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ELISA试剂盒实践过程中的一些技巧,你学会了吗? ELISA实验看似简单，其实不然。记得以前一个同学*次做ELISA实验，跟我说，ELISA实验简直太简单了，到第2次在次做ELISA实验的时候，他惊讶了，说结果差别怎么这么大（同一份标本），第三次的时候，他决定认真的做一次，争取做到同一份标本，这次让他感受到ELISA并不是那么简单，发觉其实挺难的。今天的文章中为大家讲述一些ELISA实验中的小技巧，希望对大家有所帮助！ 1.操作前应对实验的物理参数有充分的了解，如环境温度(保持在18C～25℃)、反应孵育温度和孵育时间、洗涤的次数等，要先查看水育箱温度，ELISA试剂盒是否符合要求。 2.正确使用加样器加样器应垂直加入标本或试剂，避免刮擦包被板底部。加样过程中避免液体外溅，血清残留在反应孔壁上，加样器吸头要清洗干净，避免污染，加样次序要与说明书一致，否则可导致结果错误，实验重复性差。 3.手工洗板加洗液时冲击力不要太大，洗涤次数不要超过说明书推荐的洗涤次数，洗液在反应孑L内滞留的时间不宜太长。不要使洗液在孑L间窜流，造成孔问污染，导致假阴性或假阳性。 4.要保证加液量一致ELISA试剂盒我们在使用时感觉滴瓶加液不如加样器好，滴瓶不易控制加液量不准，造成显色不统一，判断错误。 5.显色液量不可过多加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下，加显色系统后要避光反应，显色液量不能过多，以免显色过强。 ELISA试剂盒的影响因素应选用有国家批准文号，质量靠得住的产品，不能图便宜，忽视质量保证。试剂应妥善保存于4℃冰箱内，在使用时先平衡至室温，不同批号的试剂组分不宜交叉使用。试剂开启后要在一周内用完，剩余的试剂下次用时应先检查是否变质，显色剂如被污染变色将造成全部显色，导致错误结果。查看更多

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进口ELISA试剂盒利用血清提取蛋白的方法？进口ELISA试剂盒使用血清提取蛋白是从血清中提取的蛋白质，适用于食物工业的食物增加剂和医药制剂。通常提取蛋白质的办法是离心分离，除掉血浆，使二价铁血红素酸化，并将其扫除。但是这种办法产量很低(100毫升血液仅可提取蛋白质约10)克。为了进步蛋白质得率，选用新的办法，即用每分钟2 500～3000转的速度在15～30分钟内将血液进行离心分离，使醋酸和氯化钠的混合物(比值为2∶1～4∶1)酸化。在温度90～110℃下加热5～15分钟。冷却，再增加yi醚。制作办法：取经过安稳的血液，作离心分离15～30分钟，每分钟转速为2 500～3000转。从而获得固形物，去除血浆，用水使固形物沉渣溶解。置血红素于培养基中。为了使培养基酸化而使血红素分子中的二价铁血红素和血球蛋白的结合体分离预先制备好醋酸和氯化钠的混合物并将它加热到90～110℃。混合时将固形物的溶血产品缓慢地增加到加热的混合物中。从头把温度逐渐地升高到沸点，煮沸5～15分钟，以便使结合体彻底分离，接着将混合物逐步冷却到室温。为了使二价铁血红素溶解并消除，进口ELISA试剂盒在混合物中按溶物产品比值2∶1～5∶1增加yi醚。这时提取出来的蛋白质呈白棉絮状。将溶液过滤，再用yi醚清洗。 100毫升血中提取的蛋白质产品相当于14.4克。使用这种办法，每100毫升的血液可进步蛋白质得率45 查看更多

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ELISA试剂盒的标准曲线怎么绘制? 酶联免疫吸附实验(ELISA)可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点，广泛应用于生物医学实验中。很多因素都能影响标准曲线的结果，其中就包括配制和操作。我是否可以改变标准品的配制？ ◆ 不可以。用指定的稀释液适当稀释的重组标准品如说明书中所示。 ◆ 混合和溶解标准品时，应避免起泡。 ◆ 溶解后的标准品zui好静置至少15分钟（根据说明书）。在使用之前轻轻混匀，保证所有的固体已经溶解。 ◆ 制作标准曲线时，确保所有的稀释步骤已经准确完成。稀释时注意及时更换枪头。在移液之前将稀释液充分混合。洗涤方式怎样影响我的标准曲线？ ◆ 不完全的洗涤会降低测定性，导致不理想的标准曲线结果。确保洗板机的正常工作，确保酶标板各孔被充分洗涤却不干燥。移液方式怎样影响我的标准曲线？ ◆ 不合理的移液操作会导致高CV值和不理想曲线。 ◆ 在制作标准曲线的过程中，不正确的移液方式会导致错误的稀释，从而使错误的数值进入标准曲线中，或者产生非线性曲线。确保移液器正常工作。每孔中的液体体积不等可能就是移液器失灵或者枪头使用不当所致。测定多个酶标板时是否可以使用同一条标准曲线？ ◆ 在测定不同板中的样品时，每一个板都对应一条标准曲线。技术错误或者不同的孵育情况，环境条件都会引起酶标板之间产生不同结果。一条标准曲线测定的样品值必需是在相同环境下产生的，否则就是无效值。查看更多

