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古朵生物告诉你如何做细胞爬片? 细胞爬片是让玻片浸在细胞培养基内，细胞在玻片上生长。细胞爬片怎么操作呢，需要做哪些准备呢，细胞爬片怎么固定呢，今天，古朵生物统统告诉你。细胞爬片的准备 1.盖玻片的选择：爬片可用一般的盖玻片，也可用专用细胞爬片（价格比较昂贵），但是细胞贴壁牢固，拍出照片效果好； 2.爬片的剪裁：可根据自己的需要，到染色时再将之切开，这样既保证了细胞均一性，又可同时做几个指标的染色剪裁成合适大小，置于6孔板、12孔板或24孔板； 3.爬片的使用前处理：将剪裁好的爬片，置于浓硫酸中浸泡并过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再置于无水酒清中浸泡6小时，再用三蒸水冲洗3遍（个人认为主要目的是将酸冲洗干净就可以了，如果不干净的话，细胞帖壁不好），放在饭盒或者玻璃培养皿中烘干后进行高压消毒。高压后取出放入烤箱中烤干，备用。烤干后可放入超净台中。 4.多聚赖氨酸的使用：很多人都将玻片用此处理，以使细胞与玻片结合更牢。不要过多使用聚赖氨酸，保证细胞贴壁完好，且在做后续的免疫细胞化学染色、TUNEL等凋亡检测、免疫荧光等也从未脱过片。细胞爬片的操作 1.胰酶消化细胞后计数重悬细胞于完全培养基中。 2.加细胞前，根据玻片的大小，先在每个孔里准备放爬片的位置滴少量培养基，使玻片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起，然后放玻片，防止加细胞悬液时玻片漂起，造成双层细胞贴片。(整个过程注意无菌操作) 3.根据自己的需要选择合适的细胞密度接入培养板内即可。 4.待细胞贴壁后，可去上清加含药培养基。 5.按照实验设计，作用一定时间后取玻片。取玻片时由于玻片与培养皿底结合较紧，张力较大，一般将注射器针头针尖向背面弄个小钩，这样将爬片轻轻勾起，用小镊子取出就可以了。如果要做诸如24h，48h，72h等这样时间点的实验的话，将所需数量的爬片取出时应用酒精灯火焰烧一下针头和镊子。末取出的可接着继续培养。细胞爬片的固定在保存细胞爬片的时候，一般用培养皿或板，先在皿底放一层面巾纸，然后再放爬片，这样方便做实验时取片。细胞爬片取出后，一般用PBS洗2遍，然后再做固定。当然，有例外，比如做凋亡的TUNEL染色时就避免洗，因为凋亡的细胞在洗的过程中有可能会脱落。然后盖上盖子，并在盖子上做标记，为避免混淆，可用透明胶带将盖子和皿连在一起。一般-20℃保存2-3个月的片子做免疫组化是没有问题的。查看更多

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你知道每天保护我们的抗体是什么吗? 抗体的本质是免疫球蛋白（immunoglobulins），指具有抗体（Ab）活性或化学结构，与抗体分子相似的球蛋白。而抗体药物则是将特异性地针对某种疾病的抗体人源化改造后得到的靶向药物。免疫球蛋白一般是由两条相同的轻链和两条相同的重链通过链间二硫键连接而成的肽链结构，它分为五类，即免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。详情见表1。表1. 五种Ig的功能、分布 [1] 免疫球蛋白G(IgG) 这些免疫球蛋白的功能和分布各不相同，比如说 IgG分布于血清和组织，是我们最主要的抵御病原体的抗体类型，起到了重要的二次防御的功能；而 IgA则负担黏膜免疫的重要作用；最神秘的当然是IgD啦，到现在功能还没有完全阐释清楚，有兴趣的小伙伴可以研究一下哦。而在形形色色的抗体种类中又有各种亚型，例如 IgG在人体内有4种亚型，在我们人体中以浓度高低分为IgG1、 IgG2、 IgG3、 IgG4，在小鼠中则是IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3。而IgA则有IgA1和IgA2两种亚型，见表2。表2. 各种免疫球蛋白的亚型 [2] 那么抗体亚型是怎么区别的呢？就拿IgG来说吧。原来，不同种类的IgG亚型之间，他们的二硫键数量和位置各不相同，如下图1。二硫键一般分布在铰链和上部CH2结构域中参与与IgG-Fc受体（FcγR）和血清补体Clq的结合。继而由FcγR与下游的白蛋白结合起始抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（ADCC）。图1. 人IgG4中亚型结构示意 [3] 4种不同的结构为IgG亚型带来了不同的FcγR受体结合能力，受体结合能力越强，引起的免疫反应程度也就越强。上图中我们能够看到IgG3的铰链区与其他相比显得格外“引人注目”，可是它与FcγR受体之间的结合能力却是最弱的，所以在抗体药物开发中大家往往避免使用IgG3这种亚型而更偏性于IgG1、IgG4的亚型结构。这里跟大家透露一下，当时治疗卡特总统的Keytruda其实就是一种IgG4的改造抗体。那么抗体药物应该如何选择抗体亚型呢？请各位看官稍安勿躁，咱们下回分解。免疫球蛋白A(IgA) 除了IgG的四种亚型，还有 IgA的两种亚型：IgA1和IgA2 。IgA可以存在于血清中也可以作为一种分泌蛋白分泌到黏膜及部分体液中。其中 IgA1 在血清中含量较高，在大多数淋巴细胞中占优势；而 IgA2则在分泌型淋巴细胞中占比较高，如肠淋巴组织；IgA2的重链与轻链并不通过二硫键链接而是通过非共价键链接。在分泌物的成分各有不同，在有些分泌物中IgA1较多，有些则IgA2占优势。在血清中，IgA以单体状态存在，如下图A、B。除单体外， IgA还可以二聚体（如下图C、D）甚至四聚体的形式存在。二聚体形式下，2个单体一条重链的C端各伸出一段18氨基酸的尾巴（tailpiece）通过二硫键形成J链（图2C中黄色部分），有时一段分泌成分（短肽）也参与其中，固定二聚体结构（图2D中深蓝色部分）。图2. 人IgA1和IgA2的三维结构 [4] IgA1的单体结构如上图A，IgA2的单体结构如上图B。粉红色部分是重链，浅蓝色部分是轻链，C图显示IgA1的二聚体形式；D图显示IgA1的分泌型结构，增加了分泌成分。红色柱状结构表示N端寡糖，绿色柱状结构表示O端寡糖，寡糖对于维持抗体结构有重要作用，这里不再赘述。其他的免疫球蛋白就没有这么多兄弟姐妹啦，像IgD、IgE、IgM只有一种亚型，他们的结构如图3。图3. IgD、IgE、IgM的结构 [5] 免疫球蛋白D(IgD) 免疫球蛋白D一般在未成熟的B淋巴细胞膜上与IgM共表达。IgD与IgA相似，是分泌型的免疫球蛋白。其功能为激活B细胞，在过敏反应中也可能具有重要作用。免疫球蛋白E(IgE) 免疫球蛋白E(IgE)仅在哺乳动物中存在，IgE由两条重链和两条轻链组成，IgE的主要功能是免疫寄生虫，如旋毛虫、肝吸虫等，另外IgE在超敏反应过程中也有重要作用。 IgE一般是含量最少的免疫球蛋白种类。免疫球蛋白M(IgM) 免疫球蛋白M（IgM）是脊椎动物产生的最大的抗体，也是第一个出现在抗原初始暴露反应中的抗体。IgM在补体参与的途径中扮演着重要作用。好啦，今天的介绍就到此为止啦，对抗体药物感兴趣的小伙伴别忘了锁定古朵生物奥，对于更多拓展知识请关注咱们官网~ 查看更多

