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实验室玻璃仪器如何校准? 1、容量瓶的校正将被校正的容量瓶洗净干燥，取烧杯盛放校正用水，水及容量瓶同放于天平室中20分钟，记下水温，先称空容量瓶重，然后加水至刻度，注意不可有水珠留在刻度线以上，否则应用滤纸条吸干，塞上瓶塞，再称定重量。然后用实验温度时1mL水的重量除水重，即得容量瓶容积的毫升数。各容量瓶的实际体积可用氢氟酸直接刻于适当位置，也可将容量瓶编号后，记录于专用的记录本上备用。 2、移液管的校正取一干燥锥形瓶，精称，然后取内壁已洗净的移液管，按移液管的使用方法，吸取水至刻度，将水入已称定重量之锥形瓶中，精称，记下水温，以用实验温度时1mL水的重量除水重，即得该移液管的容积。各容量瓶的实际体积可用氢氟酸直接刻于适当位置，也可将容量瓶编号后，记录于专用的记录本上备用。 3、注射器、量筒、滴定管、刻度吸管的校正取干燥的50ml锥形瓶，称定重量，然后将被校正的注射器、量筒、滴定管、刻度吸管装入水至刻度零处，记下水的温度，从注射器、量筒、滴定管、刻度吸管中放下一定体积的水至锥形瓶中（根据滴定管大小及管径均匀情况，每次可放1、2、3、5或10mL），精密读取读数至小数第二位，称定锥形瓶中水的重量，然后再放一定体积再称重，如此一段一段的校正，然后用水在试验温度时的重量除放出水的重量，即得到真实容积。结果可以列成表已备后用。较正实验每段必须重复两次，每次校正值的误差应小于0.02g。校正时必须控制滴定管的流速，使每秒钟流下3～4滴（30秒钟5mL），读数必须准确。 4、校正容器时注意事项 4.1所用水至少须在室内放置一小时以上。 4.2待校正的仪器，应仔细洗净（常用清洁液洗涤），洗至内壁应完全不挂水珠。滴定管和移液管不必干燥，容量瓶必须干燥后才能校正。 4.3校正时所用小锥形瓶，必须干净，瓶外须干燥。 4.4在开始放水前，滴定管或移液管jian端与外面的水必须除去。 4.5如温室有变化，须在每次放下水时，记录水的温度。 4.6一般每个仪器应校正二次，即做平行试验。 4.7称量水重所用天平的精密度应达到所称水重有五位有效数字的程度。例如校正500mL的容量瓶，可用能称准至10mg的天平。校正50mL的滴定管，则应用称准至1mg的分析天平。查看更多

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蛋白柱日常维护和常见问题你知道吗? 分离时选择了合适的蛋白柱，有时往往不能成功地完成蛋白的分离，同一根蛋白分离柱在不同的使用者手中可能会有不同的柱寿命及分离效果，正确的使用蛋白柱和正确的日常维护是保证成功分离蛋白及延长柱寿命的关键。不论使用什么类型的蛋白柱，首先必须对其填料的性能有基本了解。如该柱适用什么样的溶剂，什么类型的样品，流速及耐压范围等，GAT提供的各种类型的蛋白柱，在柱箱内均有详细的说明书，使用柱子前，务必要仔细阅读，以保证正确使用这些柱子。下面就蛋白分离中常出现的问题进行讨论。 ①样品不保留：在用离子交换柱分离蛋白时，流动相的pH值对保留值影响很大，当选用阴离子型蛋白分析柱时，如#####若流动相的pH值小于蛋白的pI值时，蛋白分子阳离子状态，则在柱上没有保留，只有当流动相的pH值大于蛋白的pI值时，蛋白分子呈阴离子，才能在阴离子交换柱上得到保留。另外，当流动相或样品中的离子强度过大时，也会造成蛋白在离子交换柱上不保留。此外，上样量过大，亦会使蛋白样品保留变弱，一般样品的上样量不应超过该填料结合蛋白量的20%，在选用GPC柱时，应特别注意填料的孔径及相应的可分离蛋白的分子量范围，若蛋白的分子量超过填料的孔径极限则蛋白样品也不保留。在用反相色谱分离蛋白时，流动相中有机溶剂的比例会影响蛋白的保留值。有机溶剂比例过高，会使蛋白的样品与填料的作用变弱而过早地洗脱。流动相中的三氟乙酸可作为离子对试剂和 pH调节剂，有利于蛋白的保留。 ②回收率（质量回收率）低蛋白质量回收率低往往发生在使用凝胶过滤柱时，特别是以硅胶为基质的凝胶蛋白分析柱时，尽管硅醇基已经过双醇封口，但残留的硅醇基仍会与蛋白的碱性基团发生非GFC效应，造成回收率低，分离度差等现象,解决这一现象的方法是在流动相（通常是水）中加入0M-0.3M盐作为改性剂以减少这种非GFC效应。 ③柱压过高柱压过高的原因在于柱入口的堵塞及填料间的缝隙的减小或堵死，这些原因有：非硅胶填料的颗粒膨胀（主要是由于使用过高比例有机溶剂引起）；来自样品，流动相的颗粒堵塞、细菌生长，流速过高等，为防止柱压过高，应使用符合要求的流动相组成。样品，流动相使用前严格过滤。为了保存时防止细菌生长。以硅胶为基质的柱子可使用20%有机水溶液保存。其它柱子在保存液中加入0。02%的叠氨钠。 ④性能改变蛋白柱在使用一段时间后，其性能会有所改变（保留值变化，柱效下降等）。原因之一是被分离样品中细胞碎片，类脂，酸等的污染，对聚合物基质的柱子可用0.1-1.0N NaOH溶液清洗，注意以硅胶为基质的柱子（如Protein Pak凝胶柱）不能用NaOH清洗。查看更多

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培养液出现浑浊是什么原因? 培养基变浑浊的原因可能有如下几点： 1、细胞存在污染，污染早期可以见到细胞生长； 2、不排除传代时细胞密度过大，或者操作不当导致多数细胞不贴壁，大量细胞漂浮。 3、细胞破碎。细胞培养中常见的生物污染类型有7种,分别是细菌污染、支原体污染、原虫污染、黑胶虫污染、真菌污染、病毒污染以及非细胞污染.他们在细胞培养中污染的特点如下： 1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显. 2、支原体：黑色的,好象多为多形,培养液一般培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中最常见的微生物之一.而且它不能用过滤的办法除去.支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去. 3、黑胶虫：可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的.常常是细胞生长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象.对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理. 4、真菌：一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物.真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了. 5、原虫：培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮.他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养.这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,最终形成恶性循环. 6.病毒：组织细胞培养过程中,如果没有除去潜在的病毒,就会产生病毒污染.目前,从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒.尽管病毒污染的细胞不影响原代培养,但生产疫苗是不安全的.因此,潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题。 7、非同种细胞污染：即是细胞交叉污染,由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开,往往会使一种细胞被另一种细胞污染.目前,世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染,致使许多实验宣告无效.非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生,大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致. 查看更多

