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细胞因子研究工具有哪些? 细胞因子(cytokine，CK)是由多种组织细胞(主要为免疫细胞)所合成和分泌的小分子多肽或糖蛋白。细胞因子能介导细胞间的相互作用，具有多种生物学功能，如调节细胞生长、分化成熟、功能维持、调节免疫应答、参与炎症反应、创伤愈合和肿瘤消长等。zui初，人们不清楚细胞因子的本质，便根据其生物学活性进行命名，结果导致同一细胞因子有多种名称。后来，人们认识到细胞因子主要由白细胞合成，主要介导白细胞间的相互作用，于是将这些因子统一命名为白细胞介素(interleukin，IL)，并按发现的先后顺序冠以阿拉伯数字进行命名，如IL-l、IL一2、IL-3等。重组细胞因子的状态：市场上主流的重组蛋白产品，多在不含载体蛋白或其他添加物(如BSA、HAS、蔗糖等)的条件下，以低盐的形式做冻干处理，因此微量(多以微克计量)的细胞因子在冻干过程中会沉积于管内，形成很薄或不可见的蛋白层，所以建议在收到试剂后，务必于开盖前先离心20-30秒，使可能附于管盖或管壁的蛋白成分聚集于冻干馆的底部(此时能否见到白色沉淀均属正常现象)。细胞因子分类：（一）根据产生细胞因子的细胞种类不同分类 1.淋巴因子（lymphokine)；2.单核因子（monokine）；3.非淋巴细胞、非单核-巨噬细胞产生的细胞因子　（二）根据细胞因子主要的功能不同分类 1.白细胞介素（interleukin, IL)；2.集落刺激因子（colony stimulating factor, CSF)　；3.干扰素（interferon, IFN)；4.肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor, TNF)；5.转化生长因子-β家族（transforming growth factor-β family, TGF-β family)；6.生长因子（growth factor,GF）；7.趋化因子家族（chemokinefamily)　作用细胞因子通过结合细胞表面相应的细胞因子受体而发挥生物学作用。细胞因子与其受体集合后启动复杂的细胞内分子间的相互作用，zui终引起细胞基因转录的变化。参与免疫应答与免疫调节，调节固有免疫和适应性免疫应答；刺激造血功能；刺激细胞活化、增殖和分化；诱导或抑制细胞毒作用，诱导其凋亡。细胞因子的作用方式：1.自分泌作用。2.旁分泌作用。3.内分泌作用。细胞因子的作用特点：多效性、重叠性、协同性、拮抗性和双重性。细胞因子研究具有非常重要的理论和实用意义，它有助于阐明分子水平的免疫调节机理，有助于疾病的预防、诊断和治疗，特别是利用基因工程技术生产的重组细胞因子已用于治疗肿瘤、感染、炎症、造血功能障碍等，并收到良好疗效，具有非常广阔的应用前景。细胞因子正逐渐作为佐剂用于疫苗的研制，如白介素-2、IL-12等。细胞因子研究： 1. 细胞因子信号转导抑制因子2多克隆抗体：ABP60457 2. 心营养素样细胞因子1多克隆抗体：ABP59483 3. 细胞因子可诱导SH2域含蛋白多克隆抗体：ABP58159 4. 细胞因子受体样因子2多克隆抗体：ABP58271 5. 细胞因子诱导蛋白29多克隆抗体：ABP56749 生物学作用细胞因子还有其他的生物学作用,比如促进细胞凋亡和促进创伤组织修复。肿瘤坏死因子超家族中的一些细胞因子可以直接杀伤或者诱导靶细胞的凋亡,比如TNF-a和LT-α可以杀伤被病毒感染的靶细胞或肿瘤细胞。转化生长因子一B(TGF-B)可以刺激成纤维细胞和成骨细胞而促进损伤组织的修复,表皮生长因子可促进上皮细胞、成纤维细胞以及内皮细胞的增殖,促进皮肤创口的愈合。查看更多

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白细胞介素：分类和作用？！？白细胞介素，最初指由白细胞产生又在白细胞间起调节作用的细胞因子，现指一类分子结构和生物学功能已基本明确，具有重要调节作用而统一命名的细胞因子，它和血细胞生长因子同属细胞因子。主要功能：（1）刺激活化B细胞增殖，分泌抗体；（2）刺激T细胞增殖及CTL(细胞毒性T淋巴细胞)活化；（3）刺激肝细胞合成急性期蛋白，参与炎症反应；（4）促进血细胞发育。【IL 1 alpha】重组人白介素-1a #CYT-253 【IL 2】重组人白介素-2 #CYT-209 【IL 3 】重组人白介素-3 #CYT-210 IL1A（人源）ELISA试剂盒 #KA3055 人白介素1a 酶联免疫斑点法PLUS（ALP） #3414-4APW-2 白细胞介素-1 (IL-1) IL-1主要由巨噬细胞产生，此外几乎所有的有核细胞，如B细胞、NK细胞、体外培养的T细胞、角质细胞、树突状细胞、星形细胞、成纤维细胞、中性粒细胞、内皮细胞以及平滑肌细胞等均可产生IL-1。正常情况下只有皮肤、汗液和尿液中含有一定量的IL-1，绝大多数细胞在受到外来抗原或丝裂原刺激后才能合成和分泌IL-1。IL-1有两种不同的分子形式，一种称IL-1α,由159aa组成；另一种称为IL-1β，含153aa；两者由不同的基因分别编码。虽其氨基酸顺序仅有26%的同源性，然而IL-1α和IL-1β以同样的亲和力结合于相同的细胞表面受体，发挥相同的生物学作用。白细胞介素2 (IL-2 ) IL-2是T细胞和NK细胞产生的15.5kD糖蛋白，在机体的免疫应答中起重要作用。IL-2zui重要的作用是诱导T淋巴细胞增殖（从G0期进入S期）和分化。人胸腺中的T细胞前体表达IL-2R?并分泌低水平的IL-2，这种自分泌作用可促进胸腺细胞增殖。IL-2参与调节T细胞受体基因的重排和表达。IL-2能诱导NK细胞增殖，增强NK细胞的活性，诱导LAK细胞和TIL，并刺激它们产生细胞因子。高剂量IL-2能引起单核巨噬细胞增殖和分化，并增强单核巨噬细胞杀肿瘤细胞的作用。在体内，IL-2有抗肿瘤、抗微生物感染、引起移植排斥和自身免疫以及免疫调节等作用。白细胞介素3 (IL-3) IL-3又称为多能集落刺激因子(Multi-CSF)，主要由活化的CD4+T细胞产生。其主要作用为促进骨髓中多能造血干细胞的定向分化与增殖，产生各种类型的血细胞。此外IL-3还可调节多种成熟细胞的生长、分化及相关的基因表达，如C-MYC、IL-2RA基因等。IL-3分子量约为15KD，其化学本质为糖蛋白。白细胞介素4 (IL-4) IL-4是一种由活化的T细胞产生的细胞因子，在B细胞生长的早期活化B细胞，并使被抗原、抗IgM或脂多糖活化的B细胞进入细胞周期G1期。IL-4增强MHCII类抗原的表达和CD23（FceRII）在B细胞上的表达，诱导同种型（isotype）转换，如促使小鼠B细胞从分泌IgM、IgG3、IgG2b转变成分泌IgG1、IgG2a、IgA和IgE。也增强单个核吞噬细胞表达MHCII类抗原，但对炎症性细胞因子（如IL-1,TNF,IL-8）的释放和这些细胞的杀菌活性有抑制作用。IL-4 也活化细胞毒性 T细胞，对于T,B淋巴细胞的发育以及驱动体液免疫反应和抗体产生都是十分重要的。白细胞介素5 (IL-5) 人的IL-5由134氨基酸残基组成，含22氨基酸残基信号肽，2个糖基化点。小鼠IL-5由133氨基酸残基组成，含21氨基酸的信号肽，成熟IL-5分子含有112氨基酸残基，裸肽分子量12~15kDa，有3个糖基化位点，糖基化后分子量为18kDa，糖基化对于IL-5活性表达以及与相应受体的结合起重要作用。小鼠IL-5通常以二硫键连接的二聚体形式存在，分子量为45kDa。与其它IL相比，IL-5生物学活性作用谱相对较窄。白细胞介素6 (IL-6) 白介素6 是一种多肽。IL-6由2条糖蛋白链组成;1条为α链，分子量80kd;另1条为β链，分子量130kd。α链缺少胞内区，只能以低亲合性与il-6结合，所形成的复合物迅即与高亲和性的β链结合，通过β链向细胞内传递信息。炎症反应发生后，IL-6率先生成，产生后诱导产生CRP和降钙素原（PCT）生成。如在发生感染、内外伤、外科手术、应激反应、脑死亡、肿瘤产生以及其他情况的急性炎症反应过程中会快速产生。IL-6参与许多疾病的发生和发展，其血液水平与炎症、病毒感染、自身免疫疾病密切相关，它的变化比 CRP 更早。研究显示，细菌感染后IL-6迅速升高，PCT在2h后增加，而CRP在6h后才迅速增加。查看更多