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细胞及分子

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纤维素酶与半纤维素酶的区别是什么？纤维素酶（β-1,4-葡聚糖-4-葡聚糖水解酶）是降解纤维素生成葡萄糖的一组酶的总称，它不是单体酶，而是起协同作用的多组分酶系，是一种复合酶，主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成，还有很高活力的木聚糖酶。作用于纤维素以及从纤维素衍生出来的产物。微生物纤维素酶在转化不溶性纤维素成葡萄糖以及在果蔬汁中破坏细胞壁从而提高果汁得率等方面具有非常重要的意义。纤维素酶是酶的一种在分解纤维素的时候起生物催化作用，是可以将纤维素分解成寡糖或单糖的蛋白质。纤维素酶不是单体酶，而是起协同作用的多组分酶系，是一种复合酶，主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成，还有很高活力的木聚糖酶。纤维素酶与半纤维素酶的区别：纤维素与半纤维素共同存在于大多数植物细胞壁中。纤维素全部由葡萄糖单位聚合而成，而半纤维素是一种杂聚多糖，常含有木糖，甘露糖，半乳糖，鼠李糖，阿拉伯糖等单糖单位。在酸性环境下半纤维素远较纤维素易于水解。半纤维素比纤维素的分子要小，大约含有500到3000个单糖单位，后者大约含有7000到15000个。半纤维素是分支的聚糖，而纤维素是不分支的。半纤维素具有亲水性能，可以造成细胞壁的润胀，赋予纤维弹性。一般木材中，纤维素占40～50%，还有10～30%的半纤维素和20～30%的木质素。查看更多

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古朵生物与您唠唠抗体选择的那些事儿？随着生命科学的发展，围绕蛋白进行的研究越来越多，抗体试剂在实验中的重要性越来越举足轻重。面临着纷呈复杂的抗体试剂市场，如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要。一、关于特异性的选择：特异性的选择主要需要考虑四个方面：蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。 1.蛋白特异性：针对需要检测的蛋白查找抗体，几个细节要区分，重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测，对抗体的要求是不一样的，注意查看抗体说明书的检测说明。如果重组蛋白不是全长表达，则需要注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。内源性蛋白*能清楚其剪切与修饰的方式，特殊表型的蛋白需要进行序列比对，并结合抗体免疫原序列，查看交叉反应的情况。磷酸化蛋白检测需要确定具体位点，不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在，不宜一概而论。 2.种属特异性：同种蛋白不同物种，有着或大或小的差异。目前大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板重组蛋白或设计多肽抗原的，根据蛋白的同源性的情况与其他种属发生交叉反应。需要参照说明书注明的可反应种属信息。一些稀有种属很难找到抗体，可以通过蛋白的序列比对，选择同源序列免疫的抗体，不过一般这种情况生产商不会受理其关于质量的申诉，如果可以申请到免费的抗体样品，则利于抗体选择。 3.实验方法特异性：目前使用抗体的实验方法有很多，不同的使用方法过程中，因为对蛋白样品的处理方式不一样，蛋白的含量有差异，对抗体的识别表位和效价要求都是不一样的。具体的根据说明书注明的产品应用方法进行选择。但是生产商一般不会将每个抗体都进行各种实验的检测，目前检测比较多的只是 WB、IHC、IF 等，如果针对具体的实验方法没有找到合适的抗体的，可以结合蛋白序列分析和抗体的抗原信息，选择尽可能有效果的抗体。同样，申请到免费的抗体样品是个很好的途径。 4.标记物的特异性：一般基于实验操作的实验方法不会使用带有标记的一抗，比如 WB、IHC 等，都是通过二抗类的试剂标记达到结果呈现的目的。但是基于仪器分析的一些实验，可能就会使用到直接标记的一抗，比如流式实验。那么需要了解到自己将要使用的仪器能检测到的荧光范围，针对不通的参数要求选择对应的标记物。在免疫荧光双标实验中，需要选配不同的荧光标记物。二、抗体种属来源的选择：有人认为单抗比多抗好，其实这并不是一个严谨的观点，只能说在可能性上单抗的特异性更好一些，而多抗的亲和力会优于单抗，并且特异性并不一定就逊于单抗，主要看抗原的设计水平。目前商品化抗体里单抗主要是鼠单抗、兔单抗，多抗主要是兔多抗、山羊多抗等，其他种属来源抗体较少。不建议纠结于单抗好还是多抗好，能做出实验的抗体就是好抗体。在选择上一般建议实验种属和抗体种属亲缘性越远越好，不宜同源。抗体不同种属会要影响接下来二抗的选配。特别是在免疫荧光双标实验中，需要在区别于实验种属的基础上，区分开两个指标的抗体种属来源，以便于二抗区别识别。三、关于性价比的选择：抗体的品质高低*终还是需要通过实验结果来呈现的，但是在选择抗体之前我们并无法准确判断抗体的效果如何。无论什么品牌的，无论进口还是国产的，都会有用得不错的产品，也都会有做不出来的产品。抗体属于异质化产品，不同品牌之间，甚至同一品牌的不同产品之间，抗体品质差异都较为明显，而且没有统一的衡量标准。这是抗体选择中*难的一个问题。很多人习惯于根据实验室传统意识或参考文献上使用的产品进行选择，但是因为不同批次间的抗体效果也是有差异的，所以并不能完全确保正确选择。在这种情况下，抗体的售后就尤为重要，遇到抗体品质障碍时，能够确保有效地解决问题，不至于影响实验的进展。现在有部分品牌可以提供免费的抗体小样的，无疑对这个问题是一个很好的解决方案。先确定抗体是否适合自己的实验，可以避免因为抗体质量投诉耽误实验安排。在价格方面，需要谨记，*贵的不一定就是*的，*适合你的实验的才是*的。花很多钱买到很贵的抗体，再花上很长的时间去投诉的情况并不少见。只买对的，不买贵的。在选择价格的时候还要注意规格大小、抗体浓度、效价范围等，要综合考虑。在规格方面，根据*终可以稀释成的工作液的量的来衡量更为准确。很多老品牌提供的抗体产品基本都是以大包装为主，就单个课题的实验而言，过大的包装有时会造成很大的浪费。四、关于品牌的选择：因为抗体品质的异质化，关于抗体的品牌选择就被大家所重视，但是不管是什么品牌都难免会遇到不适合自己实验的抗体。所以一般建议考虑那些业内普遍认可、购买方便、技术支持专业、售后处理便捷的品牌（比如上海沪鼎生物Abcam品牌）。一些甚至都没有正式代理的，只能备选。同时购买时一定要找能够提供产品指导、实验分析、售后处理的正规代理商购买，避免因为买到假货水货影响实验。五、关于其它一些小细节：抗体选择与使用过程中，多少还会遇到一些意想不到的事情。有些细节，还是需要多注意一些。如在选择做阻断或中和实验时，有时需要将抗体加到细胞培养液中，这是需要注意抗体是否含有叠氮钠。如果是大包装的抗体，进行分装是比较节约的方式，如果是高效价的，可以配成母液再分装。抗体的短时间运输，用普通冰块保持温度是可以满足要求的。另外不要纠结于 WB 过程中分子量的问题。很多时候，我们看到同样的抗体，不同的品牌，甚至同一品牌不同的货号，标注的分子量都不一样。其实可能只是生产商只检测时使用了不同的种属不同的样品类型，或是参照了不同的文献，对使用者来说，同样的样品，不管使用哪个品牌的，只要抗体是对的，目的条带只会出现在相同的位置。关于分子量的问题，一般不建议看产品说明，WB 中条带的位置由样品决定，并不会因为抗体不同而不同。所以在检测蛋白之前，我们可以通过数据库或参考文献，对将要检测的蛋白做个比较全面的了解，包括其可能剪切与修饰的情况、表型的情况等。在*次使用一个新的抗体时，不要根据分子量横向剪膜，可以保留几个全泳道，看看条带位置或分布的情况。查看更多