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试剂空白和样本空白的区别? 生化检验中的各种空白的概念：对所谓“试剂空白”“样本空白”“水空白”“杯空白”等“空白”名词，有些同行可能感到困惑。特此汇集了一下各种言论并结合自己的理解，总结如下，希望大家指正和补充： 1、试剂空白：由于生化测试测量的吸光度为相对吸光度，所以从理论上说，所有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光度扣除。试剂本身的吸光度就是试剂空白。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量，把样本换成蒸馏水来测量。在传统手工方法中，每次测定都要做至少三个管：测定管、标准管、空白管。其中空白管是试剂加蒸馏水，测出来也就是试剂空白。因为操作环境、仪器状态、试剂稳定性等变异，所以要求每次都要测定试剂空白，称为实时试剂空白。在全自动分析仪上，大体上是模拟手工操作。但许多全自动分析仪为追求速度，在设计上采用一些折中方法来测定试剂空白。以日立全系列生化仪为例。该系列分析仪是做不了实时试剂空白，因为它们全是先加入样本后加试剂，为了折中，只好在定标时做一个试剂空白，保存起来，需要扣除试剂空白时再减这个预先保存的值。这种做法，对于比较稳定的试剂来讲，对结果影响不大。通俗的讲，日立的仪器工作流程中首先是将标本加入到比色杯中，然后依次加入R1试剂、R2试剂，所以试剂空白在每个测定项目曲线中是无法看到的。但是7170从CALIBRATION中是可以看到的，S1ABS就是代表试剂空白吸光度，在CALIBRATION画面里的下方找到ReactionMonitor（反应监察），其中STD（1）就是代表试剂空白反应曲线。为了减小误差，日立仪器会连续做两次测定，所以你看到FIRST和SECOND两条，计算时是取他们的平均值。做试剂空白目的之一就是观察试剂是否稳定，积极采取措施纠正。对于日立的这种试剂空白测定很多仪器都采用这种方法，也叫做试剂空白校准。总的说来，自动生化仪上的试剂空白一般表现为零点吸光度，该吸光度是通过校准确立的。 2、样本空白：由于溶血、脂血、黄疸等情况，会导致样本本身的吸光度对测试结果造成影响。所以对样本本身吸光度的测量，即样本空白，可以去除这方面的影响。测量方法是按照正常测试的试剂和样本量，把试剂换成蒸馏水或生理盐水来进行测量。自动生化仪上，很难界定样本空白。与消除样本空白有关的大约有如下几点： a）在双试剂测定时，加入试剂1和样品后的吸光度可一定程度上扣除样本空白，所以有单试剂不能扣除样本空白的说法。 b）现在优质的试剂的抗干扰能力都比较强，比如有些双试剂，R1加入后先和样本孵育一段时间，将血红蛋白、脂肪、胆红素等反应掉，再加入R2开始测定反应。在一定范围内都可以消除样本空白。 c）现代全自动生化仪大多采用双波长测定。双波长测定的原则是根据干扰组分和待测物质吸收光谱的峰形特征，选择两个波长和，使干扰组分在这两个波长处的吸光系数相等，而使待测物质在两波长处的吸光系数有显着差别。以两波长分别测定分析溶液的吸光度，以两个吸光度值之差（△A）计算。这也可以扣除一部分样本空白。 d）有些仪器，例如日立系列，有专门的“血清信息”功能的设置。做法都是单独占用一个空白通道来计算，这也叫做样品空白校准。 3、水空白：比色杯在加入水以后的吸光度。水空白的意义主要是对光路系统进行检查和校正，如光源，比色杯等，同时在计算中起到消除“杯差”的作用。日立7060中的CellBlank（杯空白）测定的就是水空白。查看更多

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工艺技术

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悬浮细胞不易转染怎么办? 悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染，其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂，脂质体转染是基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周围，然后通过细胞的内吞作用，将目的基因导入细胞内，而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞高出很多倍，所以，脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。其次，脂质体试剂的毒性较大，这就使得悬浮细胞的转染更为困难了。另外，悬浮细胞不易培养，易死亡，也给细胞转染造成了一定的困难。为了提高悬浮细胞的转染效率，可以使用非脂质体的转染试剂，如engreen的Entranster试剂，纳米材料的。也可以使用电转染方法，针对悬浮细胞等难转染细胞还是挺不错的，电击对细胞有一定的损伤，最好选用具有细胞膜修复功能的电转染试剂，可以将电击对细胞的伤害降到最低，如Entranster-E。悬浮细胞不易转染，选对试剂及良好的细胞培养环境才是关键。查看更多

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PCR实验室和P2实验室的区别是什么? PCR实验室指的是基因扩增实验室，而P2实验室是指生物安全实验室中的一个分类，是生物安全防护达到二级的实验室。那么PCR实验室和P2实验室的装修标准是什么？一、PCR实验室装修标准（PCR实验室建设所需资料）基因扩增实验室装修设计是一个考验专业性的设计装修项目（PCR实验室规划设计）。基因扩增实验室的设计通常有四大分区：试剂储存和准备区、标本制备区、核算扩增区、产物分析区。这四个分区原本就不需要连接在一起，且在物理空间上必须是完全独立的，各区域无论在空间上还是在使用中，应处于完全的分隔状态，不能有空气的直接相通。基因扩增实验室功能区的压力控制： 1.压力梯度最好在10Pa及以上 2.两种控制方式：系统控制和排风功率变化。二、P2实验室装修标准（实验室装修设计） P2实验室是指生物安全防护达到二级的实验室。对于生物二级实验室装修设计，要把实验室分为3大区域，即：洁净区、操作区、无菌区。洁净区 P2实验室的洁净区通常由4部分组成，即：办公室、休息室、培养基配制室、试剂储藏室。注意，在洁净区内禁止带入细菌检验标本。查看更多

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微生物

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细菌内毒素检查法你了解吗? 细菌内毒素检查法是判断供试品中细菌内毒素是否符合规定。内毒素(Endotoxin)即革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖，其毒性成分为类脂A。菌体死亡崩解后释放出来。细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。热原主要是细菌释放的一种内毒素，热原进入机体血液循环系统会引起发热等一系列不良反应，因此，注射剂热原或细菌内毒素检查是保证注射剂安全性的重要质量指标。异常结果：临床上在进行静脉滴注大量输液时，由于药液中含有热原，病人在0.5-1h内出现冷颤、高热、出汗、昏晕、呕吐等症状，高热时体温可达40℃，严重者甚至可休克。在细菌内毒素检查方法的建立中，计算内毒素限值L、MVD和MVC时，需要注意最大人用剂量、产品规格、鲎试剂的灵敏度等重要的参数，因为计算错误会导致后续的所有努力均告失败。常见的问题有： (1)临床用药剂量确定不正确，仅用常规用药剂量，未考虑临床可能的人体最大用药剂量和给药途径，在限值计算公式L=K/M中，由于对K值及M值的定义模糊，使K值及M值赋值不准确，最终导致限值计算错误。例如，某注射剂临床成人每次静脉滴注给药40-80mg，婴儿(三个月以上)静脉滴注给药每次10-20mg。按成人(体重60kg)剂量计算限值为3.75EU/mg，而婴儿体重仅为5kg左右，计算限值约为1.25EU/mg，如果不考虑临床每公斤体重最大用药剂量，细菌内毒素限值就会出现较大的差别。 (2)有的申报品种细菌内毒素限值不是根据临床用量计算出来，而是根据同品种热原检查的剂量推算出来的，造成限值错误。 (3)有的品种细菌内毒素限值从国外药典抄来，没有考虑该品种国内上市的临床使用剂量及中国人与国外人均体重等的差异，也造成限值确定不正确。 (4)错误的计算日给药剂量(一日内多次给药)。 (5)在品种规格(浓度)发生变化时，计算MVD没有进行调整。 (6)建立方法时所用的最大给药剂量已经超出了临床所用剂量等。查看更多