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如何正确的选择Flag标签抗体? 在免疫沉淀IP&免疫荧光IF如何正确的选择Flag标签抗体? Flag标签系统是已被公认的用于表达、纯化以及检测融合蛋白的表达系统，广泛应用于Western blotting、免疫细胞组化、免疫共沉淀、流式细胞术、蛋白纯化以及蛋白相互作用、蛋白分离等多个研究领域。Flag标签是一个与重组蛋白相融合的由8个亲水氨基酸(Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)组成的多肽片断。FLAG标签只有8个氨基酸组成，因此它不会占据其他表位与结合域，避免导致融合蛋白的功能、分泌性以及转运发生改变。由于它的亲水性特点，FLAG标签倾向于定位在融合蛋白表面，因此更易与抗体结合以及被肠激酶酶解。由于Flag标签可位于蛋白质的C端或N端，这一系统已用于各种细胞类型，包括细菌、酵母和哺乳细胞。由于Flag标签系统的纯化条件是非变性的，因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody可以用于检测和Flag标签融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测Flag融合表达蛋白等。比如在免疫荧光IF的实验里，同时配合EarthOx的Dylight 549荧光二抗，使用该抗体可以准确的定位出Flag融合表达蛋白在细胞内的位置。另外，做融合表达分析前，通过免疫共沉淀技术获得Flag融合表达蛋白也是非常重要的一步，因此选择一个合适的、可用于免疫共沉淀(Immunoprecipitation，IP)Flag标签抗体也是很必要的。EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody不仅能应用于细胞内定位的IF实验，同样还能应用于IP实验。1:200甚至更高的IP实验稀释比率，也说明了该抗体本身的具有很高的效价，同时，因为是单克隆抗体，因此特异性也很高。高效价所对应的高稀释比率也意味着超高性价比。除了上面所说的IP和IF实验，Flag标签抗体的基本应用还包括WB实验，EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody在该应用中同样表现优异。说明书的推荐起始稀释比例是1:1000，但在实验中，在1:10000的稀释比率下也表现优异(EarthOx也进行了50000次以后的稀释，仍然显示出很好的条带显示，没有在说明书里列出)。因此EarthOx的Flag标签抗体不但能通过WB实验很好的满足融合蛋白表达量的分析，并且在免疫荧光IF、免疫沉淀IP的试验中也有很好的表现，能满足Flag标签融合蛋白的细胞内定位以及纯化的需要，而且其高效价和特异性，远远比其他Flag抗体具有更高的性价比。查看更多

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微生物组如何控制免疫系统? 一组研究人员发现了微生物组如何帮助实现免疫系统能够对病原体做出反应的重要机制。研究指出，如果缺少这种调控，那么相关的介质就不会释放，无法激活某些免疫细胞的代谢过程。这一发现公布在Cell杂志上。人体上皮组织位于环境界面中，代表了病原体的潜在通道。这些组织也自然地会被细菌，病毒，真菌和寄生虫的复杂群落定殖，这被称为微生物组。在进化过程中，与这些微生物的永久性相互作用可能会导致形成强有力的信号通路，有助于保护人体。由柏林大学附属夏里特医院免疫学研究所所长Andreas Diefenbach博士领导的一组研究人员一直在分析微生物组在机体对有害病原体的免疫应答中的作用及其对信号通路的影响。感染会触发人体的免疫反应。经典树突状细胞（cDC）在此过程中起关键作用，它们构成人体先天免疫系统的一部分，携带一系列模式识别受体，能够快速检测出入侵的病原体。细胞的初始反应涉及细胞因子的释放，信号蛋白将免疫细胞吸引到感染部位。同时，这些细胞还利用吞噬作用吞噬和消化入侵的病原体，然后它们在细胞表面呈递单个颗粒作为抗原。反过来，这导致T细胞的活化（形成适应性免疫系统的一部分）并导致靶向免疫反应。如果呈递内源性抗原的cDCs触发T细胞活化时，这会导致错误的不良免疫反应，并导致自身免疫性疾病。在最新研究中，研究小组发现，在无菌条件下（即在无菌小鼠中），cDCs不能触发免疫反应。研究人员得出结论，当细胞处于“基础状态”（以没有感染为特征）时，cDC必须接收信息，并且该信息必须来自微生物组。这些微生物组来源的信号可引发cDC，应对未来的病原体。 Diefenbach教授说：“我们想了解微生物组对cDC功能的持续影响。” “在这项研究中，我们证明了，在其基础状态下，这些专业免疫细胞受到I型干扰素（IFN-I）的微生物组控制的不间断信号传递。”干扰素是细胞因子，即已知在抗病毒活性中起作用的特殊信号分子。 “到目前为止，我们对IFN-I在基础状态中的作用了解甚少。在基础状态中未接受IFN-I信号传导的cDC不能履行其作为人体一部分的生理功能——与病原体作斗争。”研究结果表明，微生物组控制着我们免疫系统的适应性。它通过使免疫系统处于“就绪”状态来施加这种控制，从而加快其对病原体的反应。研究人员的这一发现有助于开发新的治疗方法。许多自身免疫性疾病，例如系统性红斑狼疮，是由IFN-I产生增加引起的。其他研究表明，微生物组会影响检查点抑制剂在癌症免疫治疗中的有效性。Diefenbach教授说：“这些现象引起了我们的极大兴趣。例如，是否有可能改变微生物组的组成，减少IFN-1的利用率，从而对自身免疫性疾病产生积极影响？或者有可能通过发挥作用来改善对癌症免疫疗法的反应，对潜在的IFN-I产生积极影响？” 研究人员小组现在计划进行进一步的研究，探讨这些问题。查看更多