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怎么区分ELISA试剂盒能否测手中的样本？关于zui常见的细胞上清，咱们都知道，培养细胞进程中，无分外状况一般是10%的牛血清参与培养基中，经过培养后，细胞的吸收耗费。现在ELISA试剂盒查看的样本中，除了细胞上清外，还有比较大的一部分是血清和血浆样本。关于ELISA试剂盒客户来说，在试验中或许用到不一样的样本，怎么区分所购的ELISA试剂盒能否测手中的样本呢？ zui后细胞上清中蛋白含量会很少，并且关于一般牛血清出产的厂家来说，在出产进程中现已去除了，所以对一般ELISA而言，不会影响抗体抗原的。如elisa试剂盒厂家没有供应专门用于血清血浆样本的缓冲液，那么只要用已知浓度的待测政策蛋白参与所测种属的血清作为样本加样和用已知浓度的待测政策蛋白参与PBS缓冲液中一起查看对比，ELISA试剂盒即可知道该试剂盒是不是能够直接用来测血清血浆样本。 ELISA试剂盒灵敏度高是一大优点，而这其实也是和检测样本有些关联的，我们一般说来，如果待测样本中目标蛋白的浓度比较高，则对灵敏度要求相对小一些。如果待测样本中目标蛋白的浓度比较低，则必须考虑灵敏度的问题。一般说来，诊断试剂的检测范围以ng/ml计。而常见的科研试剂盒中的样本中的目标蛋白，范围可随样本的类型而变化。所以实验前应通过文献和预实验的方法确定样本是否在所购的范围内，是很重要的步骤。一般来说，试剂盒曲线上的zui小浓度是比较准确的，低于这个值因为与曲线是个“S”型结构有关，所以结果是有偏差的，是一种估算。再加上实验误差，所以达不到理想的效果。建议选择试剂盒时，应该看曲线上小的浓度值，而不是试剂盒上写的灵敏度。查看更多

