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洛尘

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上海古朵生物

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细胞及分子

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原代细胞与细胞系的区别? 细胞系是不断生长,分化的细胞群,因其经过遗传改造,致使其具有无限增长的潜能.体外生长的细胞系用于医疗或科研.实际上,连续细胞系可以用大量次培养基培养,随着代数的增加细胞的基因型和表型都有可能发生改变. 第一次收获和接种的细胞被称为原代细胞查看更多

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微生物

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细胞实验中如何预防真菌污染? 1、你若随便穿戴，我便生死相依你进细胞房时不换鞋，不戴口罩，不戴手套，虽然感觉呼吸畅快全身轻松，但其实是进细胞房的最大忌讳！有更严格的细胞房连帽子都要戴上。这么随便的就把我带进去见你的细胞，难怪她会被你气死，换鞋就不说了，你应该也知道有真菌吧。但你根本不能保证你口腔支原体是不是会污染细胞，每当你兴高采烈地给你的细胞哈一口气送温暖的时候，细胞就……狗带了。不戴手套，根本就清除不掉你手上的细菌真菌，要不你试试拿火燎一下你的手，焦了才算把我除干净。 2、你想用紫外和酒精摆脱我，却也无法斩断我对你的情丝虽然你很想摆脱我，想用紫外和酒精消灭我，是的，确实伤到我了，但是紫外和酒精最多只能灭细菌，对真菌伤害很小。你不戴手套，可劲用喷壶喷手，三个字：然并卵。用清洁超净台时为什么不用棉球而要用喷壶呢？因为用棉球的话，可以在灭菌的同时把菌体从手上撸下去。而喷壶只能短暂灭菌而已，所以要多用棉球，少用喷壶。 3、世界那么大，我想去看看，可你却不停地召唤我回来 ①生物安全柜：这个家伙的玻璃窗是有警戒线的，超过这个警戒线，生物安全柜的风帘就起不到太大作用，而且会引入室内空气中的真菌，还会让你给细胞送温暖的呼吸里，自动带上支原体。 ②生物安全柜操作时：门前最忌讳乱堆东西，枪头盒、血清、管子，培养皿、移液器、酒精喷壶、酒精灯，堆了一大堆。有的都堵住了你门前的出风口。一来你操作起来并不是井井有条，会导致动作幅度过大，扰乱气流。二来这些东西本身也会挡住风口，扰乱气流。气流变化会直接导致外部不洁净的空气流入，也同样会导致生物安全柜的洁净作用失效。这必须要注意！ 4、不论你管不管我，我都在水浴锅里不离不弃水浴锅里是我的温床，你那么大胆的将你心爱的细胞放在我身边复苏，呵呵，37℃复苏完，你猜我刚刚对你的细胞都做了什么？湿漉漉的冻存管，任你再怎么喷酒精也并没有什么意义了。那要怎么办，水浴锅一来是定期清洁，二来是加一些抑菌剂，用一次一周可保证水浴锅清亮。 5、真菌走了，留下的孽种叫孢子说完水浴锅，那接下去讲讲另一个坐拥37℃温床的水环境，也就是培养箱的水盘。有几次当你不高兴搭理我的时候，我就会放肆的生长，水盘里飘着特别大的一块块霉斑就是我的杰作。即使换了水，但是我留下的孢子，是你不敢想象的。一污染就一箱子全报废了，培养箱要定期用 Incubator Cleaner 擦拭隔板和内壁，为了你心爱的细胞着想，一周一次就够了。水盘也一样，水盘中加入Tray Cleaner就可以有效抑制和杀死细菌真菌。查看更多

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细胞复苏后碎片太多怎么处理? 首先要排除细胞在冻存以前就生长不良或者冻存过程中损伤过大，如果是这两个原因的话就不是复苏以后处理能够改善的了。有条件的话重新复苏一支。如果细胞很珍贵的话，就暂时提高血清浓度至20%，在复苏后最初两代采用较高的接种密度，这样可以迅速提升细胞的生长状态，传几代后细胞生长好了，碎片在传代过程中洗掉了，自然就没有了。查看更多