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标准物质采购要注意什么问题? ？目前很多行业都需要购买各类符合国家标准的国产或者进口标准物质，一般来说，我们是通过正规的标准物质采购平台以及标准物质中心进行购买，采购需要按照相应的流程来进行，那么我们在采购标准物质的时候，需要注意哪些方面的问题呢?今天我们就为大家介绍一下。 1、标准物质作为一种经由国家认可进行生产的对照产品，对于自身的质量和品质要求很高，在生产过程中具有严格的精-确度要求，因此我们在购买的时候，应当选择经过国家认可的，具备有关专业生产资格的，正规、大型标准物质中心，充分确保我们所购买到的标准物质可靠放心。 2、由于涉及到的标准物质种类和数量众多，具有很强的专业性，为了能够保证我们在购买的时候准确无误，您可以通过标准物质中心网站进行产品的咨询，也可以通过平台搜索功能，查找到所需的具体标准物质种类，经过反复核对确认无误之后，再进行购买。 3、目前大型的标准物质中心提供的样品十分全面，各种标准品和对照品等种类可多达数万种之多，因此您在采购的时候应当注意了解全面的产品基础信息，并且进行筛选和购买，如果您在购买的时候有任何疑问，都可以通过平台的专业客服中心电话与我们进行咨询联系。今天我们为大家介绍了标准物质采购方面需要注意的一些问题，您可以参考以上流程步骤以及注意事项进行购买。国家目前对于标准物质的管控和认证十分严格，为了保证您所购买到的样品品质，注意所选择的应当是经过国家认可和批准的标准物质中心，方可放心购买。查看更多

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常用菌种怎么保存? (一) 菌种保藏的原理根据微生物的菌种生理、生化特性，在人工创造的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强度，使细胞基本处于休眠状态，生长繁殖受到抑制但又不至于死亡，以减低菌种的变异率。低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都有抑制微生物的代谢作用。低温、干燥、真空是用于菌种保藏的重要手段。选择保藏方法时，首先应考虑方法能否长期地保持菌种原有的特性，同时也应兼顾到方法的经济和简便。在实际工作中，往往多种条件同时使用，以提高保藏效果。（二）菌种保藏步骤 ① 挑选特征典型的纯菌菌落； ② 确定保藏的合适菌体形态； ③ 选择最适宜的保藏方法； ④ 定期对保藏菌种进行检查，观察是否发生变化，若有变化，须改变保藏方法。保藏期满应及时进行移种。 1.琼脂斜面低温保存法（1）方法：将经常使用的菌种的典型菌落接种在斜面（某些特殊菌种可用液体培养基）上，按规定的温度和时间培养，待充分生长后，把培养好的新鲜菌种用牛皮纸保好，为减缓培养基的水分蒸发，延长保藏时间，可将菌种保藏管的棉花塞换成橡胶塞。放在4℃左右的冰箱中保藏。每隔 2~3个月移种一次，继续进行保藏。若用半固体高层培养基穿刺培养，一般可保藏半年 ~ 一年。有的甚至更长时间。（2）适用范围：细菌、酵母菌、霉菌保藏。（3）特点：优点是——简便，易于推广；一般不需要另选择保藏用培养基；对大多数微生物都适用；缺点是——保藏期太短；传代次数多，易发生变异及污染。（4）注意事项：保藏的菌种应是生命活力旺盛的新鲜培养物，至少应是第三代的培养物。保藏时，破伤风杆菌可用庖肉培养基；生孢梭菌用流体硫乙醇酸盐培养基。必须定期检查保藏菌种冰箱的温度、湿度以及菌种管的棉塞是否松动或生霉，如有异常应及时处理。每次移植后，应与原菌种的编号、名称逐一核对，确证培养基特征和纯度无误后再继续保藏。保藏菌种的培养基应无糖，其他菌类含糖小于2%为宜，以免产酸过多，影响菌种存活。铜绿假单胞菌在冰箱中易发生菌体自溶而死亡，不宜用本法保存。 2. 液体石蜡保存法本法是用石蜡将培养物与空气隔绝，以降低菌种的生理生化水平，并可防止水分蒸发，从而延长菌种的保藏期。（1）方法：将菌种接种于斜面或穿刺于0.3~0.5 %琼脂半固体高层培养基中，培养好备用。取化学纯的液体石蜡装在试管中，每管10~15mL，加棉塞，瓶口包上纸，121℃高压灭菌30min，取出置37℃温箱或110~170℃烤箱中1~2h或干燥器内除去液体石蜡中的水分。将上述液体石蜡加入培养好的菌种试管内，液体石蜡液面以高出培养基最上端1㎝为宜，将试管直立，放入4℃冰箱中保藏。（2）适用范围：适用于保藏部分霉菌，酵母菌和放线菌，对细菌保藏效果较差。（3）特点：本方法简便易行，是实验室常用的一种保藏方法，该法主要使菌种与空气隔绝。（4）注意事项： ① 保藏时，用新鲜培养物接种，应检查纯度和特征后，方可进行保藏； ② 保藏过程中，需经常观察斜面是否干燥，如干燥，需重新移种； ③ 使用菌种时，先将菌种管倾斜使液体石蜡流至一边，再用接种针挑取培养物接种到新鲜斜面上培养，待长出新培养物后，再移种一次到新斜面上即可使用； ④ 将沾有少量液体石蜡的接种针浸于95%酒精中片刻，再烧灼灭菌，以免直接在酒精灯下烧灼时，液体石蜡四溅，引起污染； ⑤ 液体石蜡在菌种管中高出培养基的高度要严格控制，如太多，会影响菌种交换气体，使保藏效果不好；如太少,斜面容易干燥，将缩短保藏期。一般以高出斜面1cm为宜； ⑥ 制备无菌液体石蜡时，每管装量不能太多,否则分装到菌种培养基中易造成污染。查看更多