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血清在细胞培养中的鉴别方法？血液凝固析出的淡黄色透明液体。如将血液自血管内抽出，放入试管中，不加抗凝剂，则凝血反应被激活，血液迅速凝固，形成胶冻。在凝血过程中，纤维蛋白原转变成纤维蛋白块，所以血清中无纤维蛋白原，这一点是与血浆zui大的区别。而在凝血反应中，血小板释放出许多物质，各凝血因子也都发生了变化。这些成分都留在血清中并继续发生变化，如凝血酶原变成凝血酶，并随血清存放时间逐渐减少以至消失。这些也都是与血浆区别之处。但大量未参加凝血反应的物质则与血浆基本相同。为避免抗凝剂的干扰，血液中许多化学成分的分析，都以血清为样品。主要作用： 1，提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。 2，提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。 3，提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。 4，提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。 5，对培养中的细胞起到某些保护作用：有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。这种作用是偶然发现的，现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢解毒中起重要作用，如SeO3,硒等。查看更多

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微生物

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ELISA试剂盒如何避免加样产生气泡呢? ？古朵是一家专业经营生物试剂、科研仪器、生物试剂、实验耗材的公司，主要经营elisa试剂盒，血清，抗体，标准品，生物试剂，实验耗材，培养基及实验外包等，产品畅销国内大部分地区，覆盖面广，产品齐全，价格实惠，服务周到。我司拥有雄厚的实力、合理的价格和完善的服务，能够及时解决和满足客户的各方面的需求，与国内多家企业建立了良好的长期合作关系，在市场上树立了公司的良好信誉和形象。通常气泡都是聚集在ELISA试剂盒酶标板的孔周围，导致孔中液体不能与孔壁有效接触，使孔内反应不均一。很多说明书、教科书上也都提到，加样时要避免出现气泡，这到底是什么原因呢？因为在做实验的过程中，有时为了打干净枪头里面的液体，很容易产生气泡，是不是这样对实验结果会后什么影响？ 1.通常气泡都是聚集在酶标板的孔周围，导致孔中液体不能与孔壁有效接触，使孔内反应不均一。 2.包被时有气泡的话，将导致包被不完全实际包被量下降－－弱阳性甚至假阴性。 3.封闭时有气泡的话，将导致大量未结合位点的存在，引起非特异性结合－－本底增高，假阳性。 4.加样时有气泡的话，抗原抗体不能有效的结合－－弱阳性甚至假阴性。 5.加二抗时有气泡的话，抗原抗体不能有效的结合－－弱阳性甚至假阴性（竞争法相反－－－－假阳性）。 6.加显色液时有气泡的话－－－显色不完全。 7.加终止液时有气泡的话（1、不能完全终止反应 2、影响酶标仪比色，OD值增高） 8.洗涤时有气泡的话，非特异性结合物不能完全洗去，做无用功。避免方法： 1.加样时尽量靠近孔底（不要接触孔底），用力均匀，不要过快过猛。 2.封闭时一定要加满孔。 3.洗涤时一定要加满孔（重要），气泡会浮上来*终驱除。手工洗板时一定要吸干水分并用力拍干。查看更多

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如何完善ELISA试剂盒实验中的过失？ ELISA操作步骤多，新手操作难免会有过失。而这些过失很多是由细节不够好造成的，减少过失的方法有很多，比如做实验时少说话，防止唾液掉进酶标条中。当然，大家还要学会自己发掘问题，找出原因。那么我们要如何完善elisa试剂盒实验中的过失？ ①：评估试剂的实用性，试剂的稳定与否，对准确率的高低到头重要。在试剂启用前，应进行阴、阳对照及样品反复比照试验，判定试剂符合要求后方可使用。 ②：操作前仔细阅读说明书，严格按照说明书要求进行规范化操作。不同批号的试剂不可混用。值得改进的地方，反复试验确定成立后才能改进，比如洗板次数的掌握等。 ③：加样要准确、快速。加样不准确，酶生成物的量不能确定，直接影响显色结果。另外，显色的深浅及A值的测定与加入显色剂和终止液的量有关，所以加样应慎重。要求在一定时间内加样完毕的实验，如果加样迟缓，便出现误差，而且试剂长时间暴露在外，尤其室温过高时，保存期会缩短甚至失效。 ④：检验技师应具备从事实验室操作的基本素质和实践经验。能熟练操作实验仪器、器械，具有一定总结和分析问题的能力，对实验中出现的意外情况能及时妥善解决。 ⑤：使用校对过的微量移液器，排除自然误差。移液器准确与否对定量检测尤为重要。 ⑥：严格掌握显色时间，显色时间过短，加入终止液反应终止后，底物结合物的量过少，易出现假阴性。超过显色要求时间后显色，应判为假阳性，这可能与试剂本身有关。加显色剂后立即显色，不可报阳性，这可能是本底显色的结果。 ⑦：洗涤彻底，洗板不彻底，酶结合物本底显色会呈现假阳性。另外，洗涤液要新鲜，现用现配，陈旧的洗涤液会出现本底增高现象，也可能出现假阳性。 ⑧：严控反应时间，反应时间过长，酶失活；反应时间过短，酶结合物不能与血清中的微生物抗原抗体充分结合，生成物结构松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假阴性。查看更多