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什么是Q-PCR和RT PCR? Q-PCR就是定量的PCR,这其中包含real-time PCR real-time PCR指的是用可以实时检测信号的机器来做PCR,最常用的是roche的light cycler和applied biosystems的机器,一般就是在PCR反应中加dye或者probe,每一个cycle都读一下荧光强度 Q-PCR还可以用其他的方法做,大部分其实都算作semi-quantitative,比如用普通的PCR机器做,保证在PCR的反应的线性区域的时候停止反应,这个时候得到的DNA的量应该是比较能够定量的（也经常有人添加含反射性元素P32的dCTP到反应中,敏感度比一般的PCR高）至于RT PCR,就是指reverse transcription的PCR,就是从RNA得到cDNA以后进行的PCR,跟real time没有什么直接关系至于absolute,其实就是在做Q-PCR的时候做一个已知浓度的DNA/RNA/cDNA的standard curve,然后根据未知浓度的样品PCR的结果在这个strandard curve的位置来估计未知样品的浓度。查看更多

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核酸电泳染料有哪些? 电泳核酸需经染色才能显色带型用核酸染色剂： 1、溴化乙锭（ethidium bromide, EB）用核酸荧光染料嵌入核酸双链配碱基间紫外线激发发桔红色荧光 EB-DNA复合物EB发荧光比游离凝胶EB发荧光强度10倍需洗净背景即清楚观察核酸带型若EB背景太深凝胶浸泡于1mmol/LMgSO41h或10mmol/L MgCl25min使非结合EB褪色检查10ngDNA品EB用于检测单链DNA或RNA其单链核酸亲力相较荧光产率相较低凝胶或电泳缓冲液加入终浓度0.5μg/mlEB染色电泳程进行能随观察核酸迁移情况EB带电荷嵌入碱基增加核酸刚性使迁移率减慢故宜用于测定核酸量应电泳凝胶浸入0.5μg/mlEB水溶液10min进行染色EB见光易解应于4℃避光保存 2、吖啶橙（acridine orange, AO）：吖啶橙嵌入双链核酸碱基间254nm紫外线激发发530nm绿色荧光；通静电与单链核酸磷酸基结合254nm紫外线激发产640nm红色荧光区单链双链核酸灵敏度别0.1μg0.05μg吖啶橙染色操作要求严格应 22℃0.01mol/L磷酸钠缓冲液（pH7.0）避光浸泡30min搪瓷盘用该缓冲剂4℃脱色夜或22℃脱色1~2 3、银（Ag+）试剂： Ag+与核酸形稳定复合物用甲醛使Ag+原银颗粒AgNO3等试剂使聚丙烯酰胺凝胶单链双链DNA及 RNA都染黑褐色银染灵敏度比EB染色高200倍左右比亚甲蓝染色高100~1000倍于0.5mm厚凝胶能检测0.5ng RNA其缺点专性强能与蛋白质污剂反应产褐色且DNA染色定量准确银与DNA稳定结合DNA破坏作用适于DNA 片段收制备 4、亚甲蓝（methylene blue） RNA染蓝色灵敏度高且操作间染色程：胶浸泡于0.02%亚甲蓝10mmol/L Tris-Ac（pH8.3）4℃放置1~2h用净水洗5~8h（反复换水）带型肉眼见低检测量 250ng 查看更多

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缓冲液的pH值由哪些因素决定? 设缓冲系统的弱酸的电离常数为K（平衡常数），平衡时弱酸的浓度为[酸]，弱酸盐的浓度为[盐]，则由弱酸的电离平衡式可得下式：　　根据此式可得出下列几点结论：　　（1）缓冲液的pH值与该酸的电离平衡常数K及盐和酸的浓度有关。弱酸一定，但酸和盐的比例不同时，可以得到不同的pH值。当酸和盐浓度相等时，溶液的pH值与PK值相同。　　（2）酸和盐浓度等比例也增减时，溶液的pH值不便。　　（3）酸和盐浓度相等时，缓冲液的缓冲效率为最高，比例相差越大，缓冲效率越低，一般地说缓冲液有效缓冲范围为PK±1pH。　　从上述可知，只要知道缓冲对的PK值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度）时，可按公式计算出[盐]和[酸]的量。这样算涉及到对数的换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，经计算已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系列出了表格。讲义附录部分节录有磷酸缓冲液的配制表。只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算处所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。　　经查表知pH5.8浓度为0.2M Na2HPO48.0毫升，而0.2M Na2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M Na2HPO48.0毫升，而0.1M Na2HPO4需要92.0毫升。　　所以500ml 0.1M磷酸缓冲液需要Na2HPO4量为: 　　需Na2HPO4量为 : 　　计算好后，按计算结果称好药品，放于烧杯中，加少量蒸馏水溶解，转移入50ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀，便得所需的缓冲液。　　各种缓冲溶液的配制，均按下表按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确的浓度才能进行，如醋酸、NaOH等。　　（2）磷酸盐缓冲液的配制　　1/15M的Na2HPO4溶液（11.876克纯的Na2HPO4·2H2O溶于1升蒸馏水中）及1/15M的KH2PO4溶液（将9.078克KH2PO4溶于1升水中）将着两种溶液依不同比例混合。　　(3)Tris缓冲溶液　　贮备液　　溶液A：0.2M Tris（三羟甲基氨基甲烷）　　溶液B：0.2M HCl 　　50mlA＋XmlB，用蒸馏水稀释到200ml 　　（4）磷酸盐－柠檬酸缓冲液的配制　　0.2M Na2HPO4·2H2O溶液及0.1M柠檬酸溶液，并依不同比例混合　　(5)盐缓冲液的配制　　a、M/20硼砂（10.108克Na2B4O7·10H2O溶在一升水中）　　b、M/5硼酸＋M/20NaCl（12.45克H2BO＋2.925克）NaCl在一升水中　　(五)药品规格及其应用范围　　根据药品纯度不同一般可分为下列几类：　　（1）保证试剂（G、R）用在科学研究及微量分析方面　　（2）分析试剂（A、R）定量分析时标定溶液用　　（3）化学纯试剂（C、P）定性试验时用　　（4）实验试剂（L、R）用于和实验结果关系不大的场合　　（5）工业品用于大型或工业生产上　　在实验中用的最多的是C、P一类，A、R使用较少，G、R非有特殊需要时，一般尽量用A、R来代替，因为纯度高，价格很贵。　　除上述几种规格外尚有几种不以纯度分类的规格：　　（1）生物试剂（B、R）生物体中提炼出来，成分含量相差较大，如培养微生物时用牛肉膏，酵母膏等药品即属此类。　　（2）指示剂（Ind）配制指示剂用　　（3）层析纯，色层分析时采用　　（4）生物染色剂BS如甲基兰　　（6）常用标准溶液的配制与标定　　(1)0.1mol/L NaOH溶液查看更多

