基pH的相对恒定,通常在培养基中加入pH缓冲剂。常用的缓冲剂是一氢和二氢磷酸盐(如K 2 HPO 4 和KH 2 PO 4 )组成的混合物。K 2 HPO 4 溶液呈碱性,KH 2 PO 4 溶液呈酸性,两种物质的等克分子混合溶液的pH值为6.8。当培养基中酸性物质积累导致H+浓度增加时,H+与弱碱性盐结合形成弱酸性化合物,培养基pH不会过度降低。如果培养基中OH-浓度增加,OH-则与弱酸性盐结合形成弱碱性化合物,培养基pH也不会过度升高。
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
免疫组化的二抗还有区别的么!要怎么选?
免疫组化大家基本上都做过,你知道有二抗,也应该知道免疫组化的原理就是一抗结合到目标蛋白,再有二抗来进行信号放大,大概是这样: 但是你知道二抗的信号放大实际上有多种方法……这就需要你进行二抗标记方法的选择,最简单的二抗标记方法是直接法: 就是直接在二抗上标记酶,比如HRP,来进行显色,这样的二抗实际上很便宜,但是缺点就是灵敏度低,好多低丰度的蛋白,结合不上,免疫组化染出来的效果就不太好。 第二种方法,叫做PAP,比如二抗标记了HRP,他们就在孵育二抗后,再孵育一种能结合HRP的一抗,就像这样: 这种方法灵敏度是上去了,但是非特异性增高了,于是被主流淘汰了。 第三种方法被称为ABC法或者SABC法,主要是在二抗上标记生物素,孵育二抗后,加入亲和素以及标记了HRP的生物素,以这样的聚合方式,来进行信号的放大作用: 这种方法的优点是能够成倍提高灵敏度,但同时也会提高非特异性,于是就产生了第四种方法,LSAB法标记的二抗: 这种方法,直接在亲和素上加上HRP标记,灵敏度也很高,同时降低了SABC法的非特异性。而且,LSAB法在实验的时一般孵育时间短(通常就10分钟)。 但SABC法和LSAB法在实验过程中会需要进行内源生物素封闭,会麻烦一些。为了省去麻烦,就产生了第五种标记方法,也就是Polymer法,就是在二抗上标记聚合的HRP: 这样二抗的信号就得到了放大,灵敏度也提高了,但Polymer法、SABC法、LSAB法,都不能用于定量实验,只能用在IHC上。 那免疫荧光呢?免疫荧光主流是采用直接法、LSAB法,以及直接标记或者LSAB标记的三抗来进行信号放大的。 总结一下,就是直接法的二抗便宜但是灵敏度差;PAP法基本已经淘汰,LSAB和SABC法的灵敏度高,但是贵,步骤多;Polymer法灵敏度高,步骤简单,但是贵。
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
生化试剂盒该怎么选择?
随着新技术和新项目的不断高速发展,各种生化试剂盒也在进入临床实验室。目前市面上有众多试剂盒,那么在开展新实验前,该如何选择与之相配的,合格有效的试剂盒呢? 一、生化试剂盒的分类 一般来说,生化试剂盒分为液体单试剂和液体双试剂两种。 1.液体单试剂 适用于半自动生化分析仪和小型自动生化分析仪。优点:使用方便;缺点:稳定性较差。 2.液体双试剂 相对于单试剂而言,提高了抗干扰能力,具有稳定性能较好,可消除样品自身空白等特点。此外还有多项同测组合试剂、浓缩试剂等。 二、如何选择生化试剂盒? 一方面,要看试剂盒的资质是否齐全,是否具有国家食品药品监督管理总局的相关批号,是否为合法有效试剂,是否具有相关临床试验验证等。 另外,还可以通过以下工作来进行判断是否适用于实验: 1.试剂空白吸光度 用蒸馏水做空白,用指定的空白液加入试剂作为样品测试,在测试主波长下,记录测试启动时的吸光度(A1)和约5分钟后的吸光度(A2),A2测试结果即为试剂空白吸光度测定值,应符合生产企业给定范围。这是判定试剂质量的一个有效指标。 2.试剂空白变化速率 对于速率法试剂盒,用指定的空白液加入试剂作为样品测试时,在测试主波长下,记录测试启动时的吸光度(A1)和约5分钟(T)后的吸光度(A2),计算试剂空白吸光度变化率(DA/min),应不超过生产企业给定值。测定试剂空白吸光度变化(ΔA/min),用来检查试剂在工作状态下的稳定性。 但事实上,试剂空白吸光度变化速率无法反映试剂盒的稳定性,试剂空白吸光度变化速率主要反映干扰程度和仪器的稳定性。 3.分析灵敏度 用吸光度差值(ΔA)或吸光度变化(ΔA/min)来表示单位浓度的被测物反应所引起的信号变化,其含义类似摩尔消光系数,应符合生产企业给定范围。需要注意的是,分析灵敏度不是越高越好,以适合待测物检测范围为原则。分析灵敏度一般用于批间比较,较能反映制造商的配方、原料的一致性。 4.线性范围 取高浓度样品和低浓度样品按不同比例混合成5个浓度做线性试验。线性范围内的分析性能应符合如下要求:①线性性相关系数r应≥0.990;②线性偏差应不超过生产企业给定值。试剂(盒)的线性范围越宽,临床复测几率越小,但与样品/试剂比例成反比。 5.重复性 1) 批内重复性 在重复性条件下,用高、中、低三个水平浓度(高、低浓度应超过参考区间20%~30%,中浓度水平在参考区间之内)的控制血清或新鲜人血清测试试剂,重复测试至少10次。 2)批间重复性 用质量控制血清测试3×3(3个批号,每个批号取3瓶)批间差,较能反映制造商的配方、原料的一致性。干粉或冻干试剂还需测定批内瓶间差,测定同一批号的试剂20瓶,用变异系数(CV)来表示。变异系数(CV)不超过生产企业给定值。 6.准确度 1)相对偏差 直接用试剂盒测定参考物质(平行3次),评价测定均值与靶值的偏离程度。也可用由参考方法定值的高、中、低三个浓度的人混合血清,用试剂盒平行测定3次,计算均值与定值的相对偏差。 2)比对试验 既无参考物质、参考血清,也无标准品,也可用比对试验来验证准确度。 7.校准品溯源、质控品赋值 1)校准品溯源性 根据GB/T21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容,明确溯源途径。 2)质控品赋值有效性 质控品的测定结果应在试剂盒规定的范围内。 8.稳定性 1)效期稳定性 取已到效期的试剂盒按以上评价方法对试剂盒性能指标进行评价。 2)热稳定性试验 生化试剂盒一般置2-8℃保存,为了快速有效地评价试剂盒的稳定性,可以用加速试验来估计。 3)开瓶稳定性 干粉试剂开瓶后(复溶后)在规定的储存条件下保存至预期时间内,产品的性能至少应符合线性和准确度的要求。
