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微生物的检测技术有哪些如何杀灭? 微生物包括细菌、霉菌、真菌和藻类等，虽然大部分微生物都对人体无害，但是由细菌病毒引发的传染病的发病率和病死率在所有疾病中占据第1位。微生物对人类最重要的影响之一是导致传染病的流行，所以微生物的检测十分重要。常用的几种微生物检测方法： 1、琼脂平板培养法因培养基不同，琼脂平板法分为选择性培养基检测法和显色培养基检测法。选择性培养基是在培养基中加入选择性抑制剂来抑制非目标微生物生长;显色培养基是在培养基中加入细菌特异性酶的显色底物，以菌落颜色区分目的菌落与非目的菌落。 2、显微镜镜检法将待测样品中的微生物富集后，于油镜下直接计数。显微镜镜检法通常与琼脂平板培养法结合使用，通过琼脂平板培养法对菌落进行定性分析，再用显微镜进行定量计数。传统检测方法虽然对设备要求不高，技术含量也偏低，但耗时长，人工消耗量大，一般检测实验室可根据实际情况合理挑选检测方法，无需拘泥于方法选择的形式。 3、微生物测试片检测技术一般情况下，微生物测试片由印有网格的聚丙烯薄膜和覆盖有培养基和显色物质的聚乙-烯薄膜组成。待测样品经过处理后可直接接种在微生物测试片上，然后放置在适宜的温度下培养——使固定在测试片上的显色物质与待检微生物生长产生的特异性酶发生显色反应，形成有颜色的菌落，通过对这些菌落进行计数便可实现检测。测试片法菌落典型，易于判读，且因其操作简便、计数直观，多数可缩短培养周期从而快速得到结果，而且人为操作环节较少，商品化程度高，避免了因人为因素造成误差较大的缺点。测试片法是蕞为成熟的食源性微生物快速检测方法之一。对于一些热敏感的细菌，由于测试片在整个操作过程中均处于常温环境，可有效避免热损伤，因此能够提供更加精-准的计数结果。测试片可分别检测菌落总数、大肠菌群及大肠杆菌计数、霉菌和酵母计数、肠杆菌科计数、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌等，且微生物测试片与传统检测方法之间的相关性非常好，均可达统计学上无显着性差异。目前，因其快速简便的特性，故已广泛应用于我国食品行业和环境、过程及成品的检测。查看更多

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霉菌的生长条件你知咩? 霉菌生长条件分析。芽孢在室内外空气中总是存在的，其含量的多少与季节及室外空气状况相关。此外，霉菌的生长扩散，需要良好的周边环境，包括：能够附着的建筑表面，氧气，合适的温度，营养物质，湿气或自由水。此外，pH值，日光，表面粗糙度，生物体的相互作用，暴露时间等都能影响霉菌的生长。 ①合适的温度条件。霉菌可以在0℃～40℃的温度范同内生长，而22℃～35℃被认为是霉菌生长的最佳温度。不同种类的霉菌其最适温度是不一样的，大多数霉菌繁殖最适宜的温度为25～30℃，在0℃以下或30℃以上，不能产毒或产毒力减弱。如黄曲霉的最低繁殖温度范围是6-8℃，最高繁殖温度是44～46℃，最适生长温度37℃左右。但产毒温度则不一样，略低于生长最适温度，如黄曲霉的最适产毒温度为28-32℃。 ②必须有水分存在。Grifint在1981指出，霉菌主要吸收溶解在液体中营养物。因此，建筑围护材料中的由于结露所提供的液态水分比其周围空气中的所含的水蒸气，对霉菌的生长更起作用。墙体中的水分一般由于建筑建造过程中带入，建成后，又因雨水和地下水渗入墙内。此外，空气中的水蒸气通过材料扩散或空气渗透进入墙体。当某一处温度低于露点温度时，湿气从蒸汽态冷凝成液态并积聚下来。国际能源署(IEA)推荐以材料中的相对湿度80%，作为预防霉菌生长的临界湿含量，后来ASHRAE引用了该标准。 ③要有足够的营养供给。每种建筑材料中都含有不同程度上的营养物质。Sedlbauer(2001)根据不同建材能提供霉菌生长的营养物水平，将建材分为四个等级。即使是那些不能直接提供营养物的建材(如金属、塑料制品等)，由于其积累的灰尘可能含有各种微生物代谢物，动植物的残骸，以及一些脂肪性毛屑，而为霉菌生长提供营养物。现已有很多关于霉菌对无机类建筑材料侵蚀的报告。 ④暴露时间问题。弄清楚霉菌生长所需的时间是个非常复杂的事情：生长需时取决于温度、周边相对湿度、材料的含湿量、日夜交替、空气流动、环境波动、材质、材质表面特性及其周围的杂质。当环境温度在5℃～5O℃，相对湿度总是在80%以上，数周或数月通常就能引发霉菌生长。 ⑤必要的空气细菌所需要的气体主要是氧气，有的细菌还需要C02.根据对氧的需要程度，可将细菌分为：需氧菌：必须在有氧（空气）情况下才能生长。微需氧菌：在5%左右的低氧压环境中才能生长。厌氧菌：无氧的环境中能生长。兼性厌氧菌：在有氧和无氧环境中均能生长。查看更多