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我的细胞为啥不贴壁了？怎么办? 我们可能都有过这样的经历：辛苦呵护的细胞，怎么也不愿意贴壁；贴壁了又很容易成块或者成团掉下来；原本贴壁的细胞，复苏后细胞不贴壁了；遇到这样的问题你都如何解决？这次我们就来聊聊细胞贴壁和什么有关？为啥你的细胞为这么矫情，不愿贴壁呢？如何促进细胞贴壁？体外培养细胞贴壁与什么有关？首先并不是所有的细胞在体外培养的情况下都会贴壁，但大部分来自实体组织器官的细胞都会贴壁。贴壁的过程可能是这样的：细胞首先分泌细胞外基质，这种细胞外基质黏附在支持物的表面（培养瓶，培养皿的底面）。然后，细胞通过其表面表达的黏附因子与这些细胞外基质结合。所以细胞贴壁与否和细胞本身分泌细胞外基质的能力以及细胞本身表达的黏附分子的数量有关，也与培养皿壁的表面结构有关。细胞为什么要贴壁？细胞贴壁的过程使形态发生很大变化，细胞形态改变是细胞内骨架（是真核细胞中的蛋白纤维网架体系，由微管、微丝及中间纤维组成的体系）本身和细胞外基质共同作用的结果。密度大于培养基的细胞（绝大部分细胞）会沉降在底面上，那么细胞要生存必定得改善这个环境，分泌细胞外基质，改善底面的结构，然后很自然就贴附在底面上了。密度小于水的细胞，如脂肪细胞，漂浮在液面上，所以不可能贴在底面上，但是如果将培养液加满，那么细胞能够与培养瓶上面的壁接触同样可以贴壁。因此可以说，细胞贴壁是适应环境的一种反应。细胞不贴壁，可能是这些原因？细胞的传代最重要的是胰酶处理时间：消化不够细胞本身就是成团的；若胰酶处理太久，容易造成细胞膜蛋白损伤，使细胞贴壁不紧，显微镜下观察立体感不强，严重的时候甚至会造成细胞死亡。缺少贴壁因子：血清中含有促贴壁因子，而无血清培养基工艺中由于缺少这种促贴壁因子，细胞的贴壁效果会下降很多。支原体或细菌的污染。培养液配置、储存不当，如pH值过碱，Gln量太少等原因。复苏的细胞本身状态不好，已经老化，失去贴附性。接种细胞数目太少，无法分泌足够的细胞外基质。复苏时处理速度太慢，复苏过程不当。如何促进贴壁效果？适度消化细胞：HepG-2、A549、Hela、SGC-7901几种癌细胞处理时间可适当放长，一般处理5-6min，C2C12、COS-7、NIH-3T3比较容易脱落，2min足矣，P19Cl6和293细胞贴壁不紧，可在PBS漂洗后，直接换新鲜培养基打散。最好用塑料瓶培养，如果是玻璃瓶,那么可以用鼠尾胶原包被一下培养瓶，或者用盐酸对培养瓶进行蚀刻，或者涂Laminin/fibronectin/collagen/BSA，也可以帮助细胞贴附新的培养瓶，细胞不易贴壁，建议加多聚赖氨酸处理。正确配制消化液或培养液。使用合适的细胞外基质或贴壁试剂。复苏新的细胞，第一周用20%血清帮助细胞复原。传代接种一定要铺的均匀，避免细胞抱团生长。细胞传代24小时之内，最好不要晃动，以免影响贴壁。体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜上，因此培养在有胶原的底物上有利于生长。人或小鼠表皮细胞培养，可以用γ射线照射后的3T3细胞为饲养层，另外降低pH、Ca2+含量和温度，均有利于上皮细胞生长。查看更多

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抗体制备所需的基本要求? 启动抗体制备前，我们需要搞清楚一下7个问题： 1.这个抗体用来做什么实验(ELISA、IHC、Western Blot、IF或者IP等)?（功能性要求） 2.是否已有商品化的抗体可以满足以上功能需求?（便利性要求） 3.抗体需要什么种属来源（兔子、山羊、大鼠或小鼠等）?（抗体属性要求） 4.需要多抗还是单抗?（品质性要求）； 5.已具备的抗原信息或材料（抗原信息或材料：CDS序列，重组质粒，重组蛋白、多肽等）?（可能性要求）； 6.是否可建立抗体质检方法（标准的阳性标本及实施抗体实验验证的标准方法）?（可评价要求） 7.是否具备抗体生产平台及经验?（可行性要求）。第一个要求——功能性要求：科研人员根据实验需求提出对抗体的功能性要求;对一个抗体功能要求越多，其制备难度也就越大。第二个要求——便利性要求：科研工作者对抗体提出需求,首先应考虑商品化抗体:优质商品化抗体一般都经过多层验证和优化,可以直接购买使用,节约时间。一个抗体很难同时满足几项功能要求，这个时候可以考虑分别选购针对不同功能的抗体；除此之外，还需仔细查看抗体数据信息和实验图片，其实验所采用的标本和方法与自己准备实验的标本越相似越好。第三个要求——抗体种属要求：制备多抗选用最多的是兔子，单抗选用最多的是小鼠，对于抗体需求量较大，比如二抗，一般选择山羊。对于其他种属要求，除实验设计需求，更多是因为抗原与免疫宿主亲缘关系问题，一般来说亲缘关系越远，免疫原性越好。第四个要求——品质性要求：大部人认为单抗比多抗好,其实也不尽然。单抗的特异性好，对于需要区分鉴定同源性较高的抗原或者对于特异性要求较高时，一般选择单抗；另外，单抗性质比较稳定，理化性质均一（所有的抗体都是由相同细胞分泌出来）。多抗的优点是效价和灵敏度高，其针对一个抗原的多表位；与单抗相比，待检标本中同样的蛋白表达丰度，多抗会有更多抗体分子与抗原结合，信号更强，当然也可能引起非特异性问题。第五个要求——可能性要求：大部人认为单抗比多抗好,其实也不尽然。单抗的特异性好，对于需要区分鉴定同源性较高的抗原或者对于特异性要求较高时，一般选择单抗；另外，单抗性质比较稳定，理化性质均一（所有的抗体都是由相同细胞分泌出来）。多抗的优点是效价和灵敏度高，其针对一个抗原的多表位；与单抗相比，待检标本中同样的蛋白表达丰度，多抗会有更多抗体分子与抗原结合，信号更强，当然也可能引起非特异性问题。第六个要求——可评价性要求：筛选方案和纯化方法对抗体制备至关重要，质检方法决定一个抗体的命运，你用什么筛选方法你就得到什么样的抗体，所以在抗体制备之前必须要保证建立一个科学稳定符合质检要求的抗体制备方法。最后一个要求——可行性要求：制备抗体前必须要拥有制备流程所必须的平台设备以及专业人员，如果实验室以前没有涉及这块并且以后也不打算建设此类平台，本着“专业人做专业事zui节约成本”的原则，抗体制备的整个流程或者部分环节还是委托给专业公司。 Tips：专业抗体公司基本特点 1）有专业技术人员，可以回答您的实验问题，所回答的问题实用，能解决问题。2）有专业平台，制备抗体上下游有比较完善的平台，这个可以咨询他们的业务范围。 3）商业口碑：身边实验室有没有在此公司合作成功的案例。查看更多