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实验室PCR产物的电泳及纯化分析？！？实验室PCR 产物的电泳及纯化一、目的 (1)了解PCR产物电泳与纯化的原理。 (2)熟悉和掌握PCR产物电泳与纯化的操作。二、原理在PCR过程中，部分引物和dNTPs在Taq酶等因子的作用下以DNA模板为指导合成新的DNA分子，当然还有一部分的引物和dNTPs没有完成所期望的任务,以小分子的形式存在于PCR产物混合液中,为了后续分子克隆的工作能够顺利进行,PCR产物就需要进行纯化，以去除PCR产物混合液中残留的Taq酶、BSA、Mgt+、引物dNTPs.buffer中的小分子以及非特异性扩增产物。通过电泳将所需要的PCR产物和其他分子分离,经过EB染色后，在紫外灯激发显色下把目标条带从凝胶中切出来，然后通过相应的缓冲液将其溶解，经异丙醇(乙醇)作用使得DNA分子沉淀，再通过在高速离心让沉淀的DNA分子结(indin)在滤膜上，而后用洗脱缓冲eluton ut其从滤膜上洗脱下来就得到了纯化的PCR产物。三、买验材料、器材和试剂1.实验材料有目标条带的PCR扩增产物。 2.实验器材 ①离心机;②2mL离心管;③移液器;④移液枪头;⑤水浴锅;⑥手术刀片;⑦紫外凝胶观察仪;⑧密封盒;⑨防紫外线眼镜;?橡胶手套;①分析天平;2离心管架;③1.5mL离心管;④水平电泳槽;⑤电泳仪;①⑥微波炉;⑦蓝盖试剂瓶;⑧带有层析滤膜的离心管(QIA quickspincolumn)。 3.实验试剂 ①PCR产物纯化试剂盒(QIAGEN);②异丙醇;③琼脂糖;④6X上样缓冲液(loading-buffer) ;⑤1X TAE电泳缓冲液;⑥溴化乙锭(EB) ;⑦100bp DNA marker;⑧3M NaAc(pH值为5. 0)。四、操作方法 (-)琼脂糖凝胶电泳 1.制胶准制脑胶模具，称取128脂期，倒人蓝盖试剂瓶中，然后用量简量取50mL 1x TAE电泳缓冲液倒人蓝盖瓶中。盖紧瓶盖，放人微波炉中，中火2~3min,待琼脂糖完全熔化后,取出蓝盖试剂瓶(取时要戴微波炉手套,以免被烫伤)，于室温下放置5~8min,将凝胶液缓缓倒入制胶模具中,插上样品梳，于室温下静置20~ 30min。 2.点样将凝固好的琼脂糖凝胶,放人加有电泳缓冲液的水平电泳槽中，取出样品梳。然后加人15pL有目标条带的PCR扩增产物+1.5pL 6X.上样缓冲液(Loading buffer)的比例进行混合后,把混合溶液加人凝胶的样品槽中,在合适的样品槽中加人2μL100bpDNAmarker. 3.电泳盖好电泳槽盖后，接通电源，120V电泳1h 20min左右(在凝胶中只有一排样品槽的情况)。 4.凝胶染色电泳完毕后,取出凝胶,放人装有溴化乙锭的密封盒中，染色25min。 (二)电泳后PCR产物纯化找出电泳结果出现单一目标条带的对应PCR扩增产物进行纯化。具体步骤如下:(1)在2.0mL的离心管壁上写上准备纯化的PCR产物的相关信息,并称重。 (2)切下含目标片段的胶块，切得尽可能小一些,把所得的胶块放人2.0mL的离心管中。 (3)称量装有胶块的离心管重量，计算出胶块的重量。 (4)加入6倍体积的QG buffer到离心管中(100mg胶相当于100pL)。 (5)将含有胶块的离心管放人50°C水浴锅中，温育10min,至胶块完全溶解，为促进溶解，每2~ 3min振荡离心管-一次。 (6)胶块全部溶解后,检查混合液的颜色是否为黄色(与未溶解之前的QG buffer 的颜色相似,若混合液的颜色为橙色或紫色,加10pL 3M NaAc(pH值为5. 0)。 (7)向离心管中加人1倍凝胶体积的异丙醇,混匀。 (8)将溶液转移人QIA quick spin column中,13 000rpm离心1min。 (9)弃掉液体,加入750μL PE buffer ，静置2~5min,13 000rpm离心.1min. (10)弃掉液体,13000rpm离心1min(空载离心，除去乙醇)。 (11)把QIA quick spin column置于一一个洁净的1. 5mL的离心管中。 (12)加人30pL的elution buffer置膜中央,13000rpm离心1min。(13)将洗脱所得溶液置于一20°C中储存。所得到的洗脱液可与克隆载体进行连接，然后转化使重组DNA分子进人大肠杆菌细胞内,经过培养获取克隆子。查看更多

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如何获得100%正确的支原体检测结果? 可以说，到目前为止，针对体外细胞培养的支原体检测的方法还没有一种单独使用就可以保证100%正确，既不会漏检（假阴性），也不会多检（假阳性）。（1）支原体固体培养法。通过固体培养法无法检测污染细胞的一种最常见的支原体，即猪鼻支原体（M.Hyorhinis）。这是因为猪鼻支原体无法在支原体固体培养基上形成可见的菌落，而猪鼻支原体约占所有支原体污染的20-50%。这就意味支原体固体培养法漏检率高达20-50%。（2）PCR法。PCR法导致的假阳性大家比较熟悉，无需多说。值得注意的是，由于细胞培养液中，经常会含有强烈抑制PCR扩增的代谢产物，如果不进行样品的前处理而直接使用细胞培养原液进行PCR检测，产生假阴性的概率是非常大的。（3）荧光染色法。由于该方法本身的灵敏度较低，轻度的支原体污染往往无法检测出来。该方法漏检率也不会低。（4）检测支原体特异性酶的方法，比如Lonza公司的MycoAlert Plus Mycoplas Detection Kit和上海古朵生产的《发光法支原体检测试剂盒》。主要缺点是发光值有一定的波动，处于检测下限边缘的读值可能会造成误判。（5）《一步法恒温支原体检测试剂盒》该方法尽管有许多优点，但是目前为止，我们只能保证该试剂盒能检测出说明书上列举的13种支原体，虽然这13种支原体大约占了所有污染细胞的支原体种类的99%左右，但是该方法也不能保证100%的支原体检出率。综上所述，单独使用目前市面上的任何一种支原体检测试剂盒，都无法做到100%正确，既不会漏检（假阴性），也不会多检（假阳性）。严格的支原体检测，至少需要使用两种，最好使用三种不同原理的支原体检测方法同时进行检测，才能使检测结果接近100%正确。如果您想得到100%正确的支原体检测结果（比如，开展细胞治疗的客户，进行干细胞培养的客户，生产血清、胰酶、培养液的客户，出售各种原代培养细胞系和肿瘤细胞系的客户等），任选本公司生产的《一步法恒温支原体检测试剂盒》、《PCR法支原体检测试剂盒》、《发光法支原体检测试剂盒》和《探针法支原体检测试剂盒》中的两种进行检测，将会得到比较满意的结果。如果几种不同支原体检测方法的检测结果一致，正确率几乎就是100% 查看更多