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动植物

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植物样品的采集制备和保存? 在进行植物激素检测之前，首先要进行植物的采集与保存，对于整个检测而言，前期的这部分工作显得意义重大。 1.植物样品的收集植物安排样品多用于确诊剖析，收集植物安排样品首先要选定植株。样株有必要有充沛的代表性，一般也象收集土样一样按照一定路线多点收集，组成平均样品。组成每一平均样品的样株数目视作物品种、种植密度、株型巨细、株龄或生育期以及要求的准确度而定。从大田或试验区选择样株要注意群体密度，植株长相、植株长势、生育期的共同，过大或过小，遭受病虫害或机械损伤以及由于边际效应长势过强的植株都不该选用。假如为了某一特定目的，例如缺素确诊而采样时，则应注意植株的典型性，并要同时在邻近地块另行选取有比照含义的正常典型植株，使剖析的结果能在相互比较的情况下，阐明问题。植株选定后还要决议取样的部位和安排器官，重要的原则是所选部位的安排器官要具有最大的指示含义，也就是说，植株在该生育期对该营养的丰欠最敏感的安排器官。大田作物在生殖生长开端时期常采纳主茎或主枝顶部新老练的健壮叶或功能叶；稚嫩安排的营养组成改动很快，一般不宜采样。苗期确诊则多收集整个地上部分。大田作物开端结实后，营养体中的营养转化很快，不宜再做叶剖析，故一般谷类作物在授粉后即不再采确诊用的样品。假如为了研究上肥等措施对产品品质的影响，则当然要在老练期采纳茎秆、籽粒、果实、块茎、块根等样品，果树和林木多年生植物的营养确诊一般选用“叶剖析”或不带叶柄的“叶片剖析”，单个果树如葡萄、棉花则常做“叶柄剖析”。植物体内各种物质，特别是活动性成分如硝态氮、氨基态氮，还原糖等都处于不断的代谢改动之中，不仅在不同生育期的含量有很大的不同，并且在一日之间也有显着的周期性改动。因而在分期采样时，取样时刻应规定共同，一般以上午8—10时为宜，由于这时植物的生理活动已趋活泼，地下部分的根系吸收速率与地上部正趋于上升的光合作用强度挨近动态平衡。此刻植物安排中的养料贮量最能反映根系养料吸收与植物同化需要的相对联系，因而最具有营养确诊的含义。确诊作物氮、磷、钾、钙、镁的营养成分状况的采样还应考虑各元素在植物营养中的特殊性。采得的植株样品如需要分不同器官(例如叶片，叶鞘或叶柄、茎、果实等部分)测定，须当即将其剪开，以免营养工作。 2.植株安排样品的制备与保存采得的样品一般说是需要洗刷的，否则或许引起泥土、上肥喷药等显着的污染，这对微量营养元素如铁、锰等的剖析尤为重要。洗刷办法一般可用湿布仔细擦净表面沾污物。测定易起改动的成分(例如硝态氮、氨基态氮、氰、无机磷、水溶性糖、维生素等)须用新鲜样品，鲜样品如需短期保存，有必要在冰箱中冷藏，以抑制其改动。剖析时将洗净的鲜样剪碎混匀后当即称样，放入瓷研钵中与恰当溶剂(或再加石英砂)共研磨，进行浸提测定。测定不易改动的成分则常用枯燥样品。洗净的鲜样有必要赶快枯燥，以削减化学和生物的改动。假如延迟过久，细胞的呼吸和霉菌的分化都会耗费安排的干物质而致改动各成分的百分含量、蛋白质也会裂解成较简略的含氮化合物。杀酶要有满足的高温，但烘干的温度不能太高，以避免安排外部结成干壳而阻碍内部水分的蒸发，并且高温还或许引起安排的热分化或焦化。因而，剖析用的植物鲜样要分两步枯燥，一般先将鲜样在80—90烘箱(最好用鼓风烘箱)中烘15—30分钟，(松软安排烘15分钟，致密坚实的安排烘30分钟)，然后，降温至60—70，逐尽水分。时刻须视鲜样水分含量而定，大约12—24小时。枯燥的样品可用研钵或带刀片的(用于茎叶样品)或带齿状的(用于种子样品)磨样机破坏，并全部过筛。剖析样品的细度须视称样的巨细而定，一般可用圆孔直径为1mm的筛；如称样仅1—2g者，宜用0.5mm的筛；称样小于1g者，须用0.25或0.1mm筛。磨样和过筛都有必要考虑到样品沾污的或许性。样品过筛后须充沛混匀，保存于磨口广口瓶中，内外各贴放一样品标签。样品在破坏和储存过程中又将吸收一些空气中的水分，所以在精细剖析工作中，称样前还须将粉状样品在65(12—24小时)或90(2小时)再次烘干，一般惯例剖析则不必。枯燥的磨细样品有必要保存在密封的玻璃瓶中，称样时应充沛混匀后多点勺取。 3.植物微量元素剖析样品制备与保存。样品的收集与制备chapman(chapman,H.D1966 Dignostic Criteria for plants and soils,Univ.of Calif.Berkeley)的采样技术得到遍及承认，可供参考。植物微量元素剖析样品的枯燥和破坏过程中，所用办法与剖析常量元素样品类似，特别指出的是避免枯燥和破坏过程中仪器对样品的污染。例如枯燥箱中烘干时，避免金属粉末等的污染，破坏样品选用的研磨设备，应选用不锈钢工具钢刀和网筛，如要准确剖析铁，有必要在玛瑙研钵上研磨，研磨剖析标本的细度相当重要，至少经过20目筛，并充沛混合，磨细过的样品，要储存在密封的容器中，在剖析前，样品应在60—70下烘干20小时，然后再进行剖析。查看更多

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生物医药

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抗体和重组蛋白如何正确保存? 无论是保存还是运输，请避免反复冻融。反复冻融，冰晶会破坏抗体和重组蛋白的空间结构，导致蛋白变性形成多聚体和重组蛋白构象改变，从而降低抗体的结合能力，也加快了抗体球蛋白和重组蛋白的降解速度。抗体和重组蛋白保存得当与否，直接决定了抗体和重组蛋白的活性使用效果，如果保存得当，抗体和重组蛋白活性大部分都可以维持数年。 1. 收到抗体和重组蛋白后的操作收到抗体和重组蛋白后（大部分抗体和重组蛋白是溶液态），请务必在 4℃，12000rpm，离心 3 分钟，再打开管盖进行分装、溶解和保存（如果抗体和重组蛋白体积小于 50?l，请延长离心时间至 5 分钟，以保证全部抗体和重组蛋白均离心下来，干粉状态的同样适用）。抗体和重组蛋白使用特制的储存管，只有在 12000rpm 离心 3 分钟，才能将附着在管壁或盖内的抗体和重组蛋白全部离心下来（即使是在 10000rpm 离心也会离心不完全，导致出现抗体和重组蛋白的量不足的现象）。请详细阅读说明书，并按照推荐的保存条件正确保存和使用抗体和重组蛋白。 2. 抗体和重组蛋白的长期保存对于大部分抗体和重组蛋白，比较合适的保存方式是：抗体分装后保存在 -20℃，重组蛋白分装后保存在 -80℃。（1）分装可以最-大程度的降低反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体和重组蛋白造成的污染可能性。（2）分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于 10 ?l 每份。因为分装体积越小，抗体和重组蛋白的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。（3）复融后的分装抗体和重组蛋白如果一次用不完，将剩余母液保存在 4℃，避免再冻起来。（4）抗体和重组蛋白工作液应该当天配制当天用完，4℃ 保存尽量不要超过 1 天。（5）绝-对避免将抗体和重组蛋白保存在自动除霜冰箱中，将抗体和重组蛋白保存在冰箱里层，避免温度变化造成反复冻融。 3. 抗体和重组蛋白的短期保存大部分的抗体和重组蛋白收到后 4℃ 短暂保存 1~2 周，对抗体和重组蛋白活性没有影响。如果抗体和重组蛋白很快会使用（1~2 周内），推荐在 4℃ 保存，这是为了避免反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害。最关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体和重组蛋白。 4. 抗体和重组蛋白的运输条件一般的运输过程需要 1~2 周的时间，所以是在低温 4℃ 的条件下来完成的。4℃ 运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害（如果使用干冰运输，那么收到时抗体和重组蛋白是冻起来的，为了分装就需要解冻，这就多了一次冻融的过程），所以运输过程中一般避免干冰运输。 5. 抗体和重组蛋白的稳定性（1）抗体的稳定性是自然界长期进化的结果，抗体是免疫系统中最重要的分子之一，其稳定性是自然进化筛选的结果，在众多物种中，抗体分子形成了保守而稳定的结构。（2）抗体的高Tm值，在室温下，甚至短时间温度达到 50~60℃，抗体分子都能维持正确折叠，保持其应有的活性。（3）抗体和重组蛋白的纯度。采用先进的抗体和重组蛋白纯化技术，确保抗体和重组蛋白产品的高纯度，保障其抗体和重组蛋白产品的稳定性。（4）抗体和重组蛋白的浓度。高浓度的抗体和重组蛋白产品可减少容器表面吸附造成的物质损失，高浓度的抗体和重组蛋白稳定性更好。大部分抗体和重组蛋白浓度为 1mg/ml，抗体和重组蛋白纯度高，特异性好，效价更高。 6. 重组蛋白的特性重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在 -80℃ 条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。（1）原核细胞表达的重组蛋白。大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白 100?g，用 86?l 的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可完全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加 8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。查看更多