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怎么处理和收集血清、血浆、尿液、唾液、细胞? 血清、血浆、尿液、唾液和细胞的收集和处理方法： 1.血清：用无菌管收集，室温血液天然凝聚10-20分钟，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如出现堆积，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求挑选EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有堆积构成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有堆积构成，应再次离心。 4.唾液：用无菌管收集，2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有堆积构成，应再次离心。 1.培育的细胞 A、动物细胞：用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度到达100万/ml左右。经过重复冻融（假如重复冻融，破碎效果欠好，就选用超声波破碎），以使细胞损坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有堆积构成，应再次离心。 B、植物细胞：用PH7.2-7.4的PBS稀释细胞悬液，使细胞浓度到达100万/ml左右，置于冰盒上，用超声破碎仪，设置破碎2s，冷却30s的方法，充分破碎细胞，以使细胞损坏并放出细胞内成份。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，保存过程中如有堆积构成，应再次离心。 2.组织的细胞切割标本后，称取1g组织，参加9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手艺或匀浆器将标本匀浆充分。2-8℃条件离心20分钟左右（2000-3000转/分），去除上清，再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗刷堆积的细胞三遍。再用上述的细胞破碎方法破碎细胞。古朵生物是一家研究经销生化试剂的金牌代理商，我司拥有一支雄厚的技术团队，为客户提供完善的售前售后服务，及真实的实验技术zhi持。您有任何问题均可电询订购我司试剂盒,生物试剂等产品。查看更多

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关于微生物的纯培养，你了解多少? 纯培养系指只在单一种类存在的状态下所进行的生物培养。纯培养最重要的是在于微生物的生理研究，方法是依靠灭菌和分离，是由巴斯德（L．Pasteur）和柯赫（R．Koch）建立起来的。在自然界中，有的培养条件很困难，特别是具有密切共生关系的生物及进行寄生性营养的生物；也有一些在理论上不可能进行纯粹培养的生物。纯培养(pure culture)——微生物学中把从一个细胞或一群相同的细胞经过培养繁殖而得到的后代,称纯培养。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养（Pure culture）。在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化。真菌纯培养——通常是指获得一个单个真菌的孢子，让孢子发芽产生菌丝体。细菌纯培养——即从混杂菌种中分离出单个细胞，然后使其二分裂。病毒纯培养必须在受精卵中，因为病毒必须在活的组织中增殖。查看更多

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不同的培养基，不同的灭菌方法? 培养基的类型可以按照成分、物理状态分、用途、微生物种类这四个方面来规划分类。培养基的灭菌是一个常见步骤，并且，不同的培养基需根据其性能采用不同的灭菌方法，在这里，上海古朵生物公司为您一一指出： 1. 常见方法：通常采用高压湿热灭菌法121 ℃灭菌15分钟，特殊培养基按使用者的特殊要求进行灭菌（如含糖培养基115 ℃灭菌20分钟）。 2. 部分培养基，只能煮沸灭菌。 3. 对热敏感的培养基或添加物质，应采用膜过滤方法进行过滤除菌。 4. 即用型试剂不需灭菌，应参见相关国际标准或供应商使用说明，直接使用。 ● 器具和设备消毒处理方法： 1. 湿热灭菌：采用高压灭菌器， 121 ℃灭菌20分钟，适用于玻璃器皿、移液器吸头、塑料瓶等。按照GB 15981 的规定，评价高压灭菌器的杀菌效果。 2. 干热灭菌：采用干燥箱灭菌，160 ℃灭菌2h，180 ℃灭菌2h，适用于玻璃器皿，不锈钢器具等。 ● 灭菌方法： 1. 金属器具先用酒精擦拭，之后干热灭菌，使用时需烧灼； 2. 塑料可用高温灭菌；有机溶剂需用过滤灭菌； 3. 双手及操作台面可用酒精擦拭，台面及操作室还需紫外灭菌； 4. 培养基需用湿热高温灭菌，至于对待不同的培养基灭菌条件都有所不同，如植物组培使用的培养基与微生物中使用的就不同。查看更多