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
细胞培养中使用血清的缺点以及质量标准?
细胞培养中使用血清的缺点: 血清成分复杂,虽含许多对细胞有利成分,也含有对细胞有害的成分,使血清有几个明显的缺点: 1、对大多数细胞,在体内状态,血清不是它们接触的生理学液体,只是在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清,因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态,血清可能促进某些细胞的生长(成纤维细胞)同时抑制另一类细胞生长(表皮细胞)。 2、血清含一些对细胞产生毒性的物质,如多胺氧化酶,能与来自高度繁殖细胞的多胺反应(如精胺、亚精胺)形成有细胞毒性作用的聚精胺。补体、抗体、细菌毒素等都会影响细胞生长,甚至造成细胞死亡。 3、取材中可能带入支原体、病毒,对细胞产生潜在影响,可能导致实验失败或实验结果不可靠性。 4、动物个体不同,血清产地、批号不同,每批质量差异甚大,其成分不能保持一致。 5、血清的使用使得实验和生产的标准化困难,其中的蛋白质使得某些转基因蛋白生物药品生产中分离纯化工作很难完成。 6、大规模生产中,血清来源越来越困难,价格昂贵,是构成动物细胞培养对生产成本的主要部分之一。 血清的质量标准: 血清质量高低取决于两方面因素:一是取材对象,二是取材过程。用于取材的动物应健康无病并且在指定的出生天数之内,取材过程应严格按照操作规程执行,制备出的血清要经过严格的质量鉴定。WHO公布的《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中的要求: 1、牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或。并应具备适当的监测系统。 2、有些还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。 3、证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。 4、血清要通过滤膜过滤除菌,保证无菌。 5、无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染,有些要求无细菌噬菌体污染。 6、对细胞有良好的支持繁殖作用。 血清的质量标准: 血清质量高低取决于两方面因素:一是取材对象,二是取材过程。用于取材的动物应健康无病并且在指定的出生天数之内,取材过程应严格按照操作规程执行,制备出的血清要经过严格的质量鉴定。WHO公布的《用动物细胞体外培养生产生物制品规程》中的要求: 1、牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或。并应具备适当的监测系统。 2、有些还要求牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。 3、证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的抑制物。 4、血清要通过滤膜过滤除菌,保证无菌。 5、无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染,有些要求无细菌噬菌体污染。 6、对细胞有良好的支持繁殖作用。
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
血清在细胞培养中的鉴别方法及作用?
鉴别方法: 血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出,放入试管中,不加抗凝剂,则凝血反应被激活,血液迅速凝固,形成胶冻。在凝血过程中,纤维蛋白原转变成纤维蛋白块,所以血清中无纤维蛋白原,这一点是与血浆zui大的区别。而在凝血反应中,血小板释放出许多物质,各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化,如凝血酶原变成凝血酶,并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。为避免抗凝剂的干扰,血液中许多化学成分的分析,都以血清为样品。 主要作用: ● 提供基本营养物质:氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等,是细胞生长必须的物质。 ●提供激素和各种生长因子:胰岛素、肾上腺皮质激素(地塞米松)、类固醇激素(雌二醇、睾酮、孕酮)等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。 ●提供结合蛋白:结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质,如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等,转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。 ●提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。 ●对培养中的细胞起到某些保护作用:有一些细胞,如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。这种作用是偶然发现的,现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保护细胞免受机械损伤,特别是在悬浮培养搅拌时,粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子,他们在代谢解毒中起重要作用,如SeO3,硒等。
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
ELISA试剂盒酶标抗体的量?