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冻融血清沉淀物是否影响血清品质? 　　做细胞培养实验经常会用到血清，当血清用不完我们会冻起来下次再次使用。但你有没有发现有时候在融化血清过程中会出现白色的沉淀物质，出现这种情况是否血清出现问题了呢？　　首先我们要搞清楚血清中絮状沉淀物是什么，沉淀物其实包含含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清（400g，1-2分钟）或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里（一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤）。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。　　那怎么才能降低沉淀物的发生呢？　　（1）解冻血清/分装冻存时，须规则摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。　　（2）勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。　　（3）血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。　　使用时常见问题及解决方法：　　一、保存血清zui好的方法? 　　血清应保存在-5℃至-2O℃若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议将无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。　　二、如何解冻血清才不会使产品质量受损? 　　将血清从冷冻箱取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解，然后在室温下使之全溶。但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。　　三、如何避免沉淀物的产生? 　　1.解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-2O℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃)，实验显示非常容易产生沉淀物。　　2.解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生　　3.请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。　　4.血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。　　5.若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。　　四、血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理? 　　欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。查看更多

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细胞培养中出现的小黑点到底是什么? 在细胞培养中常可见到细胞及培养液中有一些大小不等、形态不同的黑色未知颗粒，去网上搜和请教师哥师姐得到的答案也多种多样。那么这些小黑点究竟是什么那？我们又该怎么去应对这种情况那？小黑点都有哪些说法？非生物类细胞碎片类在细胞培养的时候，由于细胞代谢、物质交换、周边环境变化，尤其是在从37度培养箱中拿出来观察的过程中，由于液体培养基的比热较大，液内温度高于外界温度，造成冷热交换、小范围内形成液体流动加剧，当然这些小碎末就会被搅动起来形成似乎“游动”的感觉；随着细胞培养的继续，部分细胞开始衰亡，细胞膜结构破裂，破裂之后的细胞内容物泄露到培养液中。尤其是溶酶体的破坏，连续性地造成其他细胞和细胞器的损伤，如果换液不很勤，又会出现进一步破坏和残渣的出现；再者，“小黑点”问题是很多细胞培养者已经发现的问题，但到目前为止尚未找到其监测和排除的试剂和手段，这首先是由于所谓“小黑点”病原体根本难以收集和捕捉，这也从另一个侧面证明了“小黑点”问题的难以确定性；再说任何一种外来的微生物在培养基中都会有生命活动的反应和表现，而不是简单地运动那样的外观性表现。举一个例子：如果“小黑点”的运动状况已经到了用显微镜已经可以观察出的程度，其营养代谢和能量需求也就可想而知。这样，培养液中的影响消耗、酸碱含量程度等都要发生明显变化。比如说：迅速的、大含量的沉淀， pH值的迅速下降，细胞大量破碎死亡、引发其它类型微生物侵染等等。而这些状况，在所谓的“小黑点”感染中，是很难观察到的。同时“小黑点”的出现而影响细胞状态似乎得不到有力的证据。倒是细胞状态下降的时候，“小黑点”明显增多了。很有可能是细胞状态下降时，细胞衰亡产生的细胞碎片。所以小黑点属于细胞碎片是比较可能和合理的。玻璃培养瓶中的类似氧化硅的东西网上有一篇文章说，小黑点其实不是一种生物，是无机物，其本质是玻璃培养瓶里的硅颗粒。可影响细胞生长，细胞状态好时，不明显。细胞状态较差，数量少时才容易看到，最好的办法是用一次性培养瓶，可消除小黑点影响。血清聚合物产物 Gibco公司的血清说明，此物为血清聚合产物，而不是微生物。生物类支原体有人曾认为小黑点可能是支原体污染，因为相对比较权威的网站文章指出，小黑点可以通过滤膜，可以在空气中传播。而恰巧口腔支原体为人体口腔中之正常菌丛，所以实验室之操作人员的污染亦可能为支原体的污染源。但有人为此做了实验证明小黑点不会是支原体，原因如下： 1、光镜下可见, 因为体积不对，支原体在普通显微镜下不能看到。 2、多种染色后可见，甚至hoechst即能将它染色,一般来说支原体用普通染色法不易着色，用姬姆萨染色很浅，革兰染色为阴性。所以，小黑点是一种支原体的可能性比较小。真菌有很多人发现类似小黑点的，但最后确定是真菌，二性霉素B对其有效。那说明小黑点不存在只是细胞培养中的真菌感染，还是说明小黑点属于真菌类污染物。如果小黑点是一种真菌，那么由此引起的污染是不会引起那么多人的关注，即使它很特殊。但是这不能排除那些认为“小黑点”是真菌的细胞者，看到的只是一般真菌感染。由于细胞被感染了，要进行拯救处理，不像理论上那么简单，稍有不注意都是很容易导致培养失败，所以小黑点是一种真菌也是不太可能。寄生类原虫小黑点属于寄生类的原虫，而不是细菌、支原体，也不是什么补体、细胞碎片或蛋白沉淀。有人在400倍以上的高倍镜下可以清楚的看到它有两种不同形态，一种较大，运动较慢，泛红光；另一种较小，运动较快，红中带绿，个小的围着个大的分布，很可能是公的围着雌的。这种生物也并非离开细胞就不能存活，也有人做过这样的试验，单纯培养过污染小黑点的血清4周，直到满视野都是黑煤渣般的小黑点。给人的感觉是小黑点和细胞一样有丛集性，如果密度低则生长缓慢，如果手懒，拖了几天没换液，待生长到一定浓度后便会飞速分生，细胞受感染的程度也大，这时除了培养基中可见外，细胞表面通常也象长满了粉刺，所以有人认为细胞旁分泌的某些因子可以抑制小黑点的生长。查看更多

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细胞培养时出现的沉淀是什么? 养细胞就跟养娃一样，时刻为它牵肠挂肚，生怕一个不小心，让它没吃饱没睡好。养娃需要悉心照料，同样养细胞也需要无微不至的关怀，各种吃的穿的用的，更是一样都不能少，为了这些“可爱”的细胞们，不知道有多少生物医学科研人操碎了心。这不，最近养的好好的细胞，这状态说差就差了，还不是细胞污染的原因，这究竟是什么情况那？细胞到底怎么了？细胞培养中的沉淀如果排除了污染，细胞培养基中的浑浊通常被解释为金属、蛋白和其他培养基组分的沉淀。沉淀物可能损害细胞健康，因为他们通过螯合可移除养分和其他需要的组分，从而改变培养基的组成。沉淀物也是显微镜可见的，可能会干扰依赖成像的实验分析。产生沉淀的可能原因 1、温度变化在细胞培养中，温度是引起沉淀的主要因素之一。当遭遇温度的极端变化时，高分子量血浆蛋白会从溶液中析出；热失活和冻融循环能促进蛋白降解和沉淀；因为液体或重组成培养基在使用之间保持冷藏储存，盐可能沉淀，尤其是10x或其他浓缩的储存液。 2、失水诱导的浓度改变如果培养基可能蒸发，培养基组分(包括盐) 的浓度将会增加，特别是培养基表面可能容易形成晶体沉淀。 3、钙盐制备无血清培养基时，组分添加的顺序可能导致不可溶分子的形成。钙盐尤其容易沉淀，比如CaCl2和MgSO4在溶液中反应产生CaSO4晶体。高压灭菌和pH值不稳定会加剧这一问题。 4、金属补充物铜、铁和锌等金属离子是细胞生长所必需的，是无血清培养基的重要补充物。培养系统中其他血清组分的缺失可能导致这些金属沉淀，为细胞形成有毒的环境。在较高pH环境下(一般 8时)，碳酸盐和氢氧根离子与铜离子、磷酸盐和氢氧根离子与铁离子、碳酸盐、磷酸盐和氢氧根离子与锌离子、氢氧根离子与镁离子易形成不溶性沉淀物；在氧化条件下，铜和锌更易于沉淀。丨金属沉淀物及对并颜色丨硫化亚铜（I）：黑色氧化铜（I）：黑色氧化亚铁（I）：黑色硫化亚铁（II）：黑色氢氧化铜（II）：蓝色磷酸亚铁（II）：蓝色胱氨酸亚铜：蓝-灰色碳酸铜（II）：蓝-深绿色氯氧化铜（II）：蓝-绿色醋酸铁（III）：棕色碳酸钙：无色氢氧化锌：无色磷化亚铜（I）：灰-黑色氧化镁：灰-绿色或棕-黑色三氧化二铁（III）：红-黑色氢氧化铁（III）：红-棕色碳酸锰：玫瑰色磷酸锌：灰色磷酸钙：白色磷酸镁：白色氢氧化镁：白色过氧-化镁：白色焦磷酸镁：白色碳酸锌：白色氧化锌：白色硫化锌：白色碳酸亚铜（I）：黄色氢氧化亚铜（I）：黄色过氧-化锌：黄色 5、污染培养物浑浊可能是细菌或真菌污染造成的。查看更多