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动植物

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动物细胞培养需要准备的内容有哪些？众所周知更好的准备事项能够让科研和生物的生长和研究拥有更好的环境，特别是在动物细胞培养时更需要对细胞生物学的实验基础做好维护，通过各种专业的技术和环境的保障，让这种动物细胞培养拥有更好的生长环境，而在动物细胞培养之前，相关科研人员也必须要准备如下几大内容。其一，选择可靠的血清原材料。众所周知血清是细胞培养液之中重要的组成成分，而其自身的品质直接决定了这种动物细胞培养的效率和生长情况，想要营造更好的动物细胞培养环境更需要对这种原材料进行了解和分析，服务一流的动物细胞培养需要对细胞生长环境之中的有效因子和营养成分进行更好的了解，确保这种血清原材料的生长活性和可靠性更高，以更加的品质让这种动物细胞培养的活性得到大幅度的提升；其二，营造合理的培养环境采用的培养设备。合理的细胞培养基和的培养环境能够提高这种动物细胞生长的效果，而恒定的细胞生长温度才能够保证始终如一的生长品质，因此顶jian的动物细胞培养必须要对细胞生长的环境实现温度的调控和管理，以恒定适宜的温度环境作为基础，让这种动物细胞培养拥有更好的生长效果；总而言之动物细胞培养必须要基于更加合适的环境和更好的原材料基础之上，而采用氧气和二氧化碳等提供更加可靠的气体环境更是保证动物细胞培养的重要前提，而在实验之中根据实验需求的不同选择相应的方式提高动物细胞培养的效率，保证更加可靠的培养效果维护更好的科研价值，唯有如此才能够让这种动物细胞培养的效果得到更好的保障。查看更多

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古朵生物:培养基的优点？培养基一般分为群体培养及克隆培养两种方式。群体培养方式是指大量细胞置于同一培养瓶中进行贴壁或悬浮培养。克隆培养方式是指挑选单个细胞或单一集落（克隆）于体外进行培养。常用于细胞克隆化（纯化），建立细胞株，长期传代。以下是我们整理关于培养基的几点优点： 1、能长期传代，保持活性，便于监控检测结构功能和生命活动。 2、培养条件可以人为的控制便于研究细胞代谢、物理、化学、生物因素的影响 3、可用于各种观察和检测手段研究活细胞的变化（变异、分化）。可从细胞水平开展亚细胞结构和代谢分子的表达。 4、研究范围和细胞来源广泛，选择性广。 5、不同代次细胞可长期保存，既可开展同代次不同条件和方法研究，又可观察不同代次的动态变化。 6、耗资少、经济、成本低、可大量培养，利于生物制品的生产。查看更多

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工艺技术

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血清避免产生沉淀您得知道这些事项？血清，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。有不少朋友在细胞培养过程中会遇到血清产生沉淀的问题，为了避免血清产生沉淀以下这些事项您得了解了解！ 1. 在为血清解冻的时候，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。 2. 请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响产品的质量。 3. 一般推荐在-20℃储存，避免反复冻融。 4. 解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法（-20℃至4℃至室温），若解冻时改变的温度太大（如-20℃至37℃），非常容易产生沉淀物。 5. 温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。 6. 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。 7. 若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。上海古朵生物科技有限公司主营：elisa试剂盒,人Elisa试剂盒,大鼠Elisa试剂盒,小鼠Elisa试剂盒,生物试剂,血清,抗体,培养基,标准品,国产血清、GIBCO胎牛血清等。种属齐全，价格优惠。期待您的来电咨询与合作！查看更多