过碘酸盐氧化法:本法只适用于含糖量较高的酶。辣根过氧化物酶的标记常用此法。反应时,过碘酸钠将 HRP 分子表面的多糖氧化为醛基很活泼,可与蛋白质上的氨基形成 Schiff 氏碱而结合。酶标记物按克分子比例联结,其比例为:酶 / 抗体 =1-2/1 。此法简便有效,一般认为是 HRP zui可取的标记方法,但也有人认为所有试剂较为强烈,各批实验结果不易重演。 按以上方法制备的酶结合物一般都混有未结合物的酶和。理论上,结合物中混有的游离酶一般不影响 ELISA 中zui后的酶活性测定,因经过彻底洗涤,游离酶可被除去,并不影响zui终的显色。 ELISA 试剂盒但游离的抗体则不同,它会与酶标抗体竞争相应的固相抗原,从而减少了结合到固相上的酶标抗体的量。 ELISA 试剂盒中常用的酶一般都用此法交联。它具有操作简便、有效(结合率达 60%-70% )和重复性好等优点。缺点是交联反应是随机的,酶与抗体交联时分子间的比例不严格,结合物的大小也不均一,酶与酶,抗体与抗体之间也有可能交联,影响效果。诹讲椒ㄖ校 ?br 先将酶与戊二醛作用,透析除去多余的戊二醛后,再与抗体作用而形成酶标抗体。 ELISA 试剂盒也可先将抗体与戊二醛作用,再与酶联结。两步法的产物中绝大部分的酶与蛋白质是以 1:1 的比例结合的,较一步法的酶结合物更有助于本底的改善以提高敏感度,但其偶联的有效率较一步法低。
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
细胞培养技术注意事项大汇总?
1. 实验进行前,无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌,以70 %ethanol 擦拭无菌操作抬面,并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后,才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株,且即使培养基相同亦不共享培养基,以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后,将实验物品带出工作台,以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后,再进行下一个细胞株之操作。 2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置,其它实验用品用完即应移出,以利于气流之流通。实验用品以 70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域,勿在边缘之非无菌区域操作。 3. 小心取用无菌之实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约45° 角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。 4. 工作人员应注意自身之安全,须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作,并选择适当等级之无菌操作台(至少 Class II)。操作过程中,应避免引起aerosol 之产生,小心毒性药品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖锐针头之伤害等。 5. 定期检测下列项目: 5.1. CO2 钢瓶之CO2压力 5.2. CO2 培养箱之CO2浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水,每周更换)。 5.3. 无菌操作台内之airflow 压力,定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜,预滤网(300小时/预滤网,3000 小时/HEPA)。 6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750),定期更换水槽的水 请问工作浓度的胰酶是不是应保存在-20度?如果放在4度冰箱可以保存多久呢?是不是几个小时就会失去活性? 平时放在-20度,分装在50毫升螺口管,用时拿一管放4度用。 1. 认真按照操作规程进行实验,一般不大会导致污染,很多情况下是由于所用的试剂或培养基有污染而使实验失败, 2. 粉末培养基配制好后(加了血清),一般在4度尽量不要超过1个月,如在-20度存放时间可长一些,但zui好也不要超过3-4个月,可能对于永生化细胞株来说要求不是太高,但我在过去的4年里一直是作原代 细胞培养 的,细胞娇弱,经验表明放置时间不宜过长。 3. 关于实验用品的清洗与消毒,我的经验是:用过的玻璃器皿先在清水中浸泡30min以上,然后加少许清洗剂,以超声波洗涤30min左右,(如无超声波洗涤器可用软毛刷轻轻刷洗干净),捞出晾干,再在铬酸洗液中浸泡6-18h(或过一夜)后,自来水清洗10-15遍,双蒸水清洗3-4遍,晾干,高压消毒后即可使用。 许多塑料制品也可以高压消毒,例如培养瓶盖,胶塞,吸头等。不能用于高压的一般均已制成一次性作用的商品了,当然如果 money有限,如进口的培养板、皿等,也可以重复使用1-2次,我当时使用方法是将其完全清洁后,使用前在紫外灯下敞开照射1-1.5h即可,我做过多次,没有出现问题。塑料培养瓶由于清洗消毒不便,zui好不要重复使用,如一定要重复用,可用环氧乙烷等消毒,(消毒后一定要放置半年以上方可使用) 在光镜下,上皮细胞通常呈“铺路石”样排布,细胞之间有拉丝现象(即距离较远的细胞可以通过细长的触手相连),细胞有成片生长的特性。而间质细胞通常呈梭形,没有有成片生长的特性,细胞之间的不紧密。但是细胞的形态特征会因为生长条件的改变而改变,如HeLa细胞是上皮细胞,但是在酸性培养条件下会变为梭形。
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
来自话题:
动植物
,
有个性的植物组培常用培养基,你造么?