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生物医药

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HPV疫苗是什么？HPV疫苗二价四价九价有什么区别? HPV是一种常见的生殖道感染病毒，能够通过性接触以及粘膜和体液接触进行传播，其亚型众多，能引起女性的宫颈癌、阴道癌、外阴癌、以及男性的生殖器癌等多种癌症，其中女性宫颈癌90%以上是有HPV感染所引起，可谓说是“女性杀手”。近年来，HPV疫苗越来越频繁地进入人们的生活，那么，HPV疫苗是什么？HPV疫苗二价、四价、九价有什么区别？HPV疫苗多少钱一针？接种HPV疫苗有什么禁忌症？ HPV疫苗是什么？HPV疫苗二价四价九价有什么区别? HPV疫苗是什么？ HPV疫苗其实就是人乳头瘤病毒疫苗，浅显易懂的说就是宫颈癌疫苗，我们可以通过接种HPV疫苗预防90%以上的宫颈癌。大家要知道，宫颈癌在女性恶性肿瘤中的发病率是比较高的，仅次于乳腺癌。大多数的宫颈癌是由于HPV感染而来的，而HPV是比较常见的性传播疾病，大约会有五分之四的人在开始性生活后都会感染上至少一种的HPV。 HPV疫苗二价、四价、九价有什么区别？目前市面上的HPV疫苗有二价、四价以及九价三种类型，三种疫苗对HPV都有预防作用且对人体安全。其中二价HPV疫苗能够预防又HPV16、18型引起的相关疾病，四价HPV疫苗能够预防HPV6、11、16、18四种病毒亚型引起的宫颈癌，九价HPV能预防的亚型在四价基础上又多处出五种。因此三种疫苗中，九价的预防范围更广。对于HPV疫苗的接种来说，最终目的是为了预防宫颈癌，而国内的二价疫苗和四价疫苗能够预防84.5%的宫颈癌，最为抢手的九价疫苗则可以预防92.1%的宫颈癌。虽然说总的来说九价疫苗的预防宫颈癌的效果比较的好，但是大多数的宫颈癌发生是和16、18型病毒有关，而四价疫苗里也是可以预防16、18型人乳头瘤病毒的，所以出现超过年龄情况的时候，也是可以考虑接种四价疫苗的。除了这些以外，大家在考虑接种HPV疫苗时还需要注意的是，最好在第一次性生活之前就接种。如果是已感染人乳头瘤病毒的人群，则应该在医生的建议下接种，而如果是对疫苗、酵母过敏的人群，则应该禁止接种，以防出现各种不良后果，千万不要盲目接种。 HPV疫苗并不是所有人都可以进行接种，它有一定的限制。首先从性别上看，除了二价疫苗只适合女性接种外，四价以及九价的HPV疫苗是男性女性均可接种有效；从年龄上，按照国家食品药品监督管理局的推荐，二价HPV疫苗的适合接种年龄在9-25岁，四价HPV疫苗为20-45岁，九价HPV疫苗则是16-26岁，原则上是越早接种，预防效果越好。 HPV疫苗多少钱一针？ HPV疫苗因为安全性以及昂贵的价格问题，在2017年之前迟迟未在中国上市，可见HPV疫苗的价格对于普通民众来说可能有些难以承担。而目前继二价、四价HPV疫苗之后，九价HPV疫苗也已经在我国批准上市。现在在国内二价HPV疫苗每支600元左右，四价HPV疫苗800元左右;香港的九价HPV疫苗1200港币左右，国内的九价HPV疫苗的价格可能会参考香港的价格，也就是说每支约为1000元人民币左右，比四价疫苗高出200元左右。据说九价HPV疫苗对宫颈癌的预防可达到92.1%，应该说是目前为止预防效果最好的HPV疫苗。而相对而言那些从来不做宫颈切片检查的，或者来自卫生条件较差地区的人才真正需要接种这些疫苗。因此，有人认为即使该疫苗上市，可能也不能对我国的宫颈癌发病起到非常有效的控制作用。值得一提的是2018年4月10日起，深圳将HPV疫苗纳入医保支付。深圳医保个人账户支付范围新增8种新疫苗，其中包括4价人乳头瘤病毒疫苗和2价人乳头瘤病毒疫苗，也就是俗称的宫颈癌二价和四价疫苗。接种HPV疫苗有什么禁忌症和注意事项？第一，有免疫系统疾病的人。疫苗的接种会引起人体免疫反应，若本身免疫系统存在问题的人，接种后可能会加重免疫系统疾病，因此不建议接种。第二，怀孕妇女及哺乳期妇女。目前的研究资料尚不可证明HPV疫苗对怀孕妇女及胎儿是安全的，因此出于安全考虑，建议怀孕期间以及哺乳期的妇女避免接种HPV疫苗。第三，正患有急性疾病者。急性疾病患者常伴有发烧等全身症状，接种疫苗可能会加重症状。第四，过敏体质者。疫苗中的活性成分以及辅料成分可能会引起过敏者的过敏反应，接种前应该提前了解自己是否会对疫苗产生过敏再决定能否接种。已知对酵母过敏的人不宜接种。第五，长期服用药物者。目前关于药物与HPV疫苗之间是否会产生毒副作用的研究尚缺，从安全角度上看长期服用药物者不建议接种HPV疫苗。第六，注意接种疫苗适龄年纪 hpv疫苗要趁早打。由于这种疫苗只能预防，不能起到治疗的作用。所以只有在感染风险到来之前接种这种疫苗，才能获得最大的保护。世界卫生组织认为hpv疫苗能保护9到26岁的人群，所以最适宜接种年龄为11到12岁。国内的HPV感染人群按年龄呈现“双峰”分布，第1个高峰在“17-24岁”，第2个高峰在“40-44岁”。所以最好选择在合适的年纪去接种预防效果更佳！第七，在未感染hpv病毒前均可接种年龄的限制并不是绝对的，关键是看性生活的健康程度，HPV疫苗对于无性生活史的女性效果最佳，如果到35岁仍没有性生活也没有感染hpv病毒，这个时候接种也完全是划算的。而如果有人打算一辈子都不过性生活，那么注射疫苗的必要性也就非常小了。第八、注意品牌市面上普遍使用HPV疫苗品牌有两种，一种是由葛兰素史克研发的卉妍康，另一种是由默沙东研发的加卫苗。其中，卉妍康可以预防HPV16和HPV18的感染，适用于9岁以上女性;加卫苗则可以预防HPV6、11、16和18的感染，9岁以上男女均可注射。越早接种，产生的抗体效果越好。在中国的临床试验中，发现接种HPV疫苗后较常见的不良反应包括有发热、头痛、肌肉痛、疲劳、超敏反应、咳嗽以及恶心、呕吐、腹泻等胃肠道症状，体质较为敏感人群偶见皮疹、荨麻疹等皮肤表现。第九进行hpv筛选接种疫苗前，可以有选择性的进行HPV筛查，即使是接种疫苗后，仍定期检查，有效预防宫颈癌的发生。查看更多

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细胞及分子

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如何检测是否有基因或染色体突变? 1 如果是染色体畸变，你可以用正常细胞的染色体与药物处理过的细胞的染色体对照进行检查，大致确定好事那个染色体后用FISH技术来检测染色体 2 如果是基因发生了点突变，首先要明确是那个基因会有发生突变的趋势，采用SSCP（单链构象多态性）确定是否发生有突变，然后用测序法验证 3 如果已知该药物所导致的突变，就可以采用测序，单碱基延伸法等方法进行检测查看更多

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纯水在实验室中有多重要? 实验室纯水可分为4个常规等级：纯水、去离子水、实验室Ⅱ级纯水和超纯水。纯水：纯化水平最低，通常电导率在1-50μs/cm之间。它可经由单一弱碱性阴离子交换树脂、反渗透或单次蒸馏制成。典型的应用包括玻璃器皿的清洗、高压灭菌器、恒温恒湿实验箱和清洗机用水。去离子水：电导率通常在1.0-0.1μs/cm之间。通过采用含强阴离子交换树脂的混床离子交换制成，但它有相对较高的有机物和细菌污染水平，能满足多种需求，如清洗、制备分析标准样、制备试剂和稀释样品等。实验室Ⅱ级纯水：电导率超纯水：这种级别的纯水在电阻率、有机物含量、颗粒和细菌含量方面接近理论上的纯度极限，通过离子交换、RO膜或蒸馏手段预纯化，再经过核子级离子交换精纯化得到超纯水。通常超纯水的电阻率可达18.2MΩ-cm，TOC 目前世界上比较通用的纯水标准主要有以下几个：国际标准化组织(ISO)，美国临床病理学会(CAP)试药级用水标准，美国测试和材料实验社团组织(ASTM)，临床试验标准国际委员会(NCCLS)，美国药学会(USP)等。同时，我国也有相应的纯水标准：中国国家电子级超纯水规格GB/T 11446-1997和中国国家实验室用水规格GB/T 6682-2008等。因此市面上绝大多数的纯水系统，无论是进口的还是国产的，都是依据这些标准来设计流程的。查看更多