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PCR污染与对策，科研人了解一下? PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生. 污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染. (二)PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染. (三)PCR扩增产物污染.这是PCR反应中最主要最常见的污染问题.因为PCR产物拷贝量大(一般为1013拷贝/ml)，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可造成假阳就可形成假阳性. 还有一种容易忽视，最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染；在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染.据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题. (四)实验室中克隆质粒的污染:在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室，这个问题也比较常见.因为克隆质粒在单位容积内含量相当高，另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂，而且在活细胞内的质粒，由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力.其污染可能性也很大. 污染的监测一个好的实验室，要时刻注意污染的监测，考虑有无污染是什么原因造成的污染，以便采取措施，防止和消除污染. 对照试验 1.阳性对照:在建立PCR反应实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照，它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志.阳性对照要选择扩增度中等、重复性好，经各种鉴定是该产物的标本，如以重组质粒为阳性对照，其含量宜低不宜高(100个拷贝以下).但阳性对照尤其是重组质粒及高浓度阳性标本，其对检测或扩增样品污染的可能性很大.因而当某一PCR试剂经自己使用稳定，检验人员心中有数时，在以后的实验中可免设阳性对照. 2.阴性对照:每次PCR实验务必做阴性对照.它包括①标本对照:被检的标本是血清就用鉴定后的正常血清作对照;被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞作对照.②试剂对照:在PCR试剂中不加模板DNA或RNA，进行PCR扩增，以监测试剂是否污染. 3.重复性试验 4.选择不同区域的引物进行PCR扩增防止污染的方法一．污染的预防进行PCR操作时，操作人员应该严格遵守一些操作规程，最大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。（一）划分操作区：目前，普通PCR尚不能做到单人单管，实现完全闭管操作，但无论是否能够达到单人单管，均要求实验操作在三个不同的区域内进行，PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行： 1. 标本处理区，包括扩增摸板的制备； 2. PCR扩增区，包括反应液的配制和PCR扩增； 3. 产物分析区，凝胶电泳分析，产物拍照及重组克隆的制备。各工作区要有一定的隔离，操作器材专用，要有一定的方向性。如：标本制备→PCR扩增→产物分析→产物处理。切记：产物分析区的产物及器材不要拿到其他两个工作区。（二）分装试剂：PCR扩增所需要的试剂均应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作台配制和分装。所有的加样器和吸头需固定放于其中，不能用来吸取扩增后的DNA和其他来源的DNA： 1． PCR用水应为高压的双蒸水； 2．引物和dNTP用高压的双蒸水在无PCR扩增产物区配制； 3．引物和dNTP应分装储存，分装时应标明时间，以备发生污染时查找原因。 (三) 实验操作注意事项尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因之一。因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意： 1. 戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套； 2. 使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染； 3. 避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面； 4. 操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的精确度； 5. 最后加入反应模板，加入后盖紧反应管； 6. 操作时设立阴阳性对照和空白对照，即可验证PCR反应的可靠性，又可以协助判断扩增系统的可信性； 7. 尽可能用可替换或可高压处理的加样器，由于加样器最容易受产物气溶胶或标本DNA的污染，最好使用可替换或高压处理的加样器。如没有这种特殊的加样器，至少PCR操作过程中加样器应该专用，不能交叉使用，尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区； 8. 重复实验，验证结果，慎下结论。二．追踪污染源如果不慎发生污染情况，应从下面几条出发，逐一分析，排除污染。（一）设立阴阳性对照：有利于监测反应体系各成分的污染情况。选择阳性对照时，应选择扩增弱，且重复性好的样品，因强阳性对照可产生大量不必要的扩增序列，反而可能成为潜在的污染源。如果以含靶序列的重组质粒为对照，100个拷贝之内的靶序列就足以产生阳性扩增。阴性对照的选择亦要慎重，因为PCR敏感性极高，可以从其它方法（Sourthern 印迹或点杂交等）检测阴性的标本中检测出极微量的靶分子。此外，每次扩增均应包括PCR体系中各试剂的时机对照，即包括PCR反应所需的全部成分，而不加模板DNA，这对监测试剂中PCR产物残留污染是非常有益的。如果扩增结果中试剂对照为阳性结果，就是某一种或数种试剂被污染了。此时，要全部更换一批新的试剂进行扩增，扩增时设立不同的反应管，每一管含有一种被检测试剂，在检出污染试剂后，应马上处理。（二）环境污染：在排除试剂污染的可能性外，更换试剂后，若不久又发现试剂被污染了，如果预防措施比较严密，则考虑可能为环境污染。环境污染中常见的污染源主要有： 1. 模板提取时真空抽干装置； 2. 凝胶电泳加样器； 3. 电泳装置； 4. 紫外分析仪； 5. 切胶用刀或手术刀片； 6. 离心机； 7. 冰箱门把手，冷冻架，门把手或实验台面等；此时可用擦拭实验来查找可疑污染源。1）用无菌水浸泡过的灭菌棉签擦拭可疑污染源；2）0.1ml去离子水浸泡；3）取5ml做PCR实验；4）电泳检测结果。 8. 气溶胶。如果经过上述追踪实验，仍不能查找到确切污染源，则污染可能是由空气中PCR产物的气溶胶造成的，此时就应该更换实验场所，若条件不允许，则重新设计新的引物（与原引物无相关性）。三．污染处理（一）环境污染 1. 稀酸处理法：对可疑器具用1mol/L盐酸擦拭或浸泡，使残余DNA脱嘌呤； 2. 紫外照射（UV）法：紫外波长（nm）一般选择254/300nm，照射30min即可。需要注意的是，选择UV作为消除残留PCR产物污染时，要考虑PCR产物的长度与产物序列中碱基的分布，UV照射仅对500bp以上长片段有效，对短片段效果不大。UV照射时，PCR产物中嘧啶碱基会形成二聚体，这些二聚体可使延伸终止，但并不是DNA链中所有嘧啶均能形成二聚体，且UV照射还可使二聚体断裂。形成二聚体的程度取决于UV波长，嘧啶二聚体的类型及与二聚体位点相邻核苷酸的序列。在受照射的长DNA链上，形成二聚体缺陷的数量少于0.065/碱基，其他非二聚体的光照损伤（如环丁烷型嘧啶复合体，胸腺嘧啶乙二醇，DNA链间与链内的交联和DNA断裂等）均可终止Taq DNA聚合酶的延伸。这些位点的数量与二聚体位点相当。如果这些位点（0.13/碱基）在DNA分子上随机分布，一个500bp片段的DNA分子链上将有32处损伤位点，那么，105个这样的分子中每个分子中会至少有一处损伤。相反，如果100bp的片段，每条链上仅有6处损伤，105个拷贝分子中将有许多分子没有任何损伤。这就是UV照射有一定的片段长度限制的原因。（二）反应液污染可采用下列方法之一处理： 1. DNase I法：PCR混合液（未加模板和Taq聚合酶）加入0.5U DNase I，室温反应30 min后加热灭活，然后加入模板和Taq聚合酶进行正常PCR扩增。该方法的优点是不需要知道污染DNA的序列； 2. 内切酶法：选择识别4个碱基的内切酶（如Msp I和Taq I等），可同时选择几种，以克服用一种酶只能识别特定序列的缺陷，室温作用1h 后加热灭活进行PCR； 3. 紫外照射法：未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液进行紫外照射，注意事项与方法同上述UV照射法； 4. g射线辐射法：1.5kGy的辐射可完全破坏0.1ng基因组DNA，2.0 kGy可破坏104拷贝的质粒分子，4.0 kGy仍不影响PCR，但高于此限度会使PCR扩增效率下降。引物可受照射而不影响PCR，g射线是通过水的离子化产生自由基来破坏DNA的。（三）尿嘧啶糖苷酶（UNG）法由于UV照射的去污染作用对500bp以下的片段效果不好，而临床用于检测的PCR扩增片段通常为300bp左右，因此UNG的预防作用日益受到重视和肯定。 1. 原理：在PCR产物或引物中用dU 代替dT。这种dU化的PCR产物与UNG一起孵育，因UDG可裂解尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架间的N-糖基键，可除去dU而阻止TaqDNA聚合酶的延伸，从而失去被再扩增的能力。UNG对不含dU的模板无任何影响。UNG可从单或双链DNA中消除尿嘧啶，而对RNA中的尿嘧啶和单一尿嘧啶分子则无任何作用。查看更多