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细胞侵袭实验总结？！？实验原理将细胞小室（Transwell小室）放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。细胞小室（transwell）应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。所应有的常见实验共培养体系：小于3.0?m孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0?m以下孔径。常用0.4、3.0?m。我们实验室用的是0.4?m。将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。趋化性实验可用5.0、8.0、12.0?m膜，上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室，计数进入下室的细胞量可反映下室成分对上室细胞的趋化能力。 ①细胞B对细胞A的趋化作用：将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的趋化作用。 ②趋化因子对细胞的趋化作用：将细胞种于上室，下室加入某种趋化因子，可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。肿瘤细胞迁移实验常用8.0、12.0?m膜，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。肿瘤细胞侵袭实验常用8.0、12.0?m膜，原理与肿瘤细胞迁移实验类似。上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，但与肿瘤细胞迁移实验不同的是，聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶，用以模仿体内细胞外基质，细胞欲进入下室，先要分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质胶降解，方可通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。侵袭实验操作实验用品细胞小室：有很多不同规格，根据实验需求自己选择。上层培养液：上层培养液采用无血清培养基，为维持渗透压，需加入0.05%-0.2% BSA。细胞：值得注意的是，有侵袭能力的细胞才可用于Transwell侵袭实验。建议实验前先用酶谱法检测MMPs的表达，特别是MMP-2的表达。如果不清楚细胞MMPs的表达情况，就盲目进行Transwell侵袭实验，可能会造成不必要的浪费，一次Transwell侵袭实验花钱少则数百，多则数千，并不是笔小数目，还是小心为妙。另外，为了让实验结果更明显，可先撤血清让细胞饥饿12－24h，再进行实验。基质胶：常用的是人工重构基底膜材料Matrigel，主要成分为层黏连蛋白和Ⅳ型胶原，如果购买的小室是已经铺好基质胶的，那么Matrigel就不需要购买了。下层培养液：下层常用含5%－10% FBS的培养基，具体浓度根据细胞侵袭力而定，侵袭力弱的细胞可适当提高FBS浓度。下层也可用趋化因子，有战友将纤维粘连蛋白加入下层培养液作为趋化因子，但个人认为，FBS仍是最合适的。细胞培养板：常用于Transwell侵袭实验的细胞培养板有6孔板、12孔板、24孔板等，以24孔最常用。细胞培养板没什么特殊要求，普通的细胞培养板就可以。但要注意，细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套。 24孔细胞小室 12孔细胞小室 6孔细胞小室此外，膜的下室面可涂上纤维粘连蛋白，这样做的目的是使穿过膜的细胞更好地附着在膜上，也可用胶原（collagen）或明胶（gelatin）。细胞照样贴壁很好。如果贴壁不好的话可以试试看。如果培养时间很长（ 24h），细胞还是会掉到下室里面去，所以有条件的话，最好还是在膜下层涂上FN。另外，值得一提的是，膜下层涂上FN还有一定的趋化作用。实验步骤无基质胶Transwell小室制备 ① 包被基底膜：用50mg/L Matrigel 1:8稀释液包被Transwell小室底部膜的上室面，4℃风干。如果需要在下室面铺FN的话，可将200ul枪头的尖端剪掉,吸取FN均匀涂抹在小室的下面。用胶原（collagen）的话，一般配成0.5mg/ml，直接用枪吸了涂在膜上。 ② 水化基底膜：吸出培养板中残余液体，每孔加入50ul含10g/LBSA的无血清培养液，37℃，30min。另有方法：在上室的聚碳酸酯膜上加入稀释后的Matrigel (3.9?g/?l) 60-80?l (注意体积不可太大，以刚把聚碳酸酯膜浸湿为最好)，置37℃ 30min使Matrigel聚合成凝胶。制备细胞悬液 ① 制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。但这一步并不是必须的。 ② 消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1－2遍，用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至1－10×105，个人认为不要超过5×105。具体实验时采用密度要自己摸索，因为不同细胞，其侵袭能力是不同的。个人经验，细胞量过多，穿过膜的细胞会过多过快，如果最后用计数法统计结果的话将难以计数；而过少的话，可能还没到检测的时间点，所有的细胞都已穿过，因此最少也要保证在收样的时候，上室内还要有一定量的细胞存在。对照组和处理尽量不要分开计数，因为细胞数目的差异会严重影响实验结果。如果需要对细胞预处理而不得不分开计数，那么计数一定要多重复几次，力求准确，尽量保证对照组和处理组细胞密度一致。接种细胞 ①取细胞悬液100－200?l加入小室，不同公司的、不同大小的小室对细胞悬液量有不同要求，请参考说明书。24孔板小室一般200?l。 ② 24孔板下室一般加入500?l含FBS或趋化因子的培养基，不同的培养板加的量有不同要求，具体请参考说明书。这里要特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。 ③ 培养细胞：常规培养12－48h（主要依癌细胞侵袭能力而定）。时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。另外，我看到细胞在小室内的形态不是正常培养贴壁的形态，而是圆形的，仍是悬浮时的形态，不过会聚集成团，所以看到细胞不正常贴壁也不要紧张，是正常现象。在培养过程中，膜下会逐渐有少量小气泡产生，这是正常现象，可不予处理，但我遇到过培养一段时间后，膜下出现了大气泡，幸亏及时发现，否则后果将非常严重。因此，个人建议，最好接种细胞后1－2h把培养板从培养箱里拿出来看看，确信没有大气泡产生。结果统计检测穿过的细胞数有两种方法：直接计数法 1、“贴壁”细胞计数这里所谓的“贴壁”是指细胞穿过膜后，可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去。可以通过给细胞染色，可在镜下计数细胞 ① 用棉签擦去基质胶和上室内的细胞； ② 染色：常用的染色方法有结晶紫染色、台靡蓝染色、Giemsa染色、苏木精染色、伊红染色等。 ③ 细胞计数：使用正置显微镜进行观察和拍照，把Transwell小室反过来底朝上就可清楚看到小室底膜上下室侧附着的细胞。也有不少人用手术刀将膜切下后染色，再贴在玻片上，滴二甲苯，再盖上盖玻片，就可以长期保存，但是这样做小室就成了一次性的了，未免有点浪费。取若干个视野计数细胞个数。一般采用3-5个视野，也有人用10个，都是随机选取。间接计数法由于某些细胞自身的原因或某些膜的关系，有时细胞在穿过膜后不能附着在膜上，而是掉进下室。间接计数法主要用于穿过细胞过多，而无法通过计数获得准确的细胞数所采用的方法，与常用的MTT实验是同样的原理。 1、MTT法 ① 用棉签擦去基质胶和上室内的细胞； ② 24孔板中加入500?l含0.5mg/ml MTT的完全培养基，将小室置于其中，使膜浸没在培养基中，37℃ 4h后取出。 ③ 24孔板中加入500?l DMSO，将小室置于其中，使膜浸没在DMSO中，振荡10min，使甲湃充分溶解。取出小室，24孔板于酶标仪上测OD值。 2、荧光试剂检测这类方法一般是与Transwell小室一起出售的，其原理与MTT法类似，是用一种荧光染料染细胞，再将细胞裂解，检测荧光值。 3、结晶紫检测原理与MTT法也是类似的。但结晶紫染色还有个优点，就是染色和脱色的过程并不影响膜上细胞，在脱色后还可重新染色。查看更多