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em菌种制作方法你知道吗? EM原液的基本用法 1、直接稀释法根据使用目的，将EM原液按一定比例用水直接稀释，用于作物叶面喷施、农田浇灌、畜禽饮用、环境除臭等等（稀释比例请参照各领域应用方法）。注意：稀释用水最好是井水，如使用自来水，应放置一昼夜使氯-气散发后使用（下同）。 2、制作活性液将EM原液与等量糖蜜（可用红糖代替，下同），按10-50倍不同比例用水稀释后（糖蜜或红糖要先用热水溶化，下同），置于密封容器内厌氧发酵（环境温度20-35℃）。发酵过程中因产气而容器鼓胀，要及时放气。待PH降至3.5左右，并有醇香发酵酸味，表明发酵成功。活性液可与原液一样稀释后使用，但应在一个月内用完。 3、制作EM发酵饲料每100份固体饲料（畜禽饲料、水产饲料等）使用EM原液0.1-0.3份，加等量糖蜜或红糖，用20-30份水稀释后均匀拌入固体饲料中，装入塑料袋或容器中密封发酵（温度20℃以上），待出现酒曲醇香气味，即发酵成功。注意：水份含量掌握在一捏成团、一触即散。水份过多易腐败，过少发酵不充分。密闭保存。可应用于畜禽及水产养殖。 4、制作EM堆肥牛粪、猪粪等牲畜粪便掺入秸杆、稻壳、锯木屑等吸水材料后，按此方法可发酵制作堆肥。以牛粪为例：牛粪1000kg，秸秆粉或稻壳、木屑100kg，与牛粪混合均匀；EM原液2-3kg，糖蜜2-3kg，水20-30％（视干湿度增减水量），将EM原液与糖蜜溶于水，均匀喷洒在牛粪混合料上，边喷边翻，堆成高40CM、宽约100CM的粪堆后，覆盖上塑料膜，用草帘等适当遮光，中间适当翻堆一两次，等粪堆表面出现白色菌丝并有酒曲香味，即发酵成功。其他材料（豆粕、菜籽饼、酒糟等）亦可按此方法制作EM堆肥。 5、制作EM防虫液将EM原液、糖蜜、食醋、白酒(30°以上)、清水按1∶1∶1∶1∶10的比例备料。将EM原液与糖蜜搅匀、装入容器盖紧，发酵2-3天，产气鼓胀后，开盖放气，加入与EM原液等量的食醋与白酒，搅匀盖紧，再发酵两周左右。其间，因产气而容器鼓胀时，要及时放气并立即盖紧，到气体不再产生、能闻到酸甜酯香味时，表明发酵成功。保持密闭，置阴凉干燥处，通常可保存6个月。 EM防虫液能增强植物新陈代谢，强化叶片保护膜的角质层，防止病原菌进入，其酯成分在草食害虫体内不分解，产生生理障碍致死，对线虫等多种害虫有显着效果。但应及早使用，贵在防，虫害大面积发生时用效果甚微。使用时的标准稀释倍数为1000-500，雾状喷施，叶片正反两面都应喷到。查看更多

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固定化酶的四种方法你知道吗? A. 吸附法优点：做作条件温和、简便；成本低；载体可反复使用不足：对离子强度、pH、温度等因子敏感，故酶易损漏，且酶转载容量较小 B.共价偶联法优点：载体与酶偶联的方法多样化；固定化的酶非常稳定，损漏少不足：偶联试剂对生命组织多有一定毒性；偶联条件激烈，易引起酶失效；成本较高 C.交联法优点：可用的交联试剂多，技术简易；稳定性较高不足：交联条件较激烈，常出现扩散限制，使用有一定难度 D.包埋法优点：可进行大量的固定化；包埋膜可选用生物相容材料，并可做成任意大小；胶格包埋用胶可做成所需要的厚度与硬度不足：仅可用于低分子量的底物，不适用于柱系统，反应常受扩散限制，不是所有单体材料与溶剂都适用于各种酶酶固定化后一般稳定性增加，易从反应系统中分离，且易于控制，能反复多次使用。便于运输和贮存，有利于自动化生产，但是活性降低，使用范围减小，技术还有发展空间。固定化酶是近十余年发展起来的酶应用技术，在工业生产、化学分析和医药等方面有诱人的应用前景。优点： ①固定化酶可重复使用，使酶的使用效率提高、使用成本降低。 ②固定化酶极易与反应体系分离，简化了提纯工艺，而且产品收率高、质量好。 ③在多数情况下，酶经固定化后稳定性得到提高。 ④固定化酶的催化反应过程更易控制。 ⑤固定化酶具有一定的机械强度，可以用搅拌或装柱的方式作用于底物溶液，便于酶催化反应的连续化和自动化操作。 ⑥固定化酶与游离酶相比更适于多酶体系的使用，不仅可利用多酶体系中的协同效应使酶催化反应速率大大提高，而且还可以控制反应按一定顺序进行。缺点： ①固定化可能造成酶的部分失活，酶活力有损失。 ②酶催化微环境的改变可能导致其反应动力学发生变化。 ③固定化酶的使用成本增加，使工厂的初始投资增大、 ④固定化酶一般只适用于水溶性的小分子底物，对于大分子底物不适宜。 ⑤与完整菌体细胞相比，固定化酶不适宜于多酶反应，特别是需要辅助因子参加的反应。 ⑥胞内酶进行固定化时必须经过酶的分离纯化操作查看更多

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培养用液选择、配制和无菌分装? 一、培养用液及无菌试剂的选择哺乳动物细胞体外培养是否正常，关键的影响因素有培养用液配制用水纯度、无菌操作严格程度、培养液选择、试剂选择等方面，其中任意一种因素都可能是致命性的影响，导致不可挽回的后果。下面将简要介绍培养用液及其他无菌试剂的选择原则和注意事项。（一）液体培养基和干粉基础培养基 1．品牌选择适用于哺乳动物细胞培养的液体培养基和干粉基础培养基均需从商品供用户选择，着名的品牌如Gibco、Sigma、ATCC等。从Gibco的官方网页可查询到，他们专门为哺乳动物细胞培养、原代细胞培养、干细胞培养、昆虫细胞培养等方面提供了各种套餐式培养基产品服务，关于哺乳动物细胞培养用液的种类非常齐全。另外，为转染也提供配套使用的试剂。转染，也称细胞转化，都是指将外源基因转入感受态靶细胞的方法，转染方法包括共转染、瞬时转染、体内转染、稳定转染、电穿孔法转染、磷酸钙转染和脂质体转染等。 2．培养基型号除了选择品牌供应商外，还需特别注意所培养细胞适合的是何种培养液或干粉培养基。如常用的DMEM、RPMI1640、199、MEM等型号。 3．包装规格另外，就是选择好培养液或干粉培养基的包装规格，如Gibco的RPMI1640培养基的规格由4种搭配状态：①谷氨酞胺添加状态分为已添加GlutaMAX、已添加L-谷氨酞胺、未添加谷氨酞胺3种情形；②酚红添加状态分为是否添加2种情形；③培养基的物理形态包括固体和液体2种；④提供包括100m1/瓶、500ml/瓶、1L／瓶、5L／瓶和10L／瓶5种包装规格备选。（二）哺乳动物细胞培养试剂哺乳动物细胞培养所需的其他试剂也要从品牌、试剂级别、包装规格等要素进行采购，否则，影响培养细胞的正常生长和活性。 1．缓冲液配制用化学试荆或成品缓冲液药片一般要求AR（分析纯）级以上纯度的试剂，无机试剂从国内品牌供应商即可采购到，个别无机试剂和重要有机试剂如DMSO（二甲基亚砜）、BR（生物试剂）建议购买国际品牌供应商的产品，如Sigma品牌的产品。这些试剂都是非无菌包装的，实际使用时需要注意。但是，一般在冻存细胞时，直接取DMSO配制新鲜冻存液而不会污染微生物，因为DMSO本身是不含活的微生物的，DMSO也称万-能溶剂，微生物是不能存活的。利用购买的试剂，按照缓冲液配方配制和滤过除菌或高压蒸汽灭菌都是非常容易控制和操作的。成品缓冲液药片是日常配制常用缓冲液如PBSA,Hank's溶液的便利选择，容易保存。由于使用量偏大，容易配制，不建议直接购买无菌液体包装的缓冲液。值得注意的是，成品缓冲液药片不一定是无菌的，使用时需要注意药品包装说明。 2．细胞培养添加物细胞培养添加物包括胎牛血清、生长因子、培养液补充物、培养用抗生素等，这些添加物都是无菌包装的，存放和使用时注意严格无菌操作。有时也使用筛选后适合的小牛血清或新生牛血清替代胎牛血清，目前国内有多个品牌供应商提供胎牛血清。培养用抗生素可直接使用临床使用的产品，如可以采用8×104U/2ml/支包装的硫酸庆大霉素稀释后直接添加到培养液中。细胞培养用的生长因子，以及培养液补充物如L-谷氨酞胺、葡萄糖等，建议从信誉好的制造商产品目录中选择，如Sigma产品。二、培养用液的配制细胞培养用液的配制用水z理想的是去除热原、无核酸酶的超纯水，也可使用新鲜制备的三蒸水、亚沸水或高纯水机制备的高纯水。一般而言，当配液用水的电阻率小于5MΩ·cm时，细胞活性容易受到干扰，如出现细胞形态变异、生长分裂受阻、坏死或凋亡等状况。细胞培养用液配制过程使用的容器、搅拌子等器械，也务必使用配液用水润洗2-3次方可使用。配制溶液过程中，由于开放的烧杯口、容量瓶口、三角烧瓶口均可受到环境粉尘的影响，因此，建议使用新鲜的保鲜膜遮盖开口部分，尤其是为了充分溶解而进行长时间搅拌的过程中。建议配液全程注意，防止粉尘污染所配制的溶液。（一）干粉培养基选择及其液体培养基的配制仔细阅读干粉培养基的包装说明，如lOX1L的包装是指内含10小包，每小包配制1000m1培养液。配制时，适当添加血清以外的其他必需添加物，如抗生素、谷氨酰胺等，一并滤过分装，保存于2-8℃冰箱。严格使用配制培养液的用水，建议使用超纯水或其他新鲜制备的高纯度的纯水，如亚沸水、三蒸水、高纯水机产的高纯水等。使用于分装的玻璃试剂瓶需要提前按要求进行清洗灭菌。灭菌包装完整，保存在洁净间内。（二）常用缓冲液的配制平衡盐溶液即balancedsaltsolution，简称BSS。 1.PBSA溶液 KCl0.20g,KH2PO40.20g,MgSO4·7H2O0.98g,NaCl8.00g,Na2HPO4·7H2O2.16g,CaCl20.20g，加H2O至1000m1，过滤除菌或高压灭菌，分装后4℃保存。 2.D-PBSA溶液KCl0.20g,KH2PO40.20g,NaCl8.00g,Na2HPO4·7H2O2.20g，加H2O至1000m1，过滤除菌或高压灭菌，分装后4℃保存。 3.Hank's溶液 Na2HPO4·H2O0.06g,KH2PO40.06g,MgSO4·7H2O0.20g,葡萄糖1.00g,NaCl8.00g,KCl0.40g,NaHCO30.35g，酚红0.02g（其中，溶解NaHCO3后，将称量好的酚红一起溶解，均匀后再转移到容量瓶），CaC120.14g，加H2O至1000m1，过滤除菌或高压灭菌，分装后4℃保存。 4.D-Hank's溶液 Na2HPO4·H2O0.06g，KH2PO40.06g,NaCl8.00g,KCl0.40g,NaHCO30.35g，酚红0.02g（其中，溶解NaHCO3后，将称量好的酚红一起溶解，均匀后再转移到容量瓶），加H2O至l000ml，过滤除菌或高压灭菌，分装后4℃保存。（三）消化液（胰蛋白酶消化液）的配制精-确称取0.25g胰酶蛋白酶（活力为1，250)，加入l00ml不含Ca2+、Mg2＋的D-Hank's或D-PBDA缓冲液溶解，滤器过滤除菌，4℃保存。胰蛋白酶溶液中也可加入终浓度为0.02%EDTA。（四）冻存液的配制 9份10%BS培养液，1份DMSO。无菌条件下配制。DMSO无需滤过除菌，DMSO属于万-能溶剂，不存在微生物污染，是无菌的。但在放入超净工作台内前，需用酒精纱布擦拭外表面的粉尘。查看更多