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细胞凋亡与坏死有什么区别? 虽然凋亡与坏死的最终结果极为相似，但它们的过程与表现却有很大差别。坏死：坏死是细胞受到强烈理化或生物因素作用引起细胞无序变化的死亡过程。表现为细胞胀大，胞膜破裂，细胞内容物外溢，核变化较慢，DNA降解不充分，引起局部严重的炎症反应。凋亡是细胞对环境的生理性病理性刺激信号，环境条件的变化或缓和性损伤产生的应答有序变化的死亡过程。其细胞及组织的变化与坏死有明显的不同。查看更多

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阻断ELISA与液相阻断ELISA有什么区别? 一、本质不同：间接的酶标抗体是二抗，与待检抗体结合；阻断酶标抗体是一抗，与抗原结合。间接中底物降解的量与抗体量相等，阻断底物降解量与抗体。二、实验结果不同：酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术，其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除，常用的ELISA法有双抗体夹心法和间接法。 OD值不同是因为前后样液的浓度不同，所以透光率也不一样，但是前后的OD值都是表示同一种物质在不同浓度时的OD值，只是相对在0.2-0.8范围内比较精确而已。三、用途不同： ELISA更为简便实用和标准化,从而使其成为最广泛应用的检测方法之一，目前ELISA方法已被广泛应用于多种细菌和病毒等疾病的诊断，在动物检疫方面，ELISA在猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪狂犬病、蓝舌病等的诊断中已为广泛采用的标准方法。用于标记的酶用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性：有高度的活性和敏感性；在室温下稳定；反应产物易于显现；能商品化生产。目前应用较多的有辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP应用最广。查看更多

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影响质粒提取的主要因素是什么? 影响质粒提取的因素：质粒提取的得率和质量与很多因素有关，如宿主菌的种类和培养条件、细胞的裂解、质粒拷贝数、质粒的稳定性、抗生素、吸附柱的吸附量等。宿主菌种类质粒主要存在于细菌、放线菌和真菌细胞中，多数情况下我们是从大肠杆菌中提取质粒。大肠杆菌的菌株不同会影响质粒提取的质量。从宿主菌如DH5α和*0中可以得到高质量的质粒DNA。HBl01和它的衍生菌株，如TG1和JM系列会在裂解时产生大量的糖类，如果没有完全去除，将抑制后续实验中的酶活性，影响质粒DNA提取的质量。另外，有些菌株有非常高的内切酶活性，会降低DNA的得率。因此推荐使用DH5α和*0来提取质粒DNA。培养时间从固体培养基平板上挑取一个单菌落，接种到培养物中（含有相关抗生素的液体培养基中），振荡培养12-16小时。不应超过16小时，因为这时细胞开始裂解，使得质粒的得率降低，也会导致质粒丢失或质粒变异。质粒扩增氯霉素能抑制宿主细胞蛋白质和DNA的合成，但对松弛型质粒的复制没有影响。因此，在细菌培养液中加入氯霉素可提高松弛型质粒的拷贝数。由于氯霉素抑制了宿主细胞蛋白质和DNA的合成，从而抑制了染色体的复制，但质粒复制所用的酶半衰期较长，故质粒仍可继续复制，这样既可增加质粒产量，又可降低细胞的数量，使细菌裂解液的粘度降低而便于操作。常用于扩增的氯霉素浓度为170ug/ml 。抗生素在菌株的各生长阶段都应加入抗生素筛选。现在用的许多质粒都不含有在细胞分裂时确保平均分配的par位点，无质粒的子细胞在无抗生素时复制速度远大于含质粒的细胞。查看更多

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为什么免疫细胞能抗衰老？？抗衰老，一听这几个字大家都会不自觉地想到皮肤抗衰老，因为这是在日常生活中大家都会注意到的一个点，但其实除了皮肤抗衰以外，我们更应该重视身体的抗衰！一、为什么要重视身体抗衰？因为无论是皮肤还是身体，人体的衰老都是从细胞开始的，我们之所以看重皮肤抗衰老，其中一个重要的原因就是“觉得自己的皮肤没有以前好了”，那么同样的我们的身体特别是身体的免疫力，在达到巅峰后也会随着年龄的增长，加之生活环境、心理压力以及不良生活习惯的影响下逐渐走下坡。而当人体免疫失衡或是生病，就意味着免疫细胞不再是一个健康状态，那么它对抗病毒、细菌的能力就下降了，无法及时清除受损、癌变细胞的同时，导致衰老、罹患感染疾病、慢性疾病与癌症的风险也相应提高，这也是年龄越大越容易生病的道理，所以比起皮肤抗衰我们更应该注重身体抗衰！二、免疫细胞是如何抗衰的？人体内免疫细胞主要的分为NK细胞、T细胞、B细胞、吞噬细胞，这些免疫细胞在我们体内承担着免疫监视、免疫防御和免疫自稳的作用，所以它们的数量和质量与我们的健康息息相关！免疫细胞对细菌、病毒以及癌细胞具有强大的杀伤力，奉行着“非我族类统统杀掉”的原则，当免疫细胞消灭入侵的有害物时（即排异反应）人才会不生病，而当免疫细胞发挥保护自身组织功能和结构稳定时，便可以达到抗衰老的目的。就拿NK细胞来说，它的抗衰原理可以分为以下这几点： 1.天然细胞毒性：NK细胞活化后释放穿孔素（perforin）和颗粒酶（GranzymeB），穿孔素在靶细胞表面穿孔，使颗粒酶B进入靶细胞发挥直接的广谱性杀伤作用； 2.NK细胞介导的靶细胞凋亡：NK细胞表达可以诱导细胞凋亡的蛋白（FasL）和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL），可使靶细胞进入程序性凋亡状态。 3.抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用（ADCC）：特异性抗体通过其Fc段结合到NK细胞表面的Fc受体上，把NK细胞导向靶细胞，赋予NK细胞特异性，是多种抗癌单克隆抗体的重要作用机理； 4.NK细胞产生的细胞因子：活化的NK细胞分泌IFN-γ、TNF-α、GM-CSF等多种细胞因子，或直接作用于靶细胞，或通过进一步激活其他种类的免疫细胞来攻击靶细胞。免疫细胞不仅能直接清除人体衰老细胞，建立强大的免疫屏障补充有活力的新细胞外，还能减缓器官衰老进程在完善机体的同时，激活人体本身的其他免疫细胞功能。查看更多