人是生命科学级别高的一种。人有七情有六欲,有行为表情,有属于自己的个性。而植物组培常用培养基培养基它也有属于自己的个性,下面我们就来解读一下培养基的四大特性。 1、高盐成分培养基包括MS、LS、BL、BM、ER等培养基。其中MS培养基应用最广泛,其钾盐、铵盐及硝酸盐含量均较高,微量元素种类齐全,其养分数量及比例均比较合适,广泛用于植物的器官、花药、细胞及原生质体的培养。LS、BM、ER培养基由MS培养基演变而来 2、硝酸钾含量较高的培养基包括B5、N6、LH、GS等培养基。 ①B5培养基除含有较高的钾盐外,还含有较低的铵态氮和较高的盐酸硫胺素,较适合南洋杉、葡萄及豆科与十字花科植物等的培养。 ②N6培养基(朱至清等1975)系我国学者创造,获国家发明二等奖,适用于单子叶植物花药培养,柑橘花药培养也适合,在楸树、针叶树等的组织培养中使用效果也好。 ③SH培养基是矿盐浓度较高的一种培养基,其中铵与磷酸是由磷酸二氢铵 (NH4H2PO4)提供的,这种培养基适合于某些单子叶及双子叶植物的培养。 3、中等无机盐含量的培养基 ①H培养基本培养基大量元素约为MS培养基的一半,仅磷酸二氢钾及氯化钙稍低,微量元素种类减少,而含量较MS为高,维生素种类比MS多。适于花药培养。 ②尼奇培养基(Niotsch1969)此培养基与H培养基成分基本相同,仅生物素比H培养基高10倍。也适合于花药培养。 ③米勒培养基(Miller1963)此培养基和Blaydes(1966)培养基二者成分完全相同。适合大豆愈伤组织培养和花药等培养用。 4、低无机盐培养基大多情况下用于生根培养基。有以下几种: ①改良怀特培养基(White1963) ②WS培养基(Wolter&Skoog1966) ③克诺普液(Knop1965)花卉培养上用得多。 ④贝尔什劳特液(Berthelot1934) ⑤HB培养基(Holley&Baker1963)此培养基在花卉脱毒培养和木本植物的茎尖培养中效果良好。其成分是大量元素比1/2克诺普(Knop)液稍多,微量元素用贝尔什劳特液,每升培养基中加0.5ml。 希望以上文献汇总能帮助大家了解目前研究进展及我们的核心技术,欢迎各位老师联系我们咨询、提出意见,愿我们的努力成果与您的科研碰撞出不一样的火花!
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
细胞铺板:铺得均匀的小技巧?
做细胞生物学实验,细胞铺板大概是常见的一个实验。但是有很多人不是很得要领,铺得不是很均匀: 要么中间密周围稀,要么周围密中间秃顶。咋整?分享以下几点经验以飨各位。 一般96孔板我每孔是加100微升细胞悬液,从孔的左边靠近底部加入,加完半边板后,将未加的细胞悬液混一下再继续加剩余的半边板子,都加完后盖上盖子,左手轻轻扶住板的左边,右手轻轻敲击板的右边缘,注意把握力度(我一般轻巧敲三下),太强或次数太多会导致细胞集中成堆,将板顺时针旋转(逆时针效果不好),依次敲击剩余三个边,静置约5分钟,放入37度培养箱。 6孔板、12孔板或24孔板,我均采用将个孔加入少量无血清培养基,晃动浸润整个孔底,然后用移液枪吸至第二孔,同样方法浸润孔底,其它孔一次类推,这样整个孔底都是湿润的,细胞悬液会平铺在整个孔底,加细胞悬液的时候可以避免加在中间,中间细胞多,而加在周边晃匀后会出现周边细胞多中间少的现象,细胞分散较均匀,注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。这个方法就是有点慢,但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式,但力度没有96孔板好掌握,效果没有96孔板好,所以我放弃改用浸润孔底的方法。 细胞悬液加完后,将细胞培养板抬高,对着灯光,从底部往上看,看细胞有没有抱团。然后从底部敲击,使之分散。如果实验室有平板振荡器的话,我建议用这个仪器稍振荡一下,效果不错,就是振幅小,频率高的那种。 细胞要尽量打散,大部分呈单个状态。离心后,要充分悬浮。还有转移到六孔板后,是要晃得!晃的时候zui好不要让那个细胞液转圈,不然细胞就全被带到中间去了,就会不均匀。 一瓶细胞长满后,正常处理,在培养瓶里吹匀,然后铺6孔板,每孔2毫升,铺完之后不用观察直接用酒精棉擦拭,然后放到培养箱里,轻微的左三圈 右三圈 前三圈 后三圈。基本上24小时之后观察 每孔的细胞都会很均匀。 计算好所需要的全部液体量和细胞量,混匀后,加到六孔板里,六孔板按横8字型晃,显微镜下观察,如果不均匀,按上述方法再晃。如果细胞未计数直接种的话,在种六孔板的过程中,随时晃一下混匀用的瓶子,瓶子我通常是顺时针或逆时针转圈。 放在水平板面上先上下移动,再左右移动,每个方向5到6次,但关键的是摇完后zui好直接放入培养箱中,不要再做过多的运动,例如放到镜下去看,否则很容易就又聚到中间去了。
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
抗生素使用的几大误区你了解多少?