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如何收集细胞（用于western blot等）? 问：我现在在养细胞，然后收细胞抽蛋白以及提RNA用，我想先多收点细胞冻着。想问一下怎样收集细胞，有具体的流程吗？我是这样做的： 1、将细胞消化吹打后转移至离心管离心 2、倒去上清，加1 mlPBS打匀后转移至1.5 ml EP管 3、离心12000 rpm 2 min （不知道大家这里用多少转速，有讲究吗？） 4、倒去上清，我是将EP管倒置一会，但是EP管里面还是有一些上清，我没有倒干净，请问是不是要倒干净上清啊？因为我暂时还不抽提，离心后EP管是放到-80度冰箱保存的。这个上清对抽蛋白和RNA有影响吗？答： 1、1 ml的PBS可能溶不了那么多细胞（如果你细胞多的话），所以建议用3 mlPBS，分两管装，离完心后用Trizol溶解合成一管 2、离心的速度太大了，细胞会死的，建议800 转，5 分钟，一般的细胞都可以离下来 3、需要去上清，如果是提RNA就用Trizol溶解合成一管，然后放在－80度冰箱，如果提蛋白就直接将离心后的细胞放在－80度冰箱。上清对于提蛋白和RNA没什么影响。还有一点，提RNA的东西一定要高压，如果是初次做可以用DEPC水泡枪头，可以提高作成功的几率。如果操作严格，可以只把要用的枪头和EP管高压即可。其他的没什么特别的，流程跟你写的是一样的。查看更多

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培养瓶和培养皿的区别在哪里? 培养瓶和培养皿的区别培养瓶适合长期培养、传代、作为种子细胞。不易污染。培养皿和培养板适合在各种实验中选用，临时培养。培养面积T25约为25，T75为75。6孔板、10/孔。12孔板4/孔。培养瓶和培养皿的区别在于，安全系数的高低、培养细胞数量的多少。个人感觉培养瓶的安全系数更高，操作也比较方便。培养瓶瓶可以用来做相对大规模的培养或比较容易被污染的细胞。而培养皿比较适合小规模的培养或做一些对照分析实验。查看更多