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免疫组化之组织处理、切片和染色需知？ 1.组织处理恰当的组织处理是做好免疫组化染色的先决条件，也是决定染色成败的内部因素，在组织细胞材料准备的过程中，不仅要求保持组织细胞形态完整，更要保持组织细胞的抗原性不受损或弥漫，防止组织自溶。如果出现自溶坏死的组织，抗原已经丢失，即使用很灵敏的检测抗体和高超的技术，也很难检出所需的抗原，反而往往由于组织的坏死或制片时的刀痕挤压，在上述区域易出现假阳性结果。 1) 组织及时取材和固定　组织标本及时的取材和固定是做好免疫组化染色的关键步，是有效防止组织自溶坏死，抗原丢失的开始，离体组织应尽快的进行取材，2h内，取材时所用的刀应锐利，要一刀下去切开组织，不可反复切拉组织，造成组织的挤压，组织块大小要适中，一般在2.5cm×2.5cm×0.2cm，切记取材时组织块宁可面积大，千万不能厚的原则，(也就是说组织块的面积可以大到3cm×5cm，但组织块的厚度千万不能超过0.2cm，否则将不利于组织的均匀固定)。固定液快速渗透到组织内部使组织蛋白能在一定时间内迅速凝固。从而完好的保存抗原和组织细胞形态。对于固定液的选择，原则上讲，应根据抗原的耐受性来选择相应的固定液，但除非是专项科研项目，在病理常规工作很难做到这一点，因为病理的诊断和鉴别诊断都是在常规HE病理诊断的基础上决定是否进行免疫组化的染色，而HE染色的常规组织处理是采用10%的中性缓冲福尔马林或4%缓冲多聚甲醛4倍于组织体积进行组织固定，利用其渗透性强，对组织的作用均匀进行固定，但组织固定时间在l2h内，一般固定时间不应超过24小时。随着固定时间的延长对组织抗原的检出强度将逐渐降低。 2) 组织脱水、透明、浸蜡　组织经固定后进行脱水、透明、浸蜡和包埋。掌握的原则是脱水透明要充分但不能过，浸蜡时间要够，温度不能高，否则造成组织的硬脆使组织切片困难，即使能切片，由于组织的硬脆，也使切片不能完好平整，染色过程中极易脱片，对免疫组化染色抗原的定位及背景都不利，所以无水酒精脱水和二甲苯透明的时间不宜过长，正常大小的组织无水酒精脱水lh×3次，二甲苯透明lh×2次即可，浸蜡及包埋石蜡温度不要超过65℃。 2.切片组织得到很好处理后在进行切片之前还应对玻璃片进行处理，由于我们检测抗原是多种多样的，因染色操作程序复杂，时间较长，有些抗原是要进行各种抗原修复处理，如微波、高压、水溶酶等，玻片如果得不到很好的处理，将易造成脱片，为保证免疫组化实验的正常进行，要求在贴片前对载玻片作适当处理，必须在清洗干净的玻片上进行粘合剂的处理以防脱片。 1)Poly-L-Lysine (多聚左旋赖氨酸)　　一般采用分子量30000左右的0.5%多聚赖氨酸，也可用试剂公司出售的其浓溶液以1：10去离子水稀释。方法是将玻片浸泡其中，倾尽余液，在60℃温箱中烤干备用，此方法的优点是可以用于多种组织化学、免疫组化及分子学检测中的应用，粘贴效果，但价格稍贵。 2)明胶硫酸铬钾法　将2.5g明胶加热溶于500ml蒸馏水中，完全溶解冷却后加入0.25g硫酸铬钾搅匀充分溶解即可使用。方法是将玻片浸泡其中2 min，取出控尽液体入温箱中烤干备用。此法价格便宜、方法简单，任何实验都可以使用，特别适用于大批量的使用，但应注意，如果液体变蓝或粘稠状停用。 3)APES (3-氨丙基-乙氧基甲硅烷)　　此法必须现用现配。将洗净玻片入1:50丙酮稀释的APES中，浸泡20s，取出稍停再入丙酮或蒸馏水中刷去末结合的APES晾干即可。用此方法粘合的玻片应垂直烤片不能平拷，否则组织片中易出现气泡。切片必须保持切片刀锐利，切片要薄而平整、无皱摺、无刀痕，如有上述问题的切片在进行免疫组化染色都将出现假阳性现象，切片厚度一般为3~4μm，切好的切片在60℃温箱中过夜，注意烤片的温度不宜过高，否则易使组织细胞结构破坏，而产生抗原标记定位弥漫现象。 3.免疫组化染色 S—P免疫组化染色试剂盒采用生物素标记的第二抗体与链霉菌抗生物素蛋白连接的过氧化物酶及底物色素混合液来测定细胞和组织中的抗原。 S—P免疫组化染色步骤： 1) 石蜡切片脱蜡和水化后，用PBS(pH7．4)冲洗三次，每次3分钟(3×3’)。 2) 根据每一种抗体的要求，对组织抗原进行相应的修复。 3) 每张切片加1滴或50ul过氧化酶阻断溶液(试剂A)，以阻断内源性过氧化物酶的活性，室温下孵育10分钟。 4) PBS冲洗3×3’。 5) 甩去PBS液，每张切片加1滴或50ul的非免疫性动物血清(试剂B)，室温下孵育10分钟。 6) 甩去血清，每张切片加1滴或50ul的抗体(用户自选)，室温下孵育60分钟或4℃过夜，建议参阅每种抗体的说明书。 7) PBS冲洗3×5’。 8) 甩去PBS液，每张切片加1滴或50ul生物素标记的第二抗体（试剂C），室温下孵育10分钟。 9) PBS冲洗3×3’。 10)甩去PBS液，每张切片加1滴或50ul链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液(试剂D)，室温下孵育10分钟。 11)PBS冲洗3×3’。 12)甩去PBS液，每张切片加2滴或100ul新鲜配制的DAB或AEC溶液，显微镜下观察3—10分钟，阳性显色为棕色或红色。 13)自来水冲洗，苏木素复染，0.1％HCL分化，0.1％氨水或PBS冲洗返蓝。 14)如果用DAB显色，则切片经过梯度酒精脱水干燥，(二甲苯透明)，中性树胶封固；如果用AEC显色，则切片不能经酒精脱水，而直接用水性封片剂封片。查看更多