抗生素如同一把双ren剑,在治疗疾病的同时,如果使用不当,也会带来严重的不良反应以及造成耐药菌株的增加,耐药菌株已构成了对人类健康的严重威胁。以下是常见的抗生素使用误区 误区一:将抗生素作为药 抗生素问世后,创造了许多医学奇迹,因此有的人就将抗生素作为药,不管得了什么病,都用抗生素治疗。 如有些人一有头疼发热或皮肉伤就自行服用抗生素。还有些人有时不慎扭伤胳膊或腿脚,受伤的部位出现红肿热痛,就认为有炎症了,赶快用抗生素消炎,其实这种炎症与细菌感染引起的炎症有本质区别,它是由于局部组织损伤形成的“ 无菌性炎症 ”,并不是细菌感染所致的。还有些人将对某种物质过敏而引起炎症反应,如 过敏性皮炎 、过敏性鼻炎等,也认为是需要用抗生素治疗的疾病,其实抗生素对此不仅无效,反而还会带来副作用。 误区二:感冒用抗生素好得快 “感冒了?快吃点消炎药吧,好得快!”不少人对这样的说法都不陌生。 上呼吸道感染 以及咽痛、咽峡炎,大部分是 病毒感染 所致,无需使用抗生素。医生在日常的诊疗中,碰到许多的感冒患者主动要求开消炎药即抗生素类药物,甚至要求 静脉滴注 抗生素,并且说感冒后输液会加快痊愈的速度。这完全是无稽之谈。感冒是一自限性疾病,最终要靠人体的自身免疫力将病毒清除。只要充分休息、多饮水、合理饮食就可痊愈。只有感冒合并细菌感染,才可以应用抗生素。 误区三:抗生素好得快 临床上常会碰到这样的患者,要求医生开一些“好的”、“新的”、“贵的”抗生素。其实抗生素无与低级之分,只有病原菌对药物敏感与不敏感之分,以价格判断药物好坏是没有道理的。没有一种抗生素能抑制或杀灭所有细菌,只有使用对引起感染的细菌敏感的抗生素才能有效,应根据患者的临床情况及结合有关化验结果合理选用。 误区四:服药随心所欲 临床上常碰到两种现象,一是感到症状好转就擅自停用抗生素,另一种是任意延长疗程。前一种人认为药吃多了对身体没有好处,所以只要症状好转或消除,就自行停药,这样可能会造成疾病的复发或治疗不彻底。后一种人常常担心疾病治疗不彻底,擅自延长药物的使用时间,这样一方面造成浪费,更严重增加了药物的副作用。应用抗生素必须在医生的指导下进行,按医嘱,按规定的剂量和疗程使用,不可以自作主张更改用药次数、剂量及疗程。 ●相关链接:特殊人群用药 儿童各个器官未发育成熟,有些组织或者器官生长非常迅速,如果不慎使用药物可能造成非常严重的后果。如氨基糖苷类的药物,可以引起耳神经损害;儿童期使用四环素,可以引起四环素牙和骨骼发育的损害;氯霉素可以引起肝脏损害等。 孕妇应避免使用对胎儿有影响的药物。对孕妇相对比较安全的抗生素是青霉素类和头孢菌素类、红霉素类的药物,其他类别的药物尽量避免或禁用。 老年人肝脏、肾脏、心脏、肺功能逐渐减退,如果使用抗生素不合理,会损害这些器官,加重器官衰退。老年人使用某些药物的用量、方法和普通人不应该相同,有时需减量使用,或延长用药间隔时间。
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
注意!注意!原装ELISA试剂盒的效果标准?