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你的细胞状态差是怎么解决的? 细胞状态很差，常常出现的现象是：细胞边缘不清晰、细胞不饱满、折光性差、背景比较脏、黑点很多、细胞碎片多（细胞凋亡后的细胞碎片）、单个细胞内有空泡（凋亡）且空泡比较多；如果细胞出现老化，也就是细胞比较扁平、增殖减缓、细胞核体积增大、细胞突触变多，此时观察到的细胞状态也是不正常的。因此细胞状态差只是对这些现象的一种笼统说法。究其根本，细胞状态变差主要是由于两种原因： 1 细胞营养条件不够 2 细胞被污染了今天我们将深入分析影响细胞状态的这些原因。营养条件不够细胞营养条件不够时，就需要从培养基方面考虑。 1. 血清由于血清来源于动物，且含有细胞培养中所需的各种营养（血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等），这奠定了血清是细胞培养实验中最-普遍的试剂的基础。市面上的牛血清产品名称虽然五花八门，但根据其不同的特性，追其根本，大致可分为以下四种。根据牛的取血年龄可以区分：胎牛血清（Foetal Bovine Serum，简称FBS）指的是取自未出生，母牛剖腹心脏穿刺采血得来的血清。国产胎牛血清（并无明确定义，但通常用此命名）指的是出生4-6小时，且未进行哺乳（unsuckled）进食的新生牛，有时还称作国产新生牛血清。新生牛血清（Newborn Calf Serum，简称NBCS，或称小牛血清）指的是出生14天-3个月进行取血的牛血清。成年牛血清（Adult Bovine Serum，简称ABS）指的是取血时牛龄通常超过12个月的牛血清。以上取血牛龄的差异主要是受当地国家畜牧业的发展及法规限制影响，因为牛血多为畜牧业副产业，并未有专门为取血而养的牛。这几种不同牛龄血清所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组分与比例不同。常规来说，牛龄越小的牛血清，细胞培养效果越好。但是也需要根据自己培养的细胞类型来选择最合适的血清。同一血清不同批号内的成分和营养组成比例会不同，因为血清来源于动物，其组成成分有1000种左右，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生-理条件和营养条件不同而异。每个批号的组分和百分比含量都是不固定的，所以批间差异是存在的。因此在实验过程中，需要经过测试来找寻合适的血清批次。当实验需要更换血清时，细胞需要有一段适应期。因此，要根据自己的细胞种类进行合适的选择。 2. 基础培养基培养细胞时，除了血清还需要添加基础培养基，混合成为完全培养基，基础培养基是成分确定且知其确切含量的，可以补充血清中缺乏的营养元素，基础培养基一般含有氨基酸、无机盐、维生素、含碳物质，蛋白和其他营养元素，每种成分对于细胞存活、代谢等功能都有不同影响，不同细胞系需要的成分含量也不同，因此市面上会存在各类培养基配方，如DMEM，RPMI-1640，M-199，MEM等，基础培养基也需要根据自己培养的细胞种类进行更合适的选择。自行配制基础培养基时，需要注意是否需另外添加营养物或必需物至培养基中（如：碳酸氢钠）并调整pH值。使用不适合的培养基培养细胞，细胞仍可生长但特性会改变。培养基中常用的酚红（pH指示剂）本身有微弱雌激素作用，会刺激具有雌激素受器的细胞生长。如果您都是按照操规范保存培养基和培养细胞，那么我们继续考虑污染情况。细胞被污染污染情况通常从以下几部分考虑。通常微生物污染也叫做外源污染，如：真菌、酵母菌、细菌、支原体、黑胶虫、病毒、细胞交叉污染等。这些污染都是有其自有特征的噢~ 1. 真菌污染这类微生物外观类似棉絮状的漂浮物，在显微镜下可观察到菌丝体，污染早期不会使培养基变黄。 2. 酵母菌污染显微镜下常见成串的珠状物形态呈卵形，大约比细胞小5~10倍，当其进行出芽生-殖时，会聚集成连体结构；爆发污染严重时，会造成培养基pH值改变，不易除去。 3. 细菌污染培养基在短时间内变成黄色或白色浑浊，细胞停止生长甚至死亡；有些状况下培养基颜色改变不明显但细胞形态会变异（出现多角，多核状况）、细胞不附着，显微镜观察背景有大量黑点。 4. 支原体污染支原体种类较多，常以寄生或腐生营养方式生长，广泛存在于环境之中，是细胞培养过程常见污染，经常来源于实验人员（支原体常见于人体皮肤、呼吸道、生-殖道和消化道）、动物源血清及胰酶、消毒不完全的器具，大小只有0.15~0.3μm，所以能通过一般标准的细胞培养过滤方法，0.22μm过滤膜。支原体增长速度相较于细菌比较缓慢，污染初期（轻微）培养基可能依然清澈不会变黄，所以轻微污染时不容易用常规方法发现（细胞外观观察或是DNA染色法）确认。支原体污染不但会缓慢改变细胞形态、增殖、基因表达、蛋白合成及代谢反应，它携带的DNA/RNA与蛋白更可能造成QPCR、Western Blot或外泌体实验结果偏差。 5. 黑胶虫污染目前科学界对黑胶虫并无定论，认为是不明沉淀现象或多种未知生物污染现象的通称。在高倍率显微镜头下，可观察到各式形状的小黑点（卵圆状、球状、杆状等）、活跃的布朗运动及明显游动现象，部分黑胶虫具有细胞毒性，可引起细胞生长迟缓或裂解凋亡。 6. 病毒污染病毒感染可能来自宿主动物细胞或病人，病毒感染及传播具有细胞专一性，在细胞培养污染物中是相对较难检测的。然而一旦细胞遭受污染后显微镜下能明显观察到细胞碎片增多、肿大、圆缩、脱落等病态变形，严重时会在单层细胞上观察到局部破损空斑。 7. 细胞交叉污染曾有文献报道统计，目前使用的细胞株大约有15~20%不是科学家们所认为的细胞，而在生物医药领域中，细胞来源和细胞株身份鉴定检测观念普遍缺乏。细胞株的交叉污染，常在不经意的实验疏失（不同细胞株分盘时，共享一瓶培养基、枪头、移液管忘记更换，而造成不同细胞株之间的混合污染，或是实验操作人员录入错误细胞株名称，继代时的培养皿，冷冻细胞时的冻存管）中发生，而造成错误后续数据搜集；目前大部分的科学期刊都已有“细胞相关实验论文发表前，均需附上细胞鉴定报告”的规定（可查阅：文章发表前要求提供细胞鉴定的杂志），以此保证数据来源的正确性。目前常用的细胞身份验证的方式包括：短串联重复序列（STR）、同功酶分析、染色体组分型、扩增片段长度多态性（AFLP）的特征分析等方法。其中STR，是目前国际细胞库（包括：ATCC、DSMZ或是JCRB）常用于细胞株身份鉴定方法。细胞老化了无论是原代细胞或是细胞株，在细胞培养过程中细胞老化现象是存在且常见的，但却容易被操作人员忽略，老化的细胞会出现特征包括：细胞增殖变慢、细胞核体积异常及多核（4-8核）、表面分泌物增多、细胞体积增大、细胞扁平、细胞质中出现空泡等现象。老化细胞不会立即死亡，但其基因表达会发生变化，如果细胞老化现象严重，建议从种子库或工作库重新复苏细胞。查看更多

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牛血清白蛋白的提取方法及用途? CAS：9048-46-8，又称第五组分，牛血清白蛋白(BSA)，是一种常用的PCR扩增增强剂和稳定剂，能够起到稳定扩增酶、降低PCR抑制物的作用，常见于核酸检测试剂中，广泛应用于生物学诸多学科及医、药学各领域。牛血清白蛋白(BSA)在动物细胞无血清培养中，起到生理和机械保护作用和载体作用。牛血清白蛋白（BSA）在生化实验中有广泛的应用，例如在western blot和制备ELISA板中的封闭试剂。牛血清白蛋白(BSA)在生化研究、遗传工程和医药研究，一般作为稳定剂被用于限制酶或者修饰酶的保存溶液和反应液中，也可用作医药保健食品、调味品。牛血清中白蛋白（BSA）的制备方法很多，包括盐析法、有机溶剂沉淀法和热激法提取等，但目前的制备方法所得的牛血清白蛋白（BSA）收率或纯度都比较低，存在脂肪酸、蛋白酶、核酸酶以及内毒素等杂质，限制了牛血清白蛋白（BSA）的进一步应用，因此，一种高纯度从牛血清中分离白蛋白的方法十分关键。专利CN105017412B公开的制备牛血清白蛋白（BSA）的方法，克服了现有技术的不足，能够从牛血中提取出高纯度、高收率的牛血清白蛋白（BSA），且不含小分子物质以及只含较低浓度的内毒素。包括以下步骤：首先向牛血清中加入生理盐水或PBS溶液将牛血清稀释；再向稀释后的牛血清中加入适量硫酸铵，2~8℃静置30min以上，离心收集上清液；第二步，向上清液中加入2~3倍体积的PBS溶液，混匀后进行疏水层析，使用PBS溶液洗脱，收集洗脱液；第三步，将洗脱液进行分子筛层析，收集不含盐和其它小分子的蛋白峰；所述层析填料为G10-G75葡聚糖；第四步，使用阴离子交换层析进一步纯化牛血清白蛋白（BSA），通过0.1~1.5M浓度氯化钠进行梯度洗脱，收集精纯的牛血清白蛋白（BSA）；最后，经过对病原微生物进行灭活、分子筛层析、超滤浓缩、过滤除菌得到纯度高于99.5%的牛血清白蛋白（BSA）。这种方法最大程度地去除血浆中的杂质，有效提高了牛血清白蛋白（BSA）的纯度，对于其在生化研究、遗传工程和医药研究的应用具有重要价值。查看更多

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怎么避免血清中发生堆积? 怎么避免血清中发生堆积按如下操作可避免堆积的发生： (1)冻住血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少堆积的发生。 (2) 若有必要做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，而且随时摇晃均匀。温度过高，时刻过久或摇晃不均匀，都会形成堆积物的增多。 (3) 勿直接由-20℃直接至37℃冻住，因温度改动太大，简单形成蛋白质凝聚而发生堆积。 (4) 血清的热灭活非常简单形成堆积物的增多，若非必要，能够无须做此步骤。 (5) 血清分装冻存时，须规矩摇晃均匀(留神勿形成气泡)，使温度与成分均一。 (6) 勿将血清置于37℃太久，不然血清会变得浑浊，一同血清中许多较不稳定的成份也会因而受到破坏，然后影响血清的质量。查看更多