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导致珍贵的干细胞死亡的元凶是谁? 养过细胞的人都知道优质血清的重要标准之一是内毒的含量。血清由于其复杂的成分是不可代替的，但它也难以控制外界因素的影响内毒素过高会是实验室珍贵的细胞凋零。例如：干细胞体外培养实验，由于干细胞的原始性，它们对内毒素非常敏感，所以，当血清内毒素偏高时，细胞很容易死亡，需要在试用前提早参看该批次《检测报告》，以决定是否入围进行试用。又例如：基因敲除相关的细胞实验，培养的细胞要尽可能保持其原始状态，任何引导细胞衰老或凋亡的试剂，都会让后续的实验结果“失之毫厘，谬以千里”。所以，选择极低内毒素的血清，至关重要。同样，例如：原代培养，杂交瘤融合，细胞转染，难养细胞在体外的增殖（肝细胞，神经细胞，内皮细胞等）....这些细胞的培养都需要内毒素更低的血清，如果内毒素过高，对细胞造成的损害，会大大影响后续实验结果。还有一些细胞，实验室比较常用，经常复苏，培养，冻存，如此，血清会经常作用于细胞；还有的细胞需要培养的时间较长，血清会长时间作用于细胞；还有细胞典藏等项目，都需要使用更低内毒素的血清，以避免内毒素长久对细胞的毒性影响。因此，我们在挑选优质血清的时候内毒素是我们应该优先考量的条件之一。查看更多

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试剂冷库使用注意事项？！？ 1、使用适当的试剂冷库。如果有放射性物质或生物危害物质存放其中，则严禁放置食物，冰箱门上要作清楚的标记。易燃物质(如乙醇)必须存放在防爆冷库内，这种防爆冷库可以消除电火花。 2、只有在取试剂的时候才打开冰箱门。如果要在冷库内寻找某个试剂，先将放置其他试剂的盒子或架子放在冰上后再找。 3、试剂冷库内所有容器都必须有标签，盖子都必须盖好，不要将没有拧紧盖子的试管放在冰箱内的聚苯乙烯杯子里或者放鸡蛋的凹槽内。每个管子都必须经受得住摇动而不会从架子上翻落(以防粗心的实验员在冰箱内乱翻东西时将试管打翻)。 4、把所有试剂放置的位置记录下来。这样做能迅速地在盒子里找出试剂，并且在稍后能放回原处。把试剂放置的位置系统的记录下来，能够使寻找试剂变得更加容易。 5、定期清理那些已经不用的试剂。只剩10ml培养基的瓶子、细菌培养基的皮氏培养皿、以及那些“以备万一”备用的样品，它们会占据许多空间而不容易找到需要的物品。 6、尊重私人空间。冰箱是公用的但通常会一个人一层，因此不要占用别人的位置。当你整理好自己的东西，发现地方还是不够时，和管理试剂冷库的人讲，让他给你更多的地方。查看更多

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配置好的抗生素，究竟可以存放多久? 常见抗生素和其稳定性如下：注射用青霉素钠青霉素水溶液在室温不稳定，20 单位/ml 青霉素溶液 30 ℃ 放置 24 小时效价下降 56% ，青霉烯酸含量增加 200 倍，因此应用本品须新鲜配制。邦达邦达 (注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠)说明书中明确表示：溶解后的药物应当立即使用，没有使用的部分在室温下（20～25 ℃ ）放置 24 小时后应当丢弃，或在冷藏保存（～8 ℃ ）48 小时后丢弃。静脉输液袋中的药物稳定性研究表明，本品在室温条件下 24 小时内化学性质（溶解后药物的效价、溶解后药液的 pH 值和溶液的澄清度）保持稳定，冷藏条件下溶解的药液在一周内保持稳定。罗氏芬罗氏芬 (注射用头孢曲松钠)新配制的溶液能在室温下保持其物理及化学稳定性达 6 小时，或在 2-8 ℃ 冰箱里保持 24 小时，但按一般原则，配制后的溶液应立刻使用。依其浓度及保存时间的不同，溶液呈现为淡黄色到琥珀色。溶液颜色对药物有效性或耐受性并无意义。丽扶欣丽扶欣（注射用头孢呋辛钠）肌内注射：用灭菌注射用水配制时，本品混悬液在室温 24 小时，冰箱 5 ℃ 保存 48 小时可保持活性。过了这个期限，任何未用的溶液都应丢弃。静脉注射：用灭菌注射用水配制时，0.25 g，0.75 g，1.5 g 配制后的溶液在室温 24 小时，冰箱 5 ℃ 保存 48 小时可保持活性。本品在室温下与以下一些溶液可以 24 小时内保持相容性，肝素（10～50μ/ml），氯化钾（10～40mEq/L），碳酸氢钠，0.9% 氯化钠。每 0.75gZINACEFADD-Vantage 瓶，用 50 ml 5% 葡萄糖注射液，0.9% 氯化钠注射液，0.45% 氯化钠注射液稀释，可以在室温存放 24 小时，冰箱存放 7 天。如溶液发生浑浊或有沉淀不能使用。不同浓度的溶液可呈微黄色至琥珀色，本品粉末、混悬液和溶液在不同的存放条件下颜色可变深，但不影响其疗效。美平美平 (注射用美罗培南)配制好静脉点滴注射液后应立即使用，建议在 15～30 分钟之内完成给药。使用前，先将溶液振荡摇匀。如有特殊情况需放置，仅能用生理盐水溶解，室温下应于 6 小时内使用（本药溶液不可冷冻）。希舒美希舒美 (注射用阿奇霉素)药品原液的准备：向 500 mg 希舒美 (注射用阿奇霉素) 瓶中加 4.8 ml 灭菌注射用水，振荡直至药物完全溶解。因希舒美 (注射用阿奇霉素) 为真空包装，建议使用标准的 5 ml 注射器 (非自动的) 以确保准确抽取 4.8 ml 灭菌注射用水。使每毫升溶液中含 100 mg 阿奇霉素。该溶液在 30 ℃ (或 86℉) 以下可保存 24 小时。胃肠道外给药在使用前须用肉眼观察是否有颗粒状物，如溶液中有明显的颗粒物，应将药物溶液丢弃。稳可信稳可信 (注射用盐酸万古霉素) ：室温（1 至 30 ℃ ）下保存配制后的溶液应尽早使用，若必须保存，则可保存于室温、冰箱内，在 24 小时内使用。科塞斯科塞斯（注射用醋酸卡泊芬净）输注液储存于 25°C 或以下温度的环境中，必须在 24 小时内使用；如储存于 2 至 8°C 的冰箱中，则必须在 48 小时内使用。输注液须用大约 1 小时经静脉缓慢地输注。注射用两性霉素B脂质体注射用两性霉素B脂质体(上海新先锋) ：本品不可用生理盐水溶解，滴注液应新鲜配制，滴注速度宜缓慢（滴速不得超过 30 滴/分）。每剂滴注时间至少 6 小时。以上为常见的抗生素使用说明，均参照药品使用说明书，为临床患者静脉输液提供参考。查看更多