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细节决定细胞培养的成败？！？培养细胞就像养育BABY一样，要精心照料，用心呵护。最hao每天都去看看它们，满足它们所需要的物质需求，防止出现培养箱缺水、二氧化碳不足、温度不够等各种小意外，还要注意很多小细节，以免开展重复的实验导致不必要的人力物力浪费。那培养细胞都要注意哪些小细节呢？就让我们一起来看看吧！ 1.细胞生长的营养来源不同的细胞的培养基是不相同的，对于大多数肿瘤细胞来说，营养配方一般为：90%合成培养基（DMEM、RPMI1640、MEM等）和10%胎牛血清(FBS)；为了防止污染，可以适时加1%双抗，抗生素的使用应为短期。 Q：细胞培养基配方如何选择？ A: 一般购买细胞时，针对不同的细胞株，会有详细的介绍，包括生长的状态图、培养基的类型等。如人源肺癌细胞A549可用DMEM培养基，在胎牛血清的选择上也可以选用大品牌、来源可靠的胎牛血清，能提供较好的营养成分，以满足细胞株生长的需要。 Q：如果细胞生长缓慢，需要增加血清比例吗？ A：可以。 2.细胞生长的环境舒适无菌的环境是细胞健康生活的重要基础。需要合适的器皿，不同形状、规格、用途多样的培养皿、培养瓶及培养板等，最终进入合适的恒温箱培养，如肿瘤细胞就需37℃，5%CO2的恒温箱中生长。 Q：细胞培养板及培养皿或培养瓶如何选择？ A：根据不同的应用选择不同的培养皿或容量板，如MTS用96孔板，细胞爬片用24孔，流式分析用6空等，具体应用可参见下表：而选择培养皿还是选择培养瓶，就细胞培养状态来说差别不大，主要是培养瓶的安全系数更高一些，数量也会大一些，但是成本也相对较高，因此没有特殊要求时，一般用培养皿即可。 Q：血清是否要灭活处理，保证环境无菌？ A：这取决于您的应用。灭活过程中，会导致血清中某些成分被破坏，如氨基酸，维生素，生长因子等。所以只有在您的实验对血清有特殊要求时，才会考虑对血清进行灭活处理。如您的实验对血清中的某种组分敏感，需要去除该组分。最常见的情况是需要去除血清中的补体蛋白，因为补体在机体中参与细胞杀伤，巨噬细胞和淋巴细胞活化，肥大细胞和血小板组胺释放，平滑肌收缩等过程，所以一般在免疫学相关研究中及肌细胞和干细胞的培养过程中需要对血清进行灭活处理。 3.细胞复苏与冻存细胞复苏是指将冻存的细胞解冻之后再重新培养，细胞从冷冻停止生长状态恢复生长的过程。复苏过程如下图所示： Q：细胞复苏后，为什么很多难以贴壁？ A：忽略培养基的问题，主要考虑细胞冻存时状态差或者复苏时动作太慢导致细胞死亡。切记最重要的融化速度要快，可不时摇动冷冻管，使之尽快通过最易受损的温度段（-5～0℃）。细胞冻存则是将细胞放在低温（-70℃~196℃）环境，降低细胞内的代谢活动，最da限度的保存细胞活力，以便长期存储。 Q：目前细胞冻存液多采用的什么配方？ A：目前细胞冻存多采用DMSO二甲基亚砜或甘油作保护剂，细胞冻存液的配方有很多种，如培养基：血清：DMSO=7:2:1或8：1：1或5：4：1，或直接用血清：DMSO=9:1，一般高浓度血清有助于维护细胞活力，复苏存活率在80%～90%以上。 4.细胞的传代培养细胞在培养过程中不断增殖，培养皿空间有限，细胞过密生长就会受到抑制，影响细胞的状态，因此我们要把细胞中的一部分分到别的培养皿里，这样细胞才能生长的好。 Q：细胞传代培养为什么要选择对数期细胞？ A: 细胞的生长和分裂，一般遵循以下模式：停滞期，对数期（指数期），平稳期（平台期）和衰退期。为了确保活力，遗传稳定性和表型稳定，必须使细胞保持在对数期。一般细胞长到70%~80%左右就可以传代了。除了上述几个环节的关节问题外，细胞培养还有很多小问题如下： Q：培养基多久换一次？ A: 正常情况下，培养液偏红色。如果细胞维持在pH6.5～6.6条件下，培养基变黄，说明培养液中代谢产物已堆积到一定量，细胞会脱落死亡，需要更换新鲜培养液。一般细胞生长旺盛时1～2天换一次，生长缓慢时，3～4天亦可。针对复苏后的细胞，建议隔天换液。 Q：血清应如何融解？ A：从冰箱中取出血清，放于2-8℃融化，融化过程中不时旋转混匀。充分融解后分装或平衡到室温后使用。 Q：如果细胞形态不清晰或有异物等，如何处理？ A：可以考虑如下操作：首先，倒掉旧的培养基，用新的培养基或者PBS洗涤2-3次，再开始正式的消化、吹打。其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内。后续再密切观察。 Q：血清中出现絮状沉淀是否需要去除？如何去除？ A：多种原因可能导致絮状沉淀的形成，最常见的原因之一是融化过程中，脂蛋白聚集所致。该现象一般不会影响产品质量。可以400g离心5分钟，取上清，然后过滤。根据需要选择合适的滤膜孔径，一般最chang用的是0.22um PES材质的滤膜。为避免滤膜阻塞，建议离心后取上清加入培养基内一起过滤而不是直接过滤血清。总之，细胞培养是后续实验的基石，留心各种细节问题，严守灭菌处理的程序，保护好自己养的细胞，这样才能快乐地进行后续的实验。查看更多

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细胞及分子

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关于细胞株和细胞系以及原代细胞的区别? 1、获取方法不同，原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞；细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物；细胞系是原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体。 2、原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了，细胞的生长就会出现停滞，大部分细胞衰老死亡。但是有极少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去，这些存活的细胞一般能够传到40--50代，这种传代细胞叫做细胞株；细胞株的遗传物质没有发生改变。当细胞传至50代以后又会出现“危机”，不能再传下去。但是有部分细胞的遗传物质发生了改变，并且带有癌变的特点，有可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称为细胞系。 3、原代培养物经首次传代成功即称为细胞系，因此细胞系可泛指一般可能传代的细胞。其中能够连续传代的细胞叫做连续细胞系或无限细胞系，不能连续培养的称为有限细胞系；大多数二倍体细胞为有限细胞系。通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物称为细胞株，也就是说，细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。查看更多