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中药标准品的稀释方法你知道吗? 稀释方法：（1）中药标准品稀释液的挑选：若血清、血浆、组织匀浆样本，用试剂盒中的标准品稀释液，梯度稀释标准品。若细胞上清样本，建议用细胞培养基梯度稀释标准品。（2）耗材准备：准备8个1.5Ml离心管，写上S1-S7、空白。（3）梯度稀释：根据说明书，每管参加等体积的标准品稀释液（培养基）。罗致同体积溶解好的标准品到S1管中，吹打10次混匀，涡旋5S。从S1管中罗致同体积溶液到 S2管，吹打10次混匀，涡旋5s。同法稀释S3-S7浓度。（4）空白: 中药标准品稀释液（培养基）作为空白即零浓度。留意：梯度稀释标准品时，涡旋震动混匀后可时间短离心，让到盖子、壁上的液体到管底，再初步稀释下个浓度。查看更多

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血清反复冻融对细胞培养有害你知道吗? 实验室一次用不完的血清会采取继续冷冻的方式保存，冻融血清会对蛋白的活性有影响，如果是反复冻融的确会影响到细胞正常生长。曾有研究发现，血清冻融三次，对肿瘤标志物的浓度影响不大1，对于血浆，有报道在短时间内反复冻融三次，对总蛋白、白蛋白和免疫球蛋白含量影响不大，但作者推测对免疫球蛋白的活性有影响2。最重要的是一篇西北民族学院的文章，《反复冻融新生牛血清对促细胞生长效应的影响》，作者针对SP2/0细胞，用MEM培养基和三批新生牛血清进行培养。血清分别冻融4次至28次不等。然后绘制细胞生长曲线，根据公式t =T/A , A=log2Y/X计算细胞倍增时间（t为细胞倍增时间，Y为细胞峰值前1 d的细胞数，X为接种细胞数，T为细胞生长时间）。结果显示：选用的三批新生牛血清在反复冻融28次时，血清促细胞生长的最大增殖量变化不大，均高于1×106/mL,但是血清促细胞生长的倍增时间在反复冻融20次时延长，即血清促细胞繁殖一代所需的时间在冻融次数达到20次时显着增加。笔者观察了一下该文章的结果列表，发现在冻融20次之前，细胞倍增时间延长2-3小时不等，20次时，则延长3-4小时。可见，影响还是比较显着的。该文章的局限是针对新生牛血清，而没有对胎牛血清进行测试。国外有人对大鼠血清中的18种化学成分进行了检测，发现反复冻融3次对其中的14种成分没有显着影响，其他肌酸激酶，甘油三酯，葡萄糖，胆红素，甚至包括氯离子有一些明显变化，但其浓度变化控制在10%以内。3总而言之，如果能避免牛血清的反复冻融，及时分装，那是最理想的。如果在短时间内有几次反复冻融，也不必过于担心。但是，对于胎牛血清，还有一个问题，是反复冻融增高了血清产生沉淀或浑浊的风险。因为血清在融化时，冰块和蛋白融化的速度是不一样的，局部可能因蛋白浓度过高而产生沉淀。同时，如果血清内含有少量纤维蛋白原，那么在低温下也可以形成絮状沉淀4，等到血清再融化时，沉淀就显现出来了。所以，血清的质量也非常重要。因此对血清反复冻融对细胞是有危害的建议如果几次使用不完应尽量分装使用。查看更多

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培养基灭菌后ph发生变化的影响因素？？ 1.灭菌液体沸腾，导致酸性物质浓度变大其PH值下降； 2.蒸汽冷凝水漏到灭菌液体中，稀释灭菌液体，使其碱性变弱； 3.被灭菌液体高温/高压产生酸性物质，导致PH下降查看更多

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细胞污染怎么抢救? 有人说，养细胞像养孩子，要小心翼翼地伺候。其实不然，养细胞像养祖-宗才对。孩子仍可骂可教育，但如果你对细胞粗暴一点，他会分分钟不开心，让你难堪。也有人说，没有遭受过污染的人一定没有养过多少细胞，但遇到污染不能妥善处理的也肯定不是“老司机”。一、常见污染的分类常见的细胞污染分为以下几类：1），细菌污染：2）真菌污染：3），霉菌污染；4），支原体污染。芽孢杆菌、葡萄球菌是细菌污染的主要菌属，污染的主要特征为培养基变黄、浑浊，低倍镜下呈沙粒状布满细胞间隙或培养基，高倍镜下可见杆状或球状的细菌在培养基中游动（与细胞碎片的布朗运动明显不同），有同学戏称为“群魔乱舞”。需注意的是，在污染初期，细菌常成群存在，不一定会有明显的运动，此时需引起警惕。 1. 细菌污染常见的真菌污染是白色念珠菌污染，污染后培养基无明显浑浊和变色，镜下可见排列成串珠状的球形真菌，污染严重时可见念珠菌连成片状或团状。真菌的运动能力较弱，镜下一般看不到运动。 2. 念珠菌污染霉菌污染时培养基一般也不变浑浊，颜色变化也不明显，但肉眼可见漂浮的白色菌落，显微镜下可看到树枝状的菌丝。 3. 霉菌污染支原体在镜下无法看到，因而支原体污染时只能看到细胞状态明显变差却没有其他微生物污染的迹象，此时可通过PCR检测确定。二、细胞污染的处理应对细胞污染的最-好对策是预防！预防！再预防！养细胞要勤快，平时所用到的耗材、器皿等要及时高压灭菌，灭菌后超过一周未使用也应重新灭菌。配制的完全培养基、胰酶、PBS等最好在一周内用完。同时，也应每天查看一下细胞状态。在细胞房内应尽量少地走动，尽量少地说话，若咳嗽或喷嚏时务必背向超净台。细胞污染后最-好的处理方式是丢弃。当个别细胞十分珍贵无法丢弃时可尽力“急救”一下。那么如何急救呢？ 1，判断污染源。一旦发现细胞有污染的迹象或已污染，立即判断可能的污染源：有无操作不当？培养基、胰酶、PBS等颜色、澄清度是否正常？ 2，及时处理。若确定现有的培养基、胰酶、PBS可用，则继续使用；若无法确定则新配完全培养基、PBS、胰酶，原有的液体在确定是否污染后再做处理。现以贴壁细胞为例向大家介绍下细菌污染时如何“急救”： 1），立即弃去培养容器内的培养基，以PBS润洗2~3次，加入胰酶处理至细胞形态略有改变但未脱离容器时弃去胰酶，加入PBS轻轻润洗1遍； 2），加入20×双抗，浸泡细胞3~5min，弃去双抗； 3），加入新鲜的完全培养基（含10×双抗）培养12 h； 4），12 h弃去培养基以PBS润洗2~3遍后加入完全培养基（含10×双抗）； 5），传代时以较小转速离心（如平时以1000 r/min离心，则可降为800~900 r/min离心），仍以含10×双抗的培养基培养； 6），若第二代后镜下找不到细菌，则第三代起可正常培养。正常培养48 h后无反弹则可认为污染已清除。若为霉菌污染，在以PBS润洗2~3遍后换液，无需加入高浓度双抗。培养48 h后污染未再次出现即可。若为真菌污染，在PBS润洗、换液后可加入两性霉素B（两性霉素B有细胞毒性，不推荐使用），也可加入300μg/mL氟康唑培养，污染控制后改用150 μg/mL培养2~3代。若怀疑支原体污染，则可进行PCR检测或直接使用支原体清除试剂（如：某恒生物）。也可购买环丙沙星注射液，于超净台内打开直接添加到培养基中，以20μg/mL浓度 2代后改用10 μg/mL浓度持续培养约2周。查看更多