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ELISA实验吸光值衰减是什么原因? 西北大学的高老师在操作ELISA试剂盒实验的时候发现了一个问题，于是来电向古朵生物销售人员吴咨询：加完显色液(购买)显色一定时间后，再加终止液（2M H2SO4，自己配制）后，立即测试其吸光度值，等过几分钟再测试吸光度值，发现两次测得的吸光度值发生衰减。第二次均小于第一次。并且，加终止液时，从*条加到第12条后，测试发现，吸光度值从1-12条逐级衰减。前提是这12条酶标板都是同一种产品，并且包被相同蛋白。高老师向吴详细的说明了实验中出现的情况，吴对实验的问题有了一定的了解，随后安排技术人员为高老师去，为其解决这一问题，高老师恍悟道：原来ELISA吸光度值衰减这样处理就可以啦。其实具体的原因也很简单，有可能是显色液的质量不够好。一般情况下，终止反应后OD值的下降前期不是很明显。终止后，吸光度值是会随着时间衰减，所以一般是加完终止液后立即测，这样比较准。再次分析12条显示逐级递减的原因看看是否是： ① 显色时间调整，如果您现在的显色时间是10MIN，那调整到30MIN，再加终止液,观察上述现象是否出现。 ② 终止液中加入少量甘油看下怎么样。 ELISA试剂盒显色时间是30分钟，终止后要求在30分钟内检测，加入终止液后，zui好在加入终止液后2到3分终内检测，这是OD值相对比较高。拟合值能达到四个9。上海古朵 ELISA试剂盒采用进口材料生产，专业的酶免专家，提供免费代测，数据分析，技术服务。产品远销全国各地。多年以来我们以极其苛刻的要求控制产品的质量，坚持生物科学研究与世界同步的理念。因此也得到了全国各大医院院校、三甲医院、研究所，科研机构等单位的一致认可，并发表了多篇文献。咨询订购！查看更多

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琼脂糖凝胶电泳缓冲液配制有哪几点？琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。在琼脂糖凝胶电泳缓冲液又几种适用于天然双链DNA的电泳。琼脂糖凝胶电泳缓冲液配置 TBE通常作为5×或10×的贮存液配制和贮存。这种浓的贮存液pH应为8.3左右，它在应用前稀释，并用同一种贮存液制备凝胶溶液和琼脂糖凝胶电泳缓冲液。上述三种电泳缓冲液都比较好用，三者中TAE的缓冲容量最低，长时间电泳会被消耗。此时的凝胶的阳性一侧将发生酸性化，凝胶中向阳极迁移的溴酚蓝的颜色呈蓝紫色到黄色的变化，所以需要定期更换缓冲液。琼脂糖凝胶电泳缓冲液配方注意事项 a.TBE浓储存液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温条件下用玻璃瓶保存5X溶液，出现沉淀后则予以废弃。以往都以lX作为使用液(即1：5稀释浓储存液)进行琼脂糖凝胶电泳。但0．5X的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖凝胶电泳都以1：1 稀释的储存液作为使用液。进行聚丙烯酰胺凝胶电泳使用的lXTBE，是琼脂糖凝胶电泳时使用液浓度的2倍。聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1XTBE以提供足够的缓冲容量 b.碱性琼脂糖凝胶电泳缓冲液应现用现配在配制琼脂糖凝胶电泳缓冲液时，不论哪一种都需要加适量的EDTA，以除去2价金属离子。另外，硼酸与琼脂糖易形成复合物，使凝胶带负电荷，可能会吸附带正电荷的物质。查看更多

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技术分享：为您诠释中检所标准品的四个作用？我公司标准品系列产品销售*多的就是中检所和Sigma的，由于产品名称及作用的缘故，也有不少需要咨询药品的朋友致电到本公司（我公司产品仅用于生化研究），那么什么是标准品呢？我公司技术解释道：太过于书面化的说法不少客户听不太清楚，实际上就是采用一种方法对其进行测量，如果测量得到值与其提供的参照值相符，我们就认为该测量方法是合格的，可靠的。本文的开头我们就提到了作用这么一说，其中这也就是本文的重点内容，今天上海古朵带大家来看看：是什么诠释了中检所标准品的四个大作用。　　标准物质可作为特性量值已知的物质，用于研究和评价测量这些成分或特性的方法。从而判断该方法的准确度和重复性，并通过验证和改进测量方法的准确度，评价检测方法在特定场合的适应性，促进了校准方法和测试技术的发展。二、保存和传递特性量值，建立测量溯源性　　标准物质是特性量值准确、均匀性和稳定性良好的计量标准，具有在时间上保持特性量值，在空间上传递量值的功能。通过使用标准物质，可以使实际测量结果获得量值溯源性。三、保证产品质量监督检验的顺利进行　　在生产过程中，从工业原料的检验、工艺流程的控制、产品质量的评价、新产品的试制到三废的处理和利用等都需要各种相应的标准物质保证其结果的可靠性，使生产过程处于良好的质量控制状态，有效地提高产品质量。　　另外，标准物质在产品保证制定验证与实施方面，在产品检验和认证机构的质量控制和评价方面，在使用室认可工作方面都发挥着重要作用。四、保证测量结果的一致性、可比性　　通过校准测量仪器，评价测量过程，由标准物质将测量结果溯源到单位（si）制，保证测量结果的一致性、可比性，从而达到量值统一。中检所标准品产品展示： 1. 游离甲状腺素 2. 乙酰螺旋霉素 3. 阿奇霉素 4. 大观霉素 5. 人胰岛素 6. 生长激素查看更多