原装ELISA试剂盒的应用 利用基因定点修饰技术CRISPR-Cas系统,可快速地在单倍体干细胞上进行定位的基因修饰或敲除,并且处理后的细胞仍能维持单倍体和多能性状态。尤为重要的是,该工作证明了大鼠单倍体胚胎干细胞同样具有替代精子与卵母细胞“受精”并产生健康大鼠的能力。 第二、如何去判断原装ELISA试剂盒检测结果 1.目测定性法:加入底物经酶解和终止反应后,肉眼观察阳性孔颜色明显深于阴性对照;与阴性对照的颜色接近者,判定为阴性。 2.以样品孔的OD值大于阴性对照OD值+2~3SD,作为阳性结果的阈值。 3.以P/N值(阳性孔OD值/阴性孔OD值)大于或等于2.1为阳性;P/N值小于2.1,但大于1.5为可疑;P/N小于1.5为阴性。 4.定量测定结果根据标准曲线计算样品中待测物的含量。 第三、对原装ELISA试剂盒的研究表明 原装进口大鼠ELISA试剂盒进行了研究,应用双抗体夹心法测定标本中大鼠性激素结合球蛋白(SHBGELISA试剂盒 水平。用纯化的大鼠性激素结合球蛋白(SHBG)ELISA试剂盒使用说明书抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入类性激素结合球蛋白(SHBG)ELISA试剂盒 ,再与HRP标记的类性激素结合球蛋白(SHBG)ELISA试剂盒 抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的类性激素结合球蛋白(SHBG)ELISA试剂盒 呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大鼠性激素结合球蛋白(SHBG)ELISA试剂盒浓度。 原装ELISA试剂盒优势已得到广大科研者的高度认可,您估计还不知道吧? 1.系出名门: 试剂盒原料如抗体对、标准品、酶结合物和底物等均选自国际知名大厂,并经过严格的甄选。 2.认可: 目前已有超过290篇SCI文献引用,其中包括Nature, PNAS等杂志引用。同时有超过个1100篇国内核心期刊、博士及硕士学位论文引用。 3.品质: 所有指标试剂盒均经过近乎苛刻的质检标准。对不合格产品执行零容忍。 4.广泛使用: 全国超过2000个客户在使用,累计检测超过70万样本。 5.品种齐全: 提供近200种常用指标检测试剂盒,如细胞因子、趋化因子及其他可溶性蛋白等。提供人、大鼠、小鼠、猴和牛的相关检测试剂盒。
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
抗血清制备必须注意的问题?
抗血清为含有某一类具有特异免疫功能的抗体分子的血清,一般为动物被人工注射某类抗原后制备的动物血清。价的抗血清用于研究工作以及疾病的诊断和治疗。 一种抗原能否引起抗体生成反应,一方面取决于抗原分子表面有无抗原决定簇(Antigenic determinant),另一方面取决于机体的免疫状态,当具备以上两个条件后,抗体生成将遵循抗体生成的一般规律——初次反应和再次反应。 抗原的种类繁多,包括天然的蛋白质抗原和细胞性抗原、合成性抗原以及基因工程抗原等,不同的抗原免疫动物具有不同的特殊性。一般完全抗原免疫动物需加用佐剂,尤其在使用可溶性抗原时,以期得到价的抗血清;合成性抗原和基因工程抗原等半抗原物质需先通过人工的方法与蛋白质载体连接后再与佐剂混合免疫动物,方可获得理想的免疫效果。使用佐剂后可增加抗原的免疫原性和延长抗原在机体内存留的时间,从而改变了抗原原有的免疫原性。 其注意事项有如下几点: 1、动物的免疫反应存在着个体差异,甚至有人报告不同品种动物一次免疫后产生的抗体的差别可高达500倍,所以制备抗血清时不能只免疫一只动物,一般zui好免疫3~4只,因为有的动物可能产生抗体效价很低或不产生抗体,免疫反应好的动物所能提供的抗体往往高于一般动物3~4倍。 2、制成的抗原乳剂是否为油包水乳剂应进行检查,否则会影响免疫效果,如不是油包水乳剂,应重新制备。 3、要制备价的抗体,必须要加佐剂(一般采用完全福氏佐剂),加佐剂后免疫动物,抗体效价至少可增加5倍。但也应考虑到,如果抗原中有微量的杂蛋白存在,即使0.005mg,亦可因有佐剂而产生非特异性的抗体,所以要根据实验需要和抗原的纯度适当地使用佐剂。 4、分装保存的抗血清应注明抗血清的名称,效价,制备日期以及包装量。 5、当抗原量过少不易提纯时,可采用抗原抗体在琼脂扩散中形成的沉淀线直接免疫动物制备抗体。 6、抗血清效价一般以抗血清稀释倍数表示。血清效价的检测方法很多,灵敏度各不同,因此在表示抗血清效价时,应标明检测方法。另外,在沉淀反应中,出现沉淀时的抗原、抗体比例有一较大的范围,如用不同浓度的抗原测定效价时,结果会因此有别,所以在测定抗血清效价时,需注意抗原的浓度。 7、为制备单价特异性高的抗血清,所用抗原纯度越高越好,因此,在纯化抗原过程中应尽量除去可能存在的杂蛋白,这样可以省去许多时间来吸收抗血清中的非特异性抗体。
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
如何清洗ELISA酶标板?
正确地清洗酶标板是成功完成ELISA实验的关键之一。稀释浓缩洗涤液时应使用去离子水或蒸馏水。 以下是正确清洗酶标板的注意事项: 使用多通道移液器 首先,检查酶标板确保其牢固放置于板架上。随后,翻转酶标板倾倒液体。按照说明书所示体积在每孔加入洗涤液。按照推荐的时间,计时器设置洗涤液浸泡时间。再次翻转酶标板倒出液体,用干净的吸水纸轻拍,将孔内液体拍干。按照说明书建议的次数重复以上步骤。最后一次在吸水纸上拍干后迅速进行下一步操作。避免孔内液体自然风干。 使用多管道分液器或洗板机 使用与分液器或洗板机配套的真空泵。确保每个通道的分液管道和吸液管道正常运作。设置每次洗涤时的洗涤液的体积和浸泡时间,随后放入酶标板。确保吸液后没有洗涤液残留在孔内。洗板太快或太慢、洗涤或吸液不完全、孔内液体自然风干等均会影响ELISA的精准
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
来自话题:
工艺技术
,
检测细胞增殖最准确可靠的方法---检测DNA合成?