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细胞有了支原体怎么办? 全球平均有约15~35%细胞实验室发生支原体污染（65~80%严重污染），超过一半实验室有两种支原体污染；而全球各地的细胞库中，也有发现5~35%不等的支原体感染率，日本甚至高达60%。但！全球目前有在做常规支原体监控的细胞实验室却不到50%！支原体为细菌的一类，最早在1898年由法国 E. Nocard 及 E.R.Roux 从肺疫牛隻中分离出来，1956年才正式命名为支原体 (Mycoplasma)；支原体大小介于细菌与病毒之间 (直径介于0.15-0.3?m)，为目前发现最小最简单的原核微生物，唯一可见的胞器是核糖体，没有细胞壁，只有三层结构的细胞膜，所以呈高度多形性，有球形、杆形、丝状，分枝状等多种态。大多支原体基因组只有0.58－1.38百万碱基，这使得它的生物合成能力薄弱，必须利用本身细胞膜表面高密度的黏附素附着于宿主细胞表面，并交换宿主的细胞质及细胞膜成分，来获取增殖需要的物质。但由于支原体生长条件复杂，使得菌体培养困难重重，导致过去支原体一直不受关注；近几年，拜分子生物学与基因组学的进步所赐，基因构造简单的支原体已引起了较为广大注意。至今，共有超过180种支原体被发现，有超过20种能感染体外培养的细胞，而目前实验室最常见(95% 以上)的支原体则来自其中6种：源自于实验人员鼻腔、口腔，并经由飞沫传至培养细胞中的口腔支原体（M.orale）、猪鼻支原体（M.fermentans）及人型支原体（M.hominis），居于首位（占总体的50%以上）。其次则为大多来自牛血清的精氨酸支原体（M. Arginini）、莱氏无胆甾支原体（A. Laidlawii）、及来自猪源胰酶的猪鼻支原体（M. Hyorhinis）。 PS：BI胰酶经过辐照，不含活的支原体。既然支原体是细菌的一种，抗生素一加不就好了吗? 为什么可以搞到全球这么多细胞库污染? 支原体体积非常小, 极易通过0.22um滤膜, 且一般光学显微镜无法观察到。支原体能附着并存活在器物表面(操作台, 培养箱,显微镜等), 提高操作污染概率。支原体生长缓慢，通常不破坏宿主细胞但默默改变了细胞生长代谢，且对传统抗生素具抗性，因为抗生素大多破坏细菌细胞壁, 而支原体恰恰没有细胞壁。支原体污染初期, 培养基不变色, 细胞形态正常，但等大量污染时, 为时已晚, 耗时又耗力。你说，支原体烦不烦！目前检测方法可大致分成四种： ■微生物培养法将样品培养在特殊琼脂培养基上，在37?C有氧环境中孵育2周，阳性培养基上会长出100~400um大小的“煎蛋状”菌落。 ■DNA萤光染色法支原体DNA中A-T含量占多数（55～80%），容易被Hoechst 33258此荧光剂染上，被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之萤光小点。 ■ELISA法将支原体16S核糖体RNA标上标签，然后用特定抗体预包被过的微孔板对标签进行捕获，再加入显色用的抗体及底物，最后通过比色法得出检测结果。 ■PCR法原理为扩增支原体16S核糖体RNA的基因，能检测多达19种支原体，操作快速、准确性高，市面上有多款相关产品可参考消灭支原体依不同处理发法，分成四大类： ■物理法：高温高压灭菌 ■免疫法：使用支原体特异性抗血清、裸鼠传代法 ■化学法：界面活性剂处理（BI：Pharmacidal 支原体喷壶） ■生化法：使用抗生素等药物（BI：BIOMYC 支原体处理试剂）目前，大环内酯（Macrolides）、四环素（Tetracyclines）和喹诺酮（Quinolones）这三类抗生素，是公认对抗支原体效果最佳的药物，而市面上有许多针对不同菌株配置的抗生素产品可以参考。查看更多

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如何挑选适合细胞生长的血清? 血清是一种纯天然培养基，含有细胞生长繁殖所需的多种营养成分，如蛋白质、多肽等，多用于细胞培养、生物制品及诊断试剂的生产。血清的主要成分是蛋白质，如：白蛋白，球蛋白，纤维粘连素（促进细胞附着）、α2巨球蛋白（抑制胰蛋白酶的作用），激素，胰岛素（可促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，促细胞分裂），类胰岛素生长因子（能与细胞表达的胰岛素受体结合，从而产生与胰岛素相同的作用），促生长激素（细胞增殖），胎球蛋白（促细胞附着），转铁蛋白（能结合铁离子，减少其毒性）。血清的组成成分与含量常常与供血动物性别、年龄、生理条件和营养条件有关。如何挑选适合细胞生长的血清？原代或是正常细胞株建议使用BI特级胎牛血清，对生长条件要求高的细胞和干细胞可选用专用特级胎牛血清，或胚胎干细胞专用金牌胎牛血清。由于血清有批间差异，细胞种类不同，我们建议客户购买前可先申请试用样品，通过筛选得到满意的血清批号，之后根据项目需求可进行批量囤货，以保证该项目所需血清质量的一致性，可排除不同批号血清对于实验带来的影响。查看更多