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什么是对照品，对照品的定义? 对照品规范有什么要求？对照品有什么要求？国家药品规范品、对照品系指国家药品规范中用于鉴别、检查、含量测定、杂质和有关物质检查等标准物质。用来检查药品质量的一种特殊的专用量具；丈量药品质量的基准；也是做为校正测试仪器与方法的物质规范；药品检验中，确定药品真伪优劣的对照，控制药品质量必不可少的工具。对照品系指用于生物制品理化等方面测定的特定物质。稳定性较差的可加不含对测定有干扰物质的适宜的稳定剂。对照品由国家药品检定机构审查认可，对照品应尽可能与制品原液配方一致。其规范应不低于制品的质量规范。对照品：指用于鉴别、检查、含量测定的规范物质，由国务院药品监督管理部门指定的单位制备、标定和供应。规范品系指用于生物测定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的规范物质，一国际规范品进行标定；对照品出另有规定外，按干燥进行计算后使用。对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的规范物质.规范品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的规范物质，以效价单位(U表示。还是感觉不甚明了否规范品只用于生物方面？否化学方面只能称对照品？规范品有什么要求？对照品有什么要求？国家药品规范品、对照品系指国家药品规范中用于鉴别、检查、含量测定、杂质和有关物质检查等标准物质，国家药品规范不可分割的组成局部。国家药品规范物质是国家药品规范的物质基础，用来检查药品质量的一种特殊的专用量具；丈量药品质量的基准；也是做为校正测试仪器与方法的物质规范；药品检验中，确定药品真伪优劣的对照，控制药品质量必不可少的工具。规范品、对照品：指用于鉴别、检查、含量测定的规范物质，均由国务院药品监督管理部门指定的单位制备、标定和供应。规范品系指用于生物测定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的规范物质，一国际规范品进行标定；对照品出另有规定外，按干燥进行计算后使用。规范品和对照品均附有使用说明书，质量要求，有效期和装量等。生物制品规范物质系指用于生物制品效价、活性或含量测定的或其特性鉴别、检查的生物规范品或生物参考物质。2规范物质的种类生物制品规范物质分为二类。国家生物规范品系指用国际规范品标定的或我国自行研制的尚无国际生物规范品者)用于定量测定某一制品效价或毒性的规范物质，其生物活性以国际单位（IU或以单位（U表示。国家生物参考品系指用国际参考品标定的或我国自行研制的尚无国际参考品者)用于微生物(或其产物)定性鉴定或疾病诊断的生物试剂、生物资料或特异性抗血清；或指用于定量检测某些制品的生物效价的参考物质，如用于麻疹活疫苗滴度或类毒素絮状单位测定的参考品，其效价以特定活性单位表示，不以（IU表示。其制备与标定应符合“生物制品国家规范物质制备和标定规程”要求，国家规范品及生物参考品系指用于鉴别、检查含量或效价测定的规范物质。并由国务院药品监督管理部门指定的机构分发。企业工作规范品或参考品必需经国家规范品或参考品标化后方能使用。对照品系指用于生物制品理化等方面测定的特定物质，由生产单位采用与制品生产工艺相同的方法制备。对照品应尽可能与制品原液配方一致，稳定性较差的可加不含对测定有干扰物质的适宜的稳定剂。对照品由国家药品检定机构审查认可，其规范应不低于制品的质量规范。规范品、对照品：指用于鉴别、检查、含量测定的规范物质，均由国务院药品监督管理部门指定的单位制备、标定和供应。规范品系指用于生物测定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的规范物质，一国际规范品进行标定；对照品出另有规定外，按干燥进行计算后使用。规范品和对照品均附有使用说明书，质量要求，有效期和装量等。1定义生物制品规范物质系指用于生物制品效价、活性或含量测定的或其特性鉴别、检查的生物规范品或生物参考物质。对照品系指用于生物制品理化等方面测定的特定物质，由生产单位采用与制品生产工艺相同的方法制备。对照品应尽可能与制品原液配方一致，稳定性较差的，可加不含对测定有干扰物质的适宜的稳定剂。对照品由国家药品检定机构审查认可，其标准应不低于制品的质量标准。对照品是国家药品标准不可分割的组成部分。国家药品标准物质是国家药品标准的物质基础，它是用来检查药品质量的一种特殊的专用量具；是测量药品质量的基准；也是做为校正测试仪器与方法的物质标准；在药品检验中，它是确定药品真伪优劣的对照，是控制药品质量必不可少的工具。药典或者其它标准品、对照品的提供机构一般不会明确规定标准品的有效期，特别是对开封的标准品或配制的标准溶液使用期限，原则上来讲，不推荐重复使用标准溶液，如果需要重复使用同一份标准溶液，使用单位应对其稳定性和使用效期进行研究。在进行标准品溶液的稳定性研究之前，应起草该标准品溶液稳定性研究草案，并获得公司质量管理部门的批准。稳定性研究草案里应明确标准品溶液的配制程序、储存条件、稳定性研究方案、稳定性结果的记录和判断程序。对于标准品的有效性的判断，可以根据不同时间点的标准品检查结果，比如HPLC的峰面积、UV的吸收值或直TLC展开图中斑点大小和颜色深浅等。稳定性研究结束后，需要对实验结果进行总结、分析，根据评估给出溶液的内部推荐效期，同时征求质量管理部门的意见并获得其批准。批准后的标准品溶液效期可用于实验室内部对标准品溶液的使用。对照品系指用于鉴别、检查、含量测定和校正检定仪器性能的标准物质，而标准品系指用于生物检定、抗生素或生物药品中含量或效价测定的标准物质，以效价单位(U)表示。文献中常将2种概念混淆，认为对照品就是标准品，是1种物质2种提法而已，造成错误的原因，可能是有的药品既有对照品，又有标准品。例如，当用微生物法测定头孢克罗效价时，用头孢克罗标准品，用HPLC或UV法测定时，则用对照品；非那西丁当用作熔点校准物质时，用熔点标准品，测定含量时，用对照品。即使是同一种物质的标准品和对照品，它们的规格、标定方法以及用途都可能是不同的。查看更多