检测DNA合成是目前检测细胞增殖最准确可靠的方法,目前常用的方法有如下几种: (1)3H-胸腺嘧啶核苷渗入法(3H-TdR):胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA合成的前体物,处于S期的细胞不断地摄取TdR用以合成DNA。3H-TdR掺入法是将被放射性标记的3H-TdR掺入DNA合成期的细胞,细胞内3H-TdR掺入量的多少可客观反映细胞复制DNA能力的大小,从而问接了解细胞增殖情况。通过检测。H放射活性即可反映DNA含量。 1976年Mattem等首先采用此方法做体外药敏试验。此后经过长期的广泛研究,也己证实该法对各种动物肿瘤及人类肿瘤均有较好的预测价值和重复性,主要用于细胞增殖的检测与药物敏感性试验等。但这种方法操作复杂,试剂含有同位素,具有放射性,对实验者有一定的危害,故限制了它的应用。 (2)BrdU检测法:BrdU中文全名为5-溴脱氧尿嘧啶核苷,为胸腺嘧啶的衍生物,可代替胸腺嘧啶在DNA合成期(S期)掺入,而后利用抗BrdU的抗体耦联不同的酶,加入不同发光特性的底物,然后再通过比色法、化学发光检测或荧光信号检测底物强度等步骤,反映BrdU的掺入量。该方法不需要再和放射性物质打交道。 (3)EdU检测法:BrdU虽然解决了接触同位素的问题,但该方法需要变性DNA后才能与抗体结合,但这就破坏了DNA双链结构,对某些后续或同时进行的试验,如其他染料的结合染色有影响。现在有一种新的检测方法能避免这种情况的发生——EdU检测。EdU(5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷)也是一种胸腺嘧啶核苷类似物,但其连有的炔羟基团在天然化合物中很少见,在细胞增殖时能够插入正在复制的DNA分子中,基于EdU与染料的共轭反应可以进行高效快速的细胞增殖检测分析,可以有效地检测处于S期的细胞百分数。与传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法相比,更简单,更快速,更准确。
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
【技术贴】脂质体转染方法?
外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入;磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞;病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大;病毒法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响;所以现在对于很多普通细胞系,一般的瞬时转染方法多采用脂质体法。 利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性,因此脂质体与质粒的比例,细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题,通过实验摸索的合适转染条件对于效率的提高有巨大的作用。 1、细胞传代 1)弃掉培养皿中的培养基,用1ml的PBS溶液洗涤两次。 2)用移液枪加入1ml胰酶,消化1min(37℃,5% CO2)。用手轻拍培养瓶壁,观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。 3)加入1ml的含血清培养基终止反应。 4)用移液枪多次吹吸,使细胞完全分散开。 5)将培养液装入离心管中,1000rpm离心5min。 6)用培养液重悬细胞,细胞计数后选择0.8 x 106个细胞加入一个35mm培养皿。 7)将合适体积完全培养液加入离心管中,混匀细胞后轻轻加入培养皿中,使其均匀分布。 8)将培养皿转入CO2培养箱中培养,第二天转染。 2、细胞转染 1)转染试剂的准备 A、将400ul去核酸酶水加入管中,震荡10s,溶解脂状物。 B、震荡后将试剂放在-20℃保存,使用前还需震荡。 2)选择合适的混合比例(1:1-1:2/脂质体体积ul:DNA质量ug)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA,震荡后在加入合适体积的转染试剂,再次震荡。 3)将混合液在室温放置10-15min。 4)吸去培养板中的培养基,用PBS或者无血清培养基清洗一次。 5)加入混合液,将细胞放回培养箱中培养一个小时。 6)到时间后,根据细胞种类决定是否移除混合液,之后加入完全培养继续培养24-48h。 3、第二次细胞传代 1)在转染后24h,观察实验结果并记录绿色荧光蛋白表达情况。 2)再次进行细胞传代,按照免疫染色合适的密度0.8 x 105个细胞/35mm培养皿将细胞重新分入培养皿中。 3)在正常条件下培养24h后,按照染色要求条件固定。
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
细胞培养目的与用途?