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确保培养基平皿的质量需注意那些事项? 当今科学技术飞速发展，有关微生物检测的高科技方法可谓如若瀚海。虽然培养皿检测微生物是一个古老的、传统的检测方法，但由于它具有可以直接分离鉴别样品、操作方便、结果可靠等优点，所以至今仍广泛应用于医药卫生，临床检验、实验动物、食品、化妆品、工农业、环保等众多领域。在药品质量控制、安全评价和疾病诊断中尤其发挥着重要的作用。培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果，而成品预装培养基平皿是培养基中的一种，是由脱水培养基完全溶解于水中，矫正PH值，然后灭菌和分装于平皿而成。无论是实验室配制的培养基平皿或商品化的成品预装培养基平皿，其质量都依赖于其制备的整个过程。采用不适宜方法制备的培养基将影响微生物的生长或复苏，从而影响试验结果的可靠性。所以要确保培养基平皿的质量，需特别注意以下事项： 1、选择适宜的培养基制备方法，不得使用结块或颜色发生改变的脱水培养基。 2、培养基灭菌应按照生产商提供的或经验证的参数进行，避免采用不适当的加热和灭菌条件，而引起培养基颜色变化、透明度降低、琼脂凝固力或pH值的改变。 3、应确定每批培养基灭菌后的pH值（冷却至室温25℃测定）。若培养基处方中未列出pH值的范围，除非经验证表明培养基的pH值允许的变化范围很宽，否则，pH值的范围不能超过规定值±0.2。 4、成品预装培养基平皿应确保无菌，并且平皿不得破裂，尽量避免形成气泡，固体培养基表面不得产生裂缝或涟漪，在冷藏温度下不得形成结晶，不得污染微生物等。 5、培养基升温灭菌过程中温度上升缓慢或灭菌后降温过慢，可能导致培养基的过热或过度灭菌，一定程度上会降低微生物培养基促生长的质量，所以成品预装培养基平皿应通过微生物促生长试验进行验证。 6、用于环境监控的培养基平皿必须特别防护，最好采用三层包装和终端灭菌。不建议采用实验室自制的培养皿通过100%预培养后用于洁净区环境采样，因为预培养过程中失水会影响微生物生长，且还存在培养皿被污染的可能。 7、贮藏和运输条件应使成品培养基最低限度的失去水分并提供机械保护、避光保存。含琼脂培养基平皿不得在0℃或0℃以下存放，冷冻可能破坏凝胶特性。培养基平皿制备过程质量控制和贮藏条件是提供优质培养基的保证。洁净区环境浮游菌、沉降菌及表面微生物监测用培养基一般采用胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA），必要时可加入适宜的中和剂；当监测结果有疑似真菌或考虑季节因素影响时，可增加沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）。查看更多

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质控样浓度怎么查询? 　　质控样，一般是用来检验你的曲线做的是否标准用的，他是一个已知浓度的样品且浓度有正负误差，比如3.240±0.012毫克/升。你将他带入你的曲线进行分析，看得出的数据是否在质控样浓度误差范围内，如果在范围内，则可以说明你的曲线没有问题，相应的其他数据也正确。而标准物质，也是一个已知浓度的样品，但是他的浓度一般是整数，比如1000微克/升，是用来配置标准曲线使用的　　在国际上标准物质和标准样品英文名称均为“Reference Materials”，由ISO/REMCO组织负责这一工作。在我国计量系统将“Reference Materials”叫为“标准物质”，而标准化系统叫为“标准样品”。实际上二者有很多相同之处，同时也有一些微小差异的。查看更多

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每个实验员都应该知道的检测知识？！？作为一名实验员，检测方法的来源是哪里？是否合规？需要确认及验证吗？客户是否认同？你有没有想过这些问题，今天一起揭秘这些问题吧。检测方法的选择 1、为减少检测风险，实验室的检测依据首-选以下正式颁布的标准：国-际标准；国家标准；行业标准或政府发布的技术规范；地方标准；企业标准；知名技术组织或科学书籍与期刊公布的方法；设备制造商指-定的方法；自行制定的非标方法 ...... 其中优先选用国家标准、行业标准、地方标准；对新旧标准处于过渡期间并均可采用的，优先选择新版标准。 2、为确保所使用的标准是现行有效的版本，资料员负责检索和收集、查新最-新标准及其他技术规范，按《文件控制程序》确保检测人员所用标准是最-新有效版本，填写《标准查新表》，并由技术负责人审核。 3、在使用外部企业标准检测时，应注意防止导致可能发生的所有权侵权问题。 4、当所用标准存在理解、操作等困难时，技术负责人应组织相关检测人员编写检测作业指导书，以保证对标准实施的一致性。检测作业指导书应形成正式的书面文件并应经过编制人、审核人和批准人的书面审批手续和保持该文件的有效性，具体按照《文件控制和维护程序》。当需要对检测作业指导书进行调整或修改时，也应当按《文件控制和维护程序》执行。作业指导书的编制内容应包括：检测方法的名称；检测方法的适用范围；用于检测的仪器设备，包括技术性能参数要求；所需的标准物质（参考物质）；被检测样品的管理要求；被测定的参数或量值及其范围；检测需要的设施环境条件；检测步骤描述；需遵守的安全设施；检测的准则和要求；需记录的数据的分析和表达的方法；如有必要时，检测结果不确定度评定的要求。 5、当客户的委托检测未指-定方法时，检测组主任应首先向客户推荐实验室认证、认可能力范围内的检测方法，当不能满足客户要求时，则应在本程序1条中推荐检测方法，所推荐的方法应获得客户的书面同意和认可。当客户指-定的方法不合适或已经过期时，检测负责人应明确通知客户。 6、当客户指-定的检测标准和要求的能力是在认证、认可的能力范围内时，则接受客户的委托检测无须对实验室的能力与客户的要求再进行合同评审，但需按照《要求、标书和合同评审程序》将客户要求明确写入合同当中。非标准方法的制定对特定委托方要求的检测，可采用自行制定的非标方法，该方法应按本程序3条进行确认，并将验证和确认后的方法通知客户，征求客户的同意后方可采用。实验室原则上不采用非标准方法，均采用标准方法。检测方法的确认 1、对于选用新版标准、规程等技术规范开展的检测，技术负责人在审批检测实施方案时应将新旧技术规范的技术要求、检验条件和过程进行对比，对开展检测的能力进行确认。 2、技术负责人组织实施对超出预期范围使用的标准方法、扩充和修改过的标准方法的确认，在获得充分可靠的、满足要求的结论后才能投入使用。 3、确认应当包括详细说明有关要求（被确认的方法应满足某一些具体预期用途的特定要求，其中包括满足客户的要求）；确定检测方法的特性；核查使用该方法能否满足有关要求；核查有效性声明等。 4、方法的确认应广泛全面，以满足预定用途或应用领域的需要。方法确认人员应当记录确认所获得的结果、使用确认的程序、确认对方法是否适合于预期用途的声明、需要时确认活动应包含对物品准备和物品的运输储存等领域。 5、方法的确认应使用以下五种方法中的一种，或是其中几种方法的组合：使用参考标准或标准物质进行校准；与其他方法所得的结果进行比较；与其他检测实验室进行比较；对影响结果的因素作系统性的评审；方法的理论原理和实践经验科学理解，对所得结果不确定度进行评估。 6、方法的确认应当依据客户要求按照预期用途来进行评价，并将确认方法过程所得到测量值的范围和准确度与客户预期的要求进行比较。这些测得值应包括以下诸值：测量结果的不确定度：检出限；方法的选择性；线性；重复性限；复现性限；抵抗外来影响的稳健性；抵杭来自样品的基体干扰的交互灵敏度。检测标准方法的变更和偏离检测方法的偏离只有在其已被文件规定、经技术判断、授权和客户接受的情况下才允许发生，具体实施按照《允许方法偏离控制程序》执行。检测标准的收集与保存 1、检测组主任负责组织相关人员收集检测标准，收集到的检测标准由技术负责人审批后由资料员登记、编号、存档控制使用。 2、资料员于每一个季度对标准进行查新确认，以保证检测的有效性。 3、如新标准较旧标准对检测资源配置和技术要求有较大的变化时，技术负责人应对新标准开展宣贯，对实验室执行新标准的能力开展评审。检测方法的确认流程 1、检测组主任根据客户咨询的检测要求制定检测方案，并填写《检测方案》，答复客户。当客户咨询的检测条件为常规要求时，可以不给出具体的检测方案，直接由业务员答复客户是否可以执行检测；当客户咨询的检测条件涉及非标方法时，则需要由检测组主任组织相关领域的资深技术人员对其进行评审确认，并填写《非标准方法确认评审表》。 2、客户在明确检测需求后填写具体的《检测委托单》，检测组主任根据实际情况将《检测委托单》及《检测方案》一同交给指-定工程师执行检测工作。（较为简单、常规的检测项目可以不用给出具体的检测方案）。查看更多