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我的实验要重做竟然是因为“他”? 在细胞培养过程中，真正困扰研究人员的是繁琐的胰蛋白酶冻融流程：解冻储存的胰蛋白酶、分装成单次使用量、冻存分装试剂、亚培养时再次解冻，这意味着科学家zui需要的是在冰箱外能保持稳定、在广泛的实验室温度条件下仍具有活性的胰蛋白酶配方。对科学家而言不仅是工具：论胰蛋白酶在实验室的重要性生理学家认为，胰蛋白酶等丝氨酸蛋白酶是存在于消化液中稳定、关键的蛋白消化酶。zui早关于胰蛋白酶的描述是在19世纪末期，胰蛋白酶zui初作为胰蛋白酶原形成于胰腺，然后通过胰腺管到达十二指肠并剪切为活性形式。酶活性的封存可防止体蛋白的无选择、不合需求的剪切，避免引起炎症疾病如胰腺炎。具有贴壁表型的细胞培养物胰蛋白酶是一个有力的特异分子工具，在生命科学家的手中实现精确的蛋白剪切。关于胰蛋白酶在细胞培养中的应用报告zui早出现于50多年以前。在细胞培养中，与胰蛋白酶短期孵育可以剪切蛋白，将贴壁培养细胞从培养平面和其他细胞上解离下来，从而将细胞从培养瓶、培养皿和培养板上移除，构建单细胞悬液用于细胞计数、细胞传代和其他下游实验。特定应用的胰蛋白酶：请更稳定一些除了细胞培养,胰蛋白酶在生命科学领域还有很多其他用途。比如在蛋白质组学实验中，胰蛋白酶可将蛋白消化成多肽用于质谱分析。在此应用中，胰蛋白酶的特异性尤其有用，因为它断裂只是羧基在精氨酸或赖氨酸残基上的肽键。然而，胰蛋白酶消化蛋白的异常活性有时也会给蛋白质组学研究带来一些问题。如果不采取稳定措施，胰蛋白酶zui终会进行自我消化，这是大家zui不希望看到的，因为自我裂解可能污染和混淆实验结果。细胞培养新福利：一款适用于常规解离的热稳定配方要为细胞培养应用开发不自我剪切的热稳定性胰蛋白酶非常容易，为什么要为常规的细胞培养应用开发一款不同的稳定胰蛋白酶配方呢？在蛋白质组学研究中，避免使用可能污染质谱结果的添加剂来稳定胰蛋白酶是非常必要的，但对细胞培养来说，其面临的问题是不同的。但细胞培养过程中，真正困扰研究人员的是繁琐的胰蛋白酶冻融流程：解冻储存的胰蛋白酶、分装成单次使用量、冻存分装试剂、亚培养时再次解冻，这意味着科学家zui需要的是在冰箱外能保持稳定、在广泛的实验室温度条件下仍具有活性的胰蛋白酶配方。新配方胰蛋白酶不仅在4°C条件下稳定，而且在室温条件下也是稳定的，甚至在37°C条件下仍能保持 90%的活性。StableCell?胰蛋白酶有3个不同的浓度(1x、5x和10x)，可根据不同的细胞粘附强度进行优化。而且与其他室温解离试剂不同，这个新配方仍是猪胰腺胰蛋白酶，不需要在之前使用传统胰蛋白酶配方的培养系统中再次进行验证。让你的应用成为你的指南：为什么胰蛋白酶的配方不尽相同？许多实验室可能不管其应用是什么，都直接购买zui常用的胰蛋白酶配方：0.25%胰蛋白酶+EDTA，再加入酚红作为pH指示剂。尽管不是典型的解离大部分贴壁细胞的强大试剂，但当EDTA加入胰蛋白酶后提供了一种解离细胞的协同机制：EDTA结合移除细胞-表面以及细胞-细胞间的钙，螯合培养基中抑制胰蛋白酶活性的游离Ca2+，从而降低胰蛋白酶的使用浓度，避免高浓度胰蛋白酶或过度孵育对细胞的伤害。胰蛋白酶在pH 7-9 范围内具有zui佳活性，因此配方中通常使用酚红作为pH指示剂。然而，有些特殊应用则需要选择不含EDTA或酚红的配方。选择和使用技巧：生命科学应用的胰蛋白酶配方为实现zui佳的细胞解离效果，下述技巧可帮助选择正确的胰蛋白酶配方：对于存在较高自身消化片段和污染物峰风险的蛋白质组学研究，通过分子改进（如重组配方）方法实现稳定的胰蛋白酶是zui佳选择。在常规细胞培养应用中使用热稳定性胰蛋白酶配方可避免繁琐的冻融分装流程，避免出现丢弃不小心落在冰箱外的标准胰蛋白酶而产生的浪费。标准和热稳定性胰蛋白酶配方通常都具有不同的胰蛋白酶浓度，使用为你的细胞推荐的zui低有效浓度。查看更多

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姜黄素如何检测和提取? 姜黄素是从姜科、天南星科中的一些植物的根茎中提取的一种化学成分，其中，姜黄约含3%～6%，是植物界很稀少的具有二酮的色素，为二酮类化合物。姜黄素检测方法有哪些：常规方法显色反应A试样的乙醇溶液应呈纯黄色和有浅绿色荧光；如将此乙醇萃出液加入浓硫酸，则产生深紫红色。显色反应B用盐酸处理试样的水溶液或稀乙醇溶液，直至开始稍呈橙色。把此混合液分为两份，其中一份加少量硼酸粉末或晶体，与不加硼酸的那部分相比，其颜色显著变红。也可将数片滤纸在色素的乙醇溶液中浸渍后，于100℃下干燥，再用硼酸的稀溶液（加有几滴盐酸）湿润。干燥后应呈樱桃红色.。色谱检测法取试液5 ml（0.01 g试样溶于1mL95%乙醇）滴于薄层色谱（微晶纤维素，0.1 mm）上，放于盛有3-甲基-1-丁醇/乙醇/水/氨（4：4：2：1）混合液的展开槽中，使溶剂前沿上升10～15 cm。经一昼夜后在紫外光下观察：有三个黄色斑点，其Rf在0.2～0.4之间；其他斑点的Rf为0.6～0.8；所有斑点在紫外光下均呈黄色荧光。6.95%乙醇液在425 nm处有最大吸收峰。姜黄素提取工艺：姜黄素的提取方法多种多样，在工艺流程上各有特色，但总的来说分为提取和精制。采用酶法提取姜黄中姜黄素，与传统浸提工艺相比，收率提高了8.1%。提取工艺条件为，酶解温度50℃，pH4.5，时间120 min，酶的浓度0.35 mg/ml。 HPLC测定方法，姜黄素提取量为考察指标，采用正交试验法优化提取工艺，得出超声法提取姜黄素的最佳工艺为加入8倍量pH值为12的碱水，提取4次，每次提取40 min。查看更多

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怎样保存已获得的抗体? 抗体无论是保存还是运输都应尽可能地避免反复冻融，收到抗体后请根据实验的需要，对抗体进行分装，避免同一管抗体反复冻融（反复冻融会导致抗体空间结构变性，导致多聚体形成，从而降低抗体的结合能力）。抗体保存得当与否，直接决定了抗体的活性和使用效果，如果抗体保存得当，抗体活性大部分都可以维持数年。请谨记，无论何时请按照说明书推荐的保存条件正确处理和保存抗体。 1.收到抗体后，请务必在4℃，12000rpm，离心3分钟，（无论是液体还是冻干粉状态），再打开管盖进行分装和保存（如果抗体体积小于50ul，请延长离心时间至5分钟，以保证全部抗体均离心下来）。抗体一般使用特制的储存管，只有在12000rpm离心3分钟，才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来（即使是在10000rpm离心也会离心不完全，导致出现抗体的量不足的现象）。 2.对于ProSci大部分抗体，比较合适的保存方式是，分装后保存在-20℃或者-80℃。（1）对绝大多数抗体来说，保存在-20℃就完全足够了，没有任何证据显示保存在-80℃会更好。（2）分装可以zui大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。（3）分装的量以一次实验用完为好，zui少不能少于10ul每份。因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。（4）复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在4℃，避免再冻起来。（5）抗体工作液应该当天配制当天用完，4℃保存尽量不要超过1天。（6）避免将抗体保存在自动除霜冰箱中，将抗体保存在冰箱里层，避免温度变化造成反复冻融。 3.大部分抗体收到后4℃短暂保存1~2周对抗体活性没有影响。 4.大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要1~2周的时间，所以是在低温4℃的条件下来完成的。 4℃运输zui主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害（如果使用干冰运输，那么收到时抗体是冻起来的，为了分装就需要解冻，这就多了一次冻融的过程），所以运输过程中避免干冰运输。查看更多

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简介

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个人简介：上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量”的方针。查看更多

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主营业务：质粒载体定制，ELISA检测试剂盒，细胞培养，抗体抗原，蛋白纯化，染色液溶液，标准品对照品,微生物培...

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