1、科学研究:药物研究开发与基础研究 药物研究与开发:新药筛选、疫苗 研究与开发、基因工程药物研究与开发、细胞工程药物研究与开发、单克隆抗体制备 基础研究:药物作用机理、基因功能、疾病发生机理 2、 生物制药:疫苗生产、基因工程药物生产、诊断用和药用单克隆抗体生产、细胞工程药物生产细胞培养基本条件 3、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一,培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质,而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。 细胞培养基的种类很多,按其来源分为合成培养基和天然培养基(目前使用的培养基绝大部分是合成培养基),按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌,液体培养基由专业商家提供,用户可直接使用,非常方便。每种细胞都有其合适的培养基培养基:MEM、DMEM、 IMDM、 RPMI-1640、F12、F12K (具体细胞用什么培养基要以细胞说明书为准,每一种细胞的培养基都是不一样的)。 液体培养基保存: 液体培养基保存: 4℃冰箱避光保存,实验前放入 37℃预热。未加血清液体培养基有效期为 12 个月。液体培养基中的 L- 谷氨酰胺会随着储存时间的延长而慢慢分解。如果细胞生长不良,可以再添加适量 L- 谷氨酰胺。 干粉培 养基保存:4℃冰箱避光保存,有效期 36 个月。 目前,市场上可提供干粉培养基和液体培养基。干粉培养基需使用者自己配制并灭菌,其优点是价格便宜。缺点是配制过程繁琐,质量不易控制。液体培养基是由专业产家按标准规模化生产,不仅质量得到保证,而且使用十分方便。
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
特级胎牛血清主要作用有哪些?
由于 特级胎牛血清 具备稳定性好、内毒素低和较完善的检测报告,对于使用环境要求也不高,无论是医疗机构、生产研发机构或者小型实验室都可适用,所以稳定性好的特级胎牛血清受到各行各业用户的推崇和喜爱,但胎牛血清有哪些作用很多用户并不清楚,目前胎牛血清主要的作用有以下三方面: 1.提供营养物质 由于特级胎牛血清是从母牛体内提取出来的高级营养物质,其营养成分非常高,可以为细胞的生长提供各类必须的生长营养物质,可促进细胞正常生长,再加上血清可更好的结合蛋白物质,能有效的识别对微生物有利的各类维生素、脂类以及激素类,为细胞提供营养成分。 2.解毒、酸碱平衡作用 特级胎牛血清在有些情况下可与蛋白质结合,结合后其络合物可与有毒的热源或则金属结合在一起,从而起到解毒的效果。另外特级胎牛血清还可作为酸碱缓冲液对培养基中的酸碱起到平衡的作用,不用另外单独加入其它缓冲剂。 3.抑制蛋白酶活性 由于特级胎牛血清可提供一定的抑制蛋白酶活性的物质,可以让细胞中的过剩的胰蛋白酶失去活性,从而更好的保护细胞膜、细胞壁不受伤害,起到保护细胞的作用,所以其在各类实验室、医疗实验机构应用极为广泛。 目前,服务完善的特级胎牛血清主要的作用除了能够为细胞提供必需的营养物质、对培养基进行酸碱平衡、解毒以及抑制某些酶制剂的活性外,特级胎牛血清还能为细胞做分离液、做动物培养基以及作为专门的检测制剂等作用。随着胎牛血清提取技术的不断改良,特级胎牛血清作用也将越来越多。
查看更多
0条评论
登录
后参与评论
上一页
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
下一页
简介
职业:上海古朵生物科技有限公司 - 销售经理
学校: -
地区:上海市
个人简介:
上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品,励志研发和销售的综合性生物公司,产品远销多个国家和地区,我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向,不断开发高质量的新产品,提供客户满意的综合服务质量”的方针。
查看更多
企业简介
企业名称:上海古朵生物科技有限公司
企业性质:贸易商,代理商,
主营业务:质粒载体定制,ELISA检测试剂盒,细胞培养,抗体抗原,蛋白纯化,染色液溶液,标准品对照品,微生物培...
进入商铺
喜爱的版块
返回首页
精细化工
问题1k
微生物
问题2k
生物医药
问题220
化学学科
问题13w
说・吧
问题0
仪器设备
问题12w
日用化工
问题2k
生物医学工程
问题7k
个人简介
上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品,励志研发和销售的综合性生物公司,产品远销多个国家和地区,我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向,不断开发高质量的新产品,提供客户满意的综合服务质量”的方针。
已连续签到
天,累积获取
个能量值
第1天
第2天
第3天
第4天
第5天
第6天
第7天
马上签到
这是一条消息提示
黄姜粉末属于爆炸性粉尘吗?.请盖德化工网盖德问答的高手、专家们帮忙看下
确定
取消
登录化工知识社区盖德问答
微信登录
账号登录
请用微信扫描二维码登录
"盖德问答"
忘记密码
|
免费注册
提醒
您好,您当前被封禁
天,这
天内您将不能登陆盖德问答,离解封时间还有
天
我已了解
欢迎加入化工知识社区盖德问答
请打开微信扫描二维码
欢迎加入化工知识社区盖德问答
欢迎你!
,完善下你的信息,以后你也可以使用手机号和密码来登录了。
获取验证码
欢迎加入化工知识社区盖德问答
请选择您感兴趣的类别:
提问
问题标题
问题描述(可不填)
请描述...
选择类别
选择分类
化学
生物学
药学
其它
选择二级分类
提醒
提问需要5个能量值,您当前能量值为
,请完成任务提升能量值
去查看任务