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微生物

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金黄色葡萄球菌的污染该如何避免? 金黄色葡萄球菌是一种球状细菌，在显微镜下看，它们聚集成簇，像葡萄一样。不管有没有氧气的存在，它们都可以生长。在良好的营养环境中，它们会长成黄色的“菌落”。这种细菌在自然界广泛存在，人和动物是它们的优良居所。在健康人中，鼻子、喉和手是最适合它们生长的地方。此外，如果有伤口，伤口处也容易大量滋生。有朋友问：“是否食物中一点都不能有金黄色葡萄球菌呀? 金黄色葡萄球菌自身并不是那么可怕，因为它们对温度很敏感，在高温下相当脆弱。超过46℃，就有细菌hold不住了;在55℃下，它们中的90%“撑不过”3分钟;煮沸的水对它们的杀伤力堪称“秒杀”。虽然金黄色葡萄球菌很脆弱，但是它们的毒素极为顽强。它生前分泌的毒素，会引起恶心、呕吐、胃痉挛和腹泻等症状。这种中毒是急性的，一般在1~6小时之内发作，最快的甚至半小时就出现症状。大多数症状不会严重，在两三天内会恢复健康。因为细菌本身很容易杀灭，而真正的罪魁祸首毒素却能够经受酷热考验。所以，如果食品中金黄色葡萄球菌的检测结果高，可以“充分”判定食物受到了污染。但是，检测结果低却不能说明该食物就一定没有问题。比如说，如果一种食物曾经被该细菌大量污染，然后又经过加热，那么检测结果将是“细菌数合格”，但其中同样可能存在足以致病的毒素。最容易感染金黄色葡萄球菌的食物有：肉类、禽类、蛋类、水产类、奶制品等等。国家标准如何规定！消费者都希望食物“绝对安全”，对于“可能危害”的东西“零容忍”。但是这并不现实。《食品安全国家标准食品中致病菌限量》GB 29921-2013明确规定了预包装食品中金黄色葡萄球菌的限量。肉制品、水产制品、即食蛋制品、粮食制品、即食豆类制品、巧克力类及可可制品、即食果蔬制品、饮料、冷冻饮品这几种预包装食品中金黄色葡萄球菌的限量规定是：同一批次产品采集5个样品分别检测，最多可以允许1个样品超出每克或者每毫升100CFU，但不能超过1000CFU。即食调味品的范围则显得略宽容些——最多可以允许2个样品超出每克或者每毫升100 CFU，但不能超过10000 CFU。(CFU是菌落形成单位。菌落的个数，传统上叫“个”。但是，一个菌落一般由一簇细菌(并不是一个细菌)形成，所以更准确的叫法是菌落形成单位CFU。) 对于其他食品中的规定不尽相同，不过也都允许一定量的存在。金黄色葡萄球菌本来在自然界、尤其是人体中广泛存在，要实现“零容忍”将会使生产成本大大提高。消费者觉得成本高低是厂家的事情，似乎跟自己无关。但生产成本的增加，最终还是要由消费者来买单。如何远离金黄色葡萄球菌的污染金黄色葡萄球菌的污染，不仅仅会发生在工业食品中，自己制备的食物同样有污染的风险，很可能只是因为感染症状并不严重，难以引起关注，感染的人一般也不会去查明原因。建议避免金黄色葡萄球菌感染：一是制备食物之前用肥皂和水充分洗手，尤其是指甲内;二是鼻子或者眼睛感染时不要去制备食物;三是手或者手腕有伤口时不要制备食物，也不要给其他人端送食物;四是保持厨房与就餐区域的清洁卫生;五是如果食物要保存2小时以上，要么在60℃以上保温，要么在4℃以下冷藏。六是做好的食物装在宽而浅的容器中尽快冷藏。查看更多

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理化检验实验室有哪些功能间? 样品室 1）样品室应设为独立房间，实行专人管理，确保样品处理及储存安全。 2）样品室应尽量设在阴面房间，以防阳光照射使样品成分发生变化。 3）样品室应干燥清洁、通风良好，样品应分类摆放，避免相互混淆和交叉污染。天平室 4）天平室应设为独立房间，摆放天平的台面应坚固稳定，抗振性能良好。 5）天平室要求温度、湿度相对衡定，所以应尽量设在阴面房间，以避免日间温湿度变化较大。 6）天平室内最好设有缓冲门，以防止空气流动对称样准确性造成影响。 7）隔壁房间内不应放置粉碎机、离心机、超声波洗涤器等设备，以免对称量工作带来影响。前处理室 8）前处理室应至少分为无机前处理室和有机前处理室２个独立房间。 9）无机前处理室用于以酸、碱、盐等无机试剂处理为主，一般主要进行加热、消煮、蒸馏、滴定等操作。由于经常使用电炉等明火，所以房间内不可进行有机试剂操作，以免引起火灾事故。 10）有机前处理室用于以甲醇、乙醚、丙酮等有机试剂处理为主，一般进行萃取、浓缩、净化、旋转蒸发等操作。 11）由于主要使用易燃易爆有机试剂，所以房间内应避免使用电炉、烘箱等明火加热设备。前处理室是检测分析的主要场所，房间布置应以宽敞、明亮、通风性好、便于操作为主。仪器室 12）仪器室一般应单独设为独立房间，尤其是大型精密仪器设备，不应放置到前处理室内，以免仪器电路板受腐蚀而影响使用寿命。 13）仪器室内相互有干扰的仪器设备不要混放到一起，如果条件允许，尽量按光谱类、色谱类、烘箱类、离心机类、前处理设备类、专用设备类等分类放置。仪器室内应相对干燥，避免潮湿，仪器摆放位置应避免受到阳光直射。 14）对于原子吸收分光光度计等具有特殊安装要求的仪器设备，应事先设计好排风位置等。试剂室 15）试剂室是用于存放化学试剂的专用房间，应实行专人管理，严谨外人随意进入，确保化学试剂使用储存安全。由于有些化学试剂见光分解，所以试剂室应尽可能设在阴面房间。试剂室应确保通风良好，安全防火；试剂应分类存放，避免混淆。资料档案室 16）资料档案室一般应设为独立房间，实行专人管理，严禁无关人员随意进入，确保资料档案安全储存。资料档案室应尽量设在阴面房间，以防阳光照射。 17）资料档案室应通风良好、避免潮湿，资料档案应排放整齐、分类清晰，并确保安全防火、防盗。样品接收室 18）用于接收外来样品，一般应设在门厅入口处，以方便外来送样人员。房间应宽畅明亮，为了既方便样品接收登记，又防止样品相互混淆，收样人员与送样人员之间应通过工作台面相互隔离，这样也利于做好不同客户之间保密工作。办公室、会议室 19）办公室、会议室等属于日常办公会客场所，一般应设在检测区域的外面，办公室应尽量靠近门厅入口处，以避免外来人员横穿检测区域带来干扰。查看更多