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药品试剂的管理，总结了12个问题？！？药品试剂的管理问题1：药品试剂采购申请应明确哪些内容？解析：药品试剂的官方名称（如氯化钠，还可提供CAS号）、规格（如500g）、型号（如分析纯）、数量、需用日期，用途。问题2：药品试剂应验收哪些内容？解析：外观验收：标签信息是否与采购申请一致、是否有破损或污染；数量验收；技术验收。问题3：药品试剂如何做技术验收？解析：《实验室药品试剂应该验收哪些内容，如何进行技术验收？》问题4：药品试剂的管理员应接受过哪些培训？是否需要监督？解析：实验室管理制度、质量管理体系、相关的安全、相关记录的填写方法等。需要监督，可采取现场监督、提问、检查记录等方式，重点监督管制化学品的相关操作和记录。可安排每年1次。问题5：药品试剂属于设备，如何进行唯1性标识？解析：一般药品试剂、配制的溶液不进行唯1性编号，使用需记录批次号。目前评审没要求对药品试剂进行唯1性编号，实验室可尝试进行。不确定以后会不会有要求。问题6：药品试剂台账可包含哪些内容？解析：类别、药品试剂名称、CAS号、规格、型号、生产厂家、存放位置、月初数量、使用数量、购入数量、月末数量、库存下限、注意事项等。问题7：药品试剂如何进行核查，多久核查一次合适？解析：核查药品试剂的外观是否正常、存放环境是否适宜、放置位置是否正确、是否有过期的、核对库存量是否与台账一致、库存量达到最-低警戒限的通知相关人员申请采购。一般一个月核查一次即可。问题8：如何确定药品试剂的有效期？解析： 1-大部分药品试剂（没稀释的）没有规定保质期，若有规定，按规定执行。 2-部分化学试剂有指标要求，虽未规定有效期或规定了有效期，有条件的情况下，最-好在使用前检查。（如检测水质石油类用的四氯乙烯） 3-实验室可根据化学性质、保存条件，再结合工作的实际情况判断试剂是否出现变质、能否继续使用。 3.1化学试剂的性质对有效期的影响化学试剂一般没有注明保质期，确定试剂是否变质主要是凭经验和做新旧试剂对比试验。化学试剂的有效期随着化学品的化学性质的改变，有着很大的区别。一般情况下，化学性质稳定的物质，保存有效期就越长，保存条件也简单。一般遵循以下几个原则（不是绝对原则）：无机化合物，只要妥善保管，包装完好无损，理论上可以长期使用。但是容易氧化的应将其固体或晶体密封保存，不宜长期存放，水溶液要密封存放；固体如钾、钠、白磷更要采用液封形式。容易潮解的物质，在避光、阴凉、干燥的条件下，只能短时间（1～5年）内保存，具体要看包装和储存条件是否符合规定。小分子量有机化合物一般挥发性较强，包装的密闭性要好，可以长时间保存（3～5 年）。但容易氧化、受热分解、容易聚合、光敏性物质等，在避光、阴凉、干燥的条件下，只能短时间（1～5 年）内保存，具体要看包装和储存条件是否符合规定。有机高分子，尤其是油脂、多糖、蛋白、酶、多肽等生命材料，极易受到微生物、温度、光照的影响，而失去活性，或变质腐-败，故此，要冷藏（冻）保存，而且时间也较短。基准物质、标准物质和高纯物质，原则上要严格按照保存规定来保存，确保包装完好无损，避免受到化学环境的影响，而且保存时间不宜过长。一般情况下，基准物质必须在有效期内使用。在常温（15?C~25?C）下保存时间一般不超过 2个月。超过两个月要重新标定或检查之后再用。培养基：按规定配制并消毒好培养基，冷至室温，保存在阴暗处（尽可能贮藏在冰箱内），配制好的培养基应在1个月内用完。除另有规定外、试液、缓冲液、指示剂（液）的有效期均为半年。液相用的流动相、二级水有效期为15 天。一级水应现用现制。除另有规定外，液体试剂一般开启后一年内有效，固体试剂一般开启后三年内有效。时间较久的试剂，使用前应核查。 3.2化学试剂保存环境对有效期的影响 1.空气的影响：空气中的氧易使还原性试剂氧化而破坏。强碱性试剂易吸收二氧化碳而变成碳酸盐，水分可以使某些试剂潮解、结块；纤维、灰尘能使某些试剂还原、变色等。 2.温度的影响：试剂变质的速度与温度有关。夏季高温会加快不稳定试剂的分解；冬季严寒则促使甲醛聚合而沉淀变质。 3.光的影响：日光中的紫外线能加速某些试剂的化学反应而使其变质（例如银盐、汞盐、溴和碘的钾、钠、铵盐和某些酚类试剂）。 4.杂质的影响。不稳定试剂的纯净与否、对其变质情况的影响不容忽视。例如纯净的溴-化汞实际上不受光的影响，而含有微量溴化亚汞或有机物杂质的溴-化汞遇光易变黑。 5. 贮存期的影响。不稳定试剂在长期贮存后可能发生歧化聚合，分解或沉淀等变化。在贮存期和有效期内液体如发现有分层、浑浊、变色、发霉等异常现象，流动相用于样品检测时，样品的保留时间或相对保留时间发生明显变化，固体如发现吸潮、变色等异常现象则应停止使用。化学试剂的使用要求对有效期的影响依据使用的要求对化学试剂的有效期做出判断，最重要的一点是判断试剂对结果是否有影响，有影响需要缩短有效期，甚至是报废。问题9：易制-毒易制爆化学品的注意事项有哪些？解析：按相关标准和文件的要求进行管理。如：应向相关部门备案，双人双锁管理，配备监控摄像，配备防爆柜、防爆灯、防盗门（注意级别）、保险柜，监控储存环境，限制最大库存量，定时巡检，定期核查，所有可能接触到的人员参加管理制度培训、相关安全培训和演练。问题10：药品试剂涉及哪些记录？解析：采购申请、采购记录、验收记录、台账清单、核查记录、领用/使用记录、试剂配制记录、倾倒记录（过期或报废后）、环境监控记录等。问题11：药品试剂存放有哪些注意事项？解析：按要求进行室温、低温、避光等密封存放。按类别分区存放。需监控存放环境条件。试剂架或试剂柜应平稳，最-好钉在墙上，防震。应有防倒和防泄漏措施，如使用挡板和托盘（试剂倒下破碎后不会流的到出都是）。问题12：药品试剂室，门外需张贴哪些东西？解析：房间名称，如：试剂室、药品室、药品仓库等；平面布局图：标明灭火器位置、种类和数量、药品柜布局及放置的药品类别；药品试剂台账；化学品说明书，尤其是危险化学品的和管制药品的，必须有；紧急联-系人及联-系方式；其他标识：危险标识（易制-毒的，易制爆的，易燃的，剧-毒的）、如无关人员禁止入内等。查看更多

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简介

职业：上海古朵生物科技有限公司 - 销售经理

学校： -

地区：上海市

个人简介：上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量”的方针。查看更多

企业简介

企业名称：上海古朵生物科技有限公司

企业性质：贸易商,代理商,

主营业务：质粒载体定制，ELISA检测试剂盒，细胞培养，抗体抗原，蛋白纯化，染色液溶液，标准品对照品,微生物培...

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