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为什么我们要用琼脂糖凝胶做电泳载体? 常用的电泳实验载体： 1、醋酸纤维素薄膜电泳：醋酸纤维素薄膜电泳是以醋酸纤维素薄膜为支持物，它是纤维素的醋酸酯，由纤维素的羟基经乙酰化而制成。 2、琼脂糖凝胶电泳：琼脂糖凝胶电泳是一种以琼脂糖凝胶为支持物的凝胶电泳。 3、聚丙烯酰胺凝胶电泳：聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂又称为共聚体的N,N’-甲叉双丙烯酰胺（简称Bis）在加速剂和催化剂的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称PAGE)。 4、等电聚焦电泳：等电聚焦电泳是利用具有pH梯度的电泳介质来分离等电点(pI)不同的蛋白质的电泳技术。琼脂糖凝胶电泳其分析原理与其它支持物电泳的最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有网络结构，直接参与带电颗粒的分离过程，在电泳中，物质分子通过空隙时会受到阻力，大分子物质在泳动时受到的阻力比小分子大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅依赖于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大地提高了分辨能力。琼脂糖系天然的琼脂加工制得，天然琼脂是一种多聚糖，主要由琼脂糖（约占80%）及琼脂胶组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷。而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象。所以常用于血清蛋白、血红蛋白、脂蛋白、糖蛋白、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶等同工酶的分离和鉴定，为临床某些疾病的鉴别诊断提供了可靠的依据。与免疫化学反应相结合发展成为免疫电泳技术，用于分离和检测抗原。可对目前常用的琼脂糖进行某些修饰，如引入化学基团羟乙基，则可使琼脂糖在65℃左右便能熔化，被称为低熔点琼脂糖。该温度低于DNA的熔点，而且凝胶强度又无明显改变。以此为支持物进行电泳，称为低熔点琼脂糖凝胶电泳，主要应用于DNA研究。如DNA鉴定，DNA限制性内切酶图谱制作等，为DNA分子及其片段分子量测定和DNA分子构象的分析提供了重要手段。总结琼脂糖凝胶电泳的优点如下： 1. 琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可以进行电泳。 2. 琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大(约占98%~99%)，近似自由电泳，样品扩散较自由电流，对样品吸附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。 3. 琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定。 4. 电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。制成干膜可长期保存。查看更多

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动植物

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动物专用血清分离胶，更高效率提取血清? 血清分离胶最开始的作用也是为了分离血清和血块，从而让检测更加的迅捷和便利，现在更是演变出更多的作用，其中不得不提到的提取动物的血清，虽然鲜少听说，但是通过比重和其他指标数据的控制，是可以实现更加快速提取动物血清的。常规血清分离胶常用血清分离胶的比重基本就是1.045-1.065g/cm3之间，间于血细胞和血清之间，专用于体外人体血液样本分离，在采血后能够更完整的进行保存和运输，离心后短时间内符合医院检测要求。动物专用血清分离胶这是近几年来提取动物血清的一项进步，古朵在近几年接触到的动物专用血清分离胶的要求也是不少，由于提取动物一般都比较小，全血其实也没有太多，所以在尽可能的情况下是希望能够达到完全的提取血清，这就要求血清分离胶的比重要非常的精确，并且触变性能要非常好，这样才能达到这样的效果，到目前为止，如兔子，老鼠，猴子等动物的血清分离胶已经使用，提取效果还不错，但是在这个全新的领域还需要更多的探索。动物专用血清分离胶所要面临的问题虽然动物血清分离胶已经属于试用阶段，但是很多没有专业研发团队的血清分离胶生产厂家，势必会对动物血清分离胶有一定的影响，之前就有接触过说是能够完整的提取动物血清，但是最后交付的是体外人体血液的分离胶，完全不能满足动物血清提取。市场上真假需要甄别，不然还在萌芽阶段的动物专用血清分离胶就有可能被扼杀。辨别动物专用血清分离胶主要看什么其实血清分离胶在国内并不算发展太长时间，满打满算也才三四十年，现在在真空采血管中的发展还算是平稳，在动物提取血清上可以算作尝试，必须要重视的一点就是比重的问题，常规采购需要注意，一般厂家生产不可能一下子就提供动物专用的血清分离胶，因为这项技术并没有完整的形成一套体系，甚少有生产厂家知道，所以咨询动物专用血清分离胶，有实力的厂家都是需要进行比重的测试和实验室小试，短时间不可能拿货出来，这个周期需要根据其厂家实力而定。查看更多

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微生物

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为什么有些纯化的质粒时间长了会发生降解? 产生这个问题的原因有很多，主要还是因为核酸酶的污染。除了在质粒提取过程中会带入核酸酶外，根据有关报道发现，质粒属主细胞的种类也会影响到抽提质粒的质量。如果提取的质粒需要长期保存，可以使用内含丰富的核酸酶活性的大肠杆菌，比如DH5α,DH1,HB101等。查看更多

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实验室生物污染的消毒处理方法 ? 实验室生物污染的消毒 (1)实验室安全柜、实验台面及地面污染后消毒。实验时如果发现微生物污染了实验地面,应立即停下实验,进行消毒处理。首先将局部暴露部位用含有消毒剂吸水性好的多层纱布(或纸巾)覆盖暴露表面，覆盖面积要超过暴露面积25%,然后喷洒消毒剂(如0. 8%~1%过氧乙酸或0.5%的次氯酸钠),覆盖30 min后，小心地将吸水材料及被其吸收的液体或/和覆盖的试验样品一起放人到事先准备好的耐高压污物袋中。意外污染消毒遵循有机材料原则,0.8%~1%过氟乙酸(或0.5%的次氯酸钠)、75%乙醇溶液或0.05%新洁尔灭几种消毒剂选择使用。 (2)离心管破损后的消毒。装有含微生物液体的离心管如果发生破裂或机器正在运行时怀疑发生破裂，应关闭机器电源,让机器密闭静置30 min。如果机器停止后发现破裂,应立即将盖子盖上，让机器密闭30 min。当清理玻璃碎片时应当用镊子或用镊子夹着棉花进行。所有破碎的离心管、玻璃碎片、吊篮、十字轴和转子都应放在75%酒精消毒液内浸泡24h后,然后高压灭菌。未破损的带盖离心管应放在不同容器内75%酒精消毒液中,浸泡60 min后再取出。离心机内腔应当用75%酒精消毒液擦拭，放置过后再擦拭一次，然后用水擦洗并干燥。清理时所使用的所有材料都应当按感染性废弃物处置。（3)可能污染冰箱的消毒处理。将可能污染的冰箱、冰柜外表面用0.05%的将冰箱:冰柜放置在特制的大托盘上，托盘面积大于消毒粉剂,使消毒粉与化冻水混合后有效氯的含量大于1000 mg/Le打开冰箱、冰柜，清点内在物品,并根据需要对样品作相应的处理。清点光平后，格林箱冰柜存电化冻将化冻水小心地收集在容器内，按有效氯1g/L的量将消毒剂投入污水中。搅匀，作用30 min,冰箱冰柜内、外表面用0. 05%的新洁尔灭或0.8%的过氧乙酸喷洒或擦拭消毒，作用30min,用清水擦洗冰箱、冰柜内外表面，然后用干布擦干。在清理消毒过程中，如有不小心打碎容器或污染环境的地方应进行喷洒0.8%过氧乙酸溶液或2 g/L的含氯消毒剂，覆盖污染区域，进行消毒处理。如操作者所穿戴的防护用品受到污染时,应立即停止工作，进行消毒处理。处理方法为:对于防护服应立即向污染的部位喷洒0. 5%过氧乙酸溶液或2 g/L含氯消毒剂,然后将其小心地脱下,放人黄色塑料袋中。对其他污染的防护用品应小心脱摘下,浸人0.5%过氧乙酸溶液或2g/L的含氯消毒剂中浸泡30min。查看更多