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今日关注：化学试剂保存绝招？实验中的化学试剂大多具有不稳定性，保存方法也因他们的性质不同而不同，那试剂应如何保存呢？上海古朵为您报道：常用不稳定试剂的分类及保存要求（1）易挥发、低燃点的试剂要密封，放于阴凉、通风、远离火源处保存。（2）易挥发或自身分解的试剂要密封，放于阴凉通风处保存。如浓硝酸，浓盐酸，浓氨水，AgNO3，液溴（水封）等。（3）与二氧化碳反应的物质要密封包村。如碱类，NaOH,Ca(OH)2,Ba(OH)2,等；如弱酸盐类，水玻璃，漂，偏铝酸钠，苯酚钠，Na2O,Na2O2等。由于其相应的溶液较固体更易反应，所以更要注意密封保存。（4）易与氧气作用的试剂，如亚硫酸盐，苯酚，亚铁盐，dian化物，硫化物等应将其固体或晶体密封包村，不宜长期存放其水溶液；亚硫酸，氢硫酸溶液要密封存放；钾，钠，白磷更要采用液封形式。（5）与水蒸气，水发生反应的物质要密封，并远离水源保存。如电石（CaC2）,生石灰（CaO），浓硫酸，无水硫酸铜（CuSO4），各种干燥剂（硅胶，碱石灰，P2O5，CaCl2等），K, Na, Mg, Na2O2, 更要同时具备所有要求。查看更多

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古朵告诉您:细菌转化的操作步骤？细菌转化操作步骤（1）事先将恒温水浴的温度调到42℃。（ 2）从-70℃ 超低温冰柜中取出一管（100μl）感受态菌，立即用手指加温融化后插入冰上，冰浴5~10min。（3）加入5μl连接好的质粒混合液（DNA含量不超过100ng），轻轻震荡后放置冰上20min。（4）轻轻摇匀后插入42℃水浴中1~2min进行热休克，然后迅速放回冰中，静置3~5min。（5）在超净工作台中向上述各管中分别加入500μl LB培养基（不含抗菌素）轻轻混匀，然后固定到摇床的弹簧架上37℃震荡1h. （6）在超净工作台中取上述转化混合液100~300μl，分别滴到含合适抗菌素的固体LB平板培养皿中，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀（注意：玻璃涂布棒上的酒精熄灭后稍等片刻，待其冷却后再涂）。（7）如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加40μl 2% X-gal，8μl 20% IPTG，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。（8）在涂好的培养皿上做上标记，先放置在37℃恒温培养箱中30-60min直到表面的液体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入37℃恒温培养箱过夜。（9）在被细菌污染的桌面上喷洒70%乙醇，擦干桌面，写实验报告。（10）观察平板上长出的菌落克隆，以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。上海古朵生物有限公司是一家全国性专业经销生化试剂，分子生物学试剂，免疫试剂，本公司经营品种多，质量好，价格合理，订货快速，交货及时，如需要订购我司ELISA检测试剂盒,ELISA检测试剂盒价格,进口ELISA检测试剂盒,培养基,培养基价格,进口培养基,elisa试剂盒,elisa试剂盒价格请电来咨询。查看更多

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菌种保存的几种常用方法？　　微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于zui不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。保藏方法大致可分为以下几种： 1．传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。 2．液体石蜡覆盖保藏法　是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。 3．载体保藏法　是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。 4．寄主保藏法　用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。 5．冷冻保藏法　可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。 6．冷冻干燥保藏法　先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。查看更多

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ELISA试剂盒各种不同类型的检测方法？ ELISA试剂盒洗刷一般可采用的办法有：一、吸干孔内反响液；二、将洗刷液注满板孔；三、放置2min，略作摇晃；四、吸干孔内液，也可倾去液体后在吸水纸上拍干，洗刷的次数一般为3～4次，有时乃至需洗5～6次。 ELISA试剂盒试验加样须留神如下问题： 1、引起样品时，加样枪吸头不该黏附剩余的液体，加样时不行90度向孔中滴加液体，这样会导致液体残留在吸头上，加样不！ 2、不要将吸头伸入孔中，一方面若触摸孔底可能压弯吸头，另一方面可能会将孔中的液体吹起来，加样不！ 3、正确的加样办法应为45度，吸头贴着孔壁参与，应留神：（1）视点太小，会使液体残留在孔壁上，导致加样不！（2）吸头应当贴着管壁和液面的交界处。 ELISA试剂盒可规划出各种不同类型的检测办法：一、双抗体夹心法二、双位点一步法三、间接法测抗体四、竞争法五、捕获法测IgM抗体六、运用亲和素和生物素查看更多

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简介

职业：上海古朵生物科技有限公司 - 销售经理

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地区：上海市

个人简介：上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量”的方针。查看更多

企业简介

企业名称：上海古朵生物科技有限公司

企业性质：贸易商,代理商,

主营业务：质粒载体定制，ELISA检测试剂盒，细胞培养，抗体抗原，蛋白纯化，染色液溶液，标准品对照品,微生物培...

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