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做完实验就万事大吉了？原始记录检查了吗? 如何检查原始记录人员及签名应记录所有参加实验研究的人员每项实验结束后，应由实验人员及实验负责人在原始记录后签名原始记录中很多地方涉及到签名，应正确认识签名的严肃性，所有签名必须由本人完成，不能代签。选择检测方法 CNAS要求实验室应使用适合的方法和程序进行所有检测。实验室面对的是产品，不同的产品执行的标准不同，使用的检测方法也不同。对于执行标准明确的产品，直接选取标准中的检测方法即可。实际工作中，我们会遇到大量的非标产品，尤其是委托检验时，需要与客户沟通，采用满足客户需求并适用于所进行的检测的方法。当客户未指定所用方法时，实验室应从国际、区域或国家、行业标准中发布的，或由知名的技术组织或有关科学书籍和期刊公布的，或由设备制造商指定的方法中选择合适的检测方法。实验室制定的或采用的检测方法如能满足预期用途并经过确认也可使用。记录的样品信息接收样品后，不要急于检测，要先检查样品状态是否存在影响正常检测的缺陷。对于一些封装的样品，无法直接观察到缺陷的，打开封装发现有缺陷时，也应立即终止检验，对样品进行妥善处理并及时与客户沟通。即便无缺陷，也应在原始记录中对样品状态进行适当描述。原始记录的修改原始记录不得随意删除、修改或增减数据。如必须修改，应在修改处划一斜线，不得完全图黑，保证修改前的记录能够辨认，并应由修改人签名，注明修改时间及原因。标准溶液的可追溯性常用的标准溶液有滴定液、标准pH缓冲液、标准比色液、标准铅溶液、标准砷溶液等等。在使用到这些标准溶液时，要在原始记录中记录其配制、标定等过程，或是注明其来源，并应在另外的记录本中记有配制、标定等记录。使用和领用登记实验过程中应做好仪器的使用登记，原始记录应与使用登记相对应一些特殊试剂（毒、麻、精、放）的领用登记应与实验原始记录相对应对照品和对照药材的领用记录应与实验原始记录相对应。试验中的图片和照片实验中的图片、照片应粘贴在实验原始记录的相应位置上，底片或电子版应妥善保存。热敏纸打印的实验记录，须保留复印件。拍照时应做好图谱的标识、记录，可以在拍照时在旁边放一小纸条，把相应的名称、简要信息等一起拍下来。原始记录的书写原始记录的书写应字迹工整、用字规范所有的记录均不得使用铅笔、圆珠笔（显微绘图除外）常用的外文缩写（包括实验试剂的外文缩写）应符合规定。首次出现的时候应用中文加以注释。实验记录中不要出现不确定量（如1-2滴，5-10uL）实验记录中应使用规范的专业术语，计量单位应注明并采用国际标准记录单位，有效数字的取舍应符合实验要求。有效数字的取舍：修约原则：四舍六入五留双适当取舍有效数字：根据数值的大小来确定有效数字的位数，如液相色谱峰面积为几万，几十万时，取其整数位即可；表示测量精度时，标准偏差最多只取两位有效数字。称量的准确性比如含量测定时，对照品称量应符合称量精度的要求称量对照品时应使用十万之一的天平，称取量应不低于10mg。不要出现用万分之一天平称取，有的甚至只称1、2mg，这样称量误差会很大。原始记录的原始性原始记录应边实验边记录，不可事后补记或转抄原始记录中不但要记录实验结果理想并收入标准正文的内容，也要将实验结果补理想，没有收入标准正文的实验过程记录下来。仪器图谱的打印仪器的图谱也是原始记录的一部分，比如，高效液相色谱是软件通过电脑采集仪器给出的电信号，将其转化为数字信号，经分析处理后打印出来的图谱。随着采集和处理软件的功能越来越强大，每一次进样，系统会记录下很多信息，一般只选择一些我们需要的信息打印出来，但必须反映的信息一个也不能少。实验信息部分包括：采集时间、存盘路径、打印时间、实验方法名称、操作者名称、进样体积等。实验结论每个实验项目开始前应首先记录这个实验的目的是什么。实验结束后也应该对结果进行分析，并得出明确的结论。质控数据比如检查项下如pH值测定、水分、相对密度、灰分等，质量控制规定应平行做两份含量测定应平行做两份，检查重复样品的测试是否满足质控要求。查看分包方数据分包是指实验室在某些情况下，委托其他的实验室为其提供检测数据的业务活动。实验室应就分包方的工作对客户负责，由客户或法定管理机构指定的分包方除外。对由分包方完成的检测，应在原始记录中予以说明，并将分包方提供的数据与原始记录一同存档，并在出具检验报告中证明。查看更多

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如何判断细胞是活细胞的常见方法? 判断细胞是不是活细胞，你知道几种方法呢？高中阶段我们该了解那些呢？今天古朵生物就给大家汇总一下！以下方法可以用来判断细胞是不是活细胞。 1．活体染色剂—亚甲基蓝溶液以前的教材中，活体染色剂亚甲基蓝溶液可用来鉴别所有有新陈代谢的细胞，利用交换吸附的原理，只有活细胞才能完成交换吸附。 2．胚的染色—红墨水细胞膜在细胞存活时有选择透过性，所以有机染料一般不会吸收，所以用它可以鉴定种子的死活，如玉米细胞是活的，胚没被染红，胚乳被染红。 3．显微镜观察—质壁分离和复原活的成熟的植物细胞有明显的质壁分离和复原现象。 4．显微镜观察—胞质环流通过细胞质流动实验的观察可以知道，只有活细胞才有胞质环流现象。 5．染色剂—台盼蓝人教版教材中，用台盼蓝染色剂，又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜，所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色，而活细胞不被着色。 6．酵母细胞—美蓝染料利用死活细胞在代谢上的差异是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色。由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色；而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱，使美蓝处于氧化态，从而被染成蓝色或淡蓝色。 7．荧光染色法荧光素双醋酸酯（FDA）是一种常用的培养动植物细胞以及植物细胞原生质体的生活力鉴定染料，其染色机理也利用了死活细胞在代谢上的差异。 FDA本身不产生荧光，也无极性，能自由渗透出入完整的细胞膜。当FDA进入活细胞后，被细胞内的脂酶分解，生成有极性的、能产生荧光的物质——荧光素，该物质不能自由透过活的细胞膜，积累在细胞膜内，因而使有活力的细胞产生绿色荧光，而无活力的细胞因不能使FDA分解，而无法产生荧光。查看更多

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DNA电泳条带怎么分析? 一、微笑形区带（两边翘起，中间凹下）：形成原因：主要是由凝胶中间部分凝固不均匀引起的，多出现于较厚的凝胶中。处理办法：待其充分凝固再做实验。二、皱眉形区带（两边向下，中间鼓起）：形成原因：主要出现在蛋白质垂直电泳槽中，一般是由两板之间的底部间隙气泡未排除干净引起的。处理办法：可在两板之间加入适量缓冲液，以排除气泡。三、区带拖尾：形成原因：主要是由样品溶解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。处理办法：加样前离心；选择适当的样品缓冲液，加适量样品促溶剂；电泳缓冲液放置时间过长，重新配制；降低凝胶浓度。四、区带出现纹理：形成原因：主要是由样品不溶性颗粒引起的。处理办法：加样前离心，加适量样品促溶剂。五、鬼带：形成原因：主要是由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性，致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合，聚合成大分子，其分子量比目标区带大，有时不能进入分离胶。但它与目标区带有相同的免疫学活性，在免疫印迹反应中可见，能与目标区带对应的抗体作用。处理办法：加热煮沸后再添加适量的DTT或Beta巯基乙醇，以补充不足的还原剂；加适量EDTA来阻止还原剂的氧化。六、溴酚蓝不能起到指示作用：形成原因：实验中常遇到溴酚蓝已跑出板底，但蛋白质却还未跑下来的现象，主要与缓冲液和分离胶的浓度有关。处理办法：更换正确pH值的Buffer，降低分离胶浓度。七、区带很粗：形成原因：主要是由于浓缩胶未浓缩好。处理办法：适当增加浓缩胶长度，保证浓缩胶贮液的pH正确（6.8），适当降低电压。八、电泳电压很高而电流很低：形成原因：主要是由于电泳槽没有正确装配，电流未形成通路。处理办法：电泳槽正确装配。查看更多

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