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标准品有效期(失效期)与复标期 ? 无特殊规定时，有效期及复标期如下： 1、如无特殊情况，工作标准品的含量每半年复标一次或另取新生产的样品标定。当标准品暂不使用时，复标周期可能超过规定周期，在使用前进行复标，合格后可以继续使用。 2、对于特定市场使用的工作标准品，复标可以按照当地药政局或者药典的规定的周期来进行。 3 、标准品若在使用过程中发现异常或者较大变化，应停止使用该标准品，并考虑采用更严格的包装和保存方式或缩短其复标期等措施。 4、若老的基准标准品批号过期，则用此批基准标准品标定过的相应的工作标准品应按照新批号基准标准品进行重新标定，用此批标准品配制的储备溶液也应同时失效，应用新的批号基准标准品重新配制。 5、基准标准品按说明书要求，若标签或者化验单上没有指明有效期(失效期)，可以到网站上查询，如USP，EP 标准品目录单，若无法查到，同本厂规定此种药品的有效期，若无法得知此批的标定日期，可以从收到标准品日期算起。 6、对于省药检所，兽药检所标定的工作标准品，有效期(失效期)同该产品的有效期。标准品一般在0℃~10℃之间冷藏保存（原则上保存在15℃以下的阴凉处），但相对于产品运输时，并不是所有产品的运输温度与储存温度一致，冷冻保存的温度在0℃以下。有些产品在运输时有暂时升温的可能性，个别产品特殊要求，我们将冷藏运输。为了增加稳定性，化学对照品的包装应能防潮、避光和抗氧化。一般固体韧应分装在可重新封闭的容器内，以便于多次使用.液体或易潮解物质分装在熔封的玻璃安瓶内。易氧化的物质可充氮包装。化学对照品的保存应以提高物质稳定性为原则.尽可能在干燥、低温条件下储藏。但易吸湿潮解的样品在普通冰箱或冷库中保存会因相对湿度较高而降低其稳定性.必须置密封容器中。查看更多

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6类化学试剂注意事项，你都知道吗？？　　关于化学试剂的分类，一般分为易燃易爆类、有毒类、腐蚀性类、强氧化性类、遇水易燃类、放射性类等六种。大家都知道在工厂、学校、医院和研究所的日常工作中，都离不开化学试剂，而且它本身也具备一定的危险性，该怎么管理好，以及它本身具有什么特性都需要特别清楚，下面小编就来给大家简单介绍下。　　1、易燃易爆类　　一般都将闪点在25℃以下化学试剂列入易燃化学试剂，它们多是极易挥发的液体，遇明火即可燃烧。闪点越低，越易燃烧。使用易燃化学试剂时绝不能使用明火，加热也不能直接用加热器，一般不用水浴加热。在使用易燃化学试剂的试验人员，要穿好必要的防护用具，最好戴上防护眼镜。　　2、有毒类　　大部分化学试剂对人体都有毒害，在使用时一定要避免大量吸入; 在使用完试剂后，要及时洗手，洗脸洗澡，更换工作服，对于一些吸入或食入少量即能中毒致死的化学试剂，如: 氰化钾、氰化钠及其氰化物；三氧化二砷等砷化物、二氯化汞及某些汞盐等，在使用时一定要了解这些试剂中毒时的急救处理方法，剧毒试剂一定要有专人保管，严格控制使用量。　　3、腐蚀性化学类　　当这些试剂碰到皮肤、粘膜、眼、呼吸器官时都要及时清理，特别是对皮肤、粘膜、眼睛、呼吸器官有极强腐蚀性的化学试剂，如各种酸和碱、三氯化磷、溴、苯酚等。在使用前一定要了解接触到这些腐蚀性化学试剂的急救处理方法，如酸溅到皮肤上要用碱液清洗等。　　4、强氧化性类　　强氧化性类都是过氧化后是含有强氧化能力的含氧酸及其盐，如过氧化氢、硝酸钾、高氯酸及其盐、高锰酸钾及其盐过氧化苯甲酸、五氧化二磷等。再适当的条件下可放出氧发生爆炸，并且与有机物、铝、锌粉硫等易燃物形成爆炸性混合物，在使用时环境温度不高于30℃，通风要良好，并不要与有机物或还原性物质共同使用。　　5、遇水易燃类　　这类化学试剂有钾、钠、锂、钙、电石等等，遇水即可发生激烈反应，并放出大量热，也可燃烧，在使用时要避免与水直接接触，也不要与人体直接接触，以免灼伤皮肤。　　6、放射性类　　使用这类化学试剂时，一定要按放射性物质使用方法，采取保护措施。其它类的危险化学试剂，无论常用不常用，在使用前一定要了解它的安全使用注意事项，方可使用。　　在试验过程中由于操作不当或疏忽大意必然导致事故的发生，所以在遇到事故发生时要能正确处置，具备冷静的头脑，1不要惊慌失措，2要及时正确处理，3要严格按规范操作，尽量避免事故发生。例如，浓硫酸稀释时，浓硫酸应沿着容器的内壁慢慢注入水中，边加边搅拌使热量均匀扩散。在做有毒气体的实验中，应尽量在通风橱中进行。不慎将苯酚沾到手上时，应立即用酒精擦洗，再用水冲洗等。　　以上就是给大家整理的六类化学试剂基本注意事项，不知道有没有给大家带来一些帮助呢？作为实验室工作人员，不但要了解化学试剂的注意事项，还要及时做好各种试剂管理。对于传统的人工管理来说，确实费时费力。查看更多

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标准溶液与溶液的区别? ？　　什么是溶液，什么是标准溶液?事实上有很多人经常将两者混淆，常规来说，溶液指的是多种或最少两种物质组成的混合物，而标准溶液则是具有准确已知浓度的试剂溶液，但标准溶液是属溶液，虽然两者有着明显的区别。下面小编来给大家详细介绍一下标准溶液与溶液的区别。　　标准溶液与溶液的区别：　　溶液是由至少两种物质组成的均一、稳定的混合物，被分散的物质(溶质)以分子或更小的质点分散于另一物质(溶剂)中。物质在常温时有固体、液体和气体三种状态。　　溶液的均一性包含密度，组成，性质都一样，除此外，溶液还分为饱和溶液和不饱和溶液。　　标准溶液是容量分析中常用的一种滴定溶液，靠它测得待测物的含量。靠它求得未知溶液的浓度。在其他的分析方法中用标准溶液绘制工作曲线或作计算标准。　　有些标准溶液由于很不稳定，以至难以配制和使用，因此是不能利用的。　　这样的标准溶液包括硫化氢(H2S)、二氧化氯(ClO2)、溶解氧(DO)和臭氧(O3)。液氯标准溶液只能配制成高浓度溶液，所以必须加入高纯水进行稀释，并且使用不会消耗液氯的玻璃器皿。　　古朵生物专注标准物质研发与生产,供应标准物质,标准品,标准溶液,对照品,标准样品,滴定标液,单标,混标定制服务。查看更多

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