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为什么提取细胞蛋白浓度总是很低? 细胞总蛋白提取量少原因很多比如可能是该细胞状态不好，造成表达量偏低，提取后蛋白总量就会少蛋白与蛋白间性质差异大，因为所需的细胞提取液不一样，会造成一些蛋白不能溶解于提取液中而和细胞碎片一起沉淀掉不同的提取方法不一样，可能造成部分蛋白沉淀，影响到提取总量蛋白质溶液应该是澄清的，可以无色，可以有色，如果溶液不澄清，可能是离心力不够，混入了细胞碎片或者组织碎片。蛋白溶液澄清与否和浓度没有直接联系查看更多

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微生物

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菌株和菌落的区别? 微生物学上说的菌落是单个细菌（或其他微生物）细胞或一堆同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的子细胞群落，是一群细胞群落；菌株是由一个独立分离的单细胞（或单个病毒粒子）繁殖而成的纯种群体及其后代，菌株实际上是某一微生物达到“遗传性纯”的标志，一种微生物的每一个不同来源的纯培养物均可称为该菌种的一个菌株。查看更多

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工艺技术

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合成培养基与半合成培养基的区别? 合成培养基与半合成培养基在这里合成培养基是由化学成分完全了解的物质配制而成的培养基，同样可以称为限定培养基，高氏地号培养基和察氏培养基就属于这种类型。配制合成的培养基时它的重复性强，但是与天然的培养基相对来说成本是比较高的，微生物在其中生长速度比较慢，一般适用于实验室用来进行微生物营养需求、代谢、分类鉴定、生物量测定等等研究工作。半合成培养基则是以天然的有机物作为碳、氮等等主要的营养源，使用化学试剂补充无机盐配制而成的培养基则就称为半合成培养基。这种培养基能够充分的满足微生物的营养需求，大多数微生物都能够良好的生长，所以在生产实践和实验室中使用的比较多。查看更多

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蛋白纯化实验有哪些需要注意的? 1. 选择表达载体时，要根据所表达蛋白的最终应用考虑。如为方便纯化，可选择融合表达；如为获得天然蛋白，可选择非融合表达。 2. 融合表达时在选择外源DNA同载体分子连接反应时，对转录和转译过程中密码结构的阅读不能发生干扰。 3. 菌液OD值要小于1，否则细胞太浓太老，不易破碎，且质粒易丢失。 4. 诱导时间最好做一个梯度，不同蛋白诱导时间需摸索。 5. 诱导温度适当摸索：25、30℃。 6. IPTG浓度：一般在1 mM 以内，可适当摸索。 7. 超声条件可视实际情况改变，只要使菌体裂解充分即可，即菌液清亮不粘稠。查看更多

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工艺技术

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如何装填凝胶过滤柱实验? 操作裎序 1) 确定填料的用量。市售的 Sephacryl S-300 HR 胶是浓度为 2/3 填充床体积的浆状物。因此，对于 180 ml 的柱子（直径=2.6 cm，长=34 cm)，可从瓶中取出 270 mlS-300 的浆状物。注：装填凝胶过滤柱时，填料床的均匀性非常重要。还应注意，进行髙分辨率分离时, 较细、较长的柱子要有效得多。 2) 在粗烧结玻板漏斗中，用数倍体积的 TM 缓冲液+0.1mol/L KCl 充分洗涤 S-300 胶。注：操作时要温和 (尤其在搅拌时), 以防易碎的胶粒破碎。 3) 温和地将填料悬浮于 TM 缓冲液+0.1mol/L KCl 中，至终体积为所需填充床体积的 2 倍（360 ml)。 4)(此步可任选，但建议做）置浆状的 S-300 胶于真空下脱气数分钟。此过程可去除介质和缓冲液中溶解的气体。 5) 立起柱子，其上带有储液槽盛放 S-300 胶和缓冲液。要确保柱子绝对垂直。关闭柱底部的出口。 6) 于空柱中加入约为 1/10 柱体积的缓冲液（约 20 ml)。 7) 连续不断地将浆状的 S-300 胶注入柱子。注：严防气泡进入凝胶过滤柱，这一点很重要，即使是小气泡也会毁坏柱子，如是就必须重新装柱。 8) 静置约 30 min, 然后打开柱底部的出口，让缓冲液从柱中流过。 9)S-300 胶沉降完毕后，关闭柱底部出口，移走柱上的储液槽，于填充床顶部接上柱液流接头。注意，在上液流接头接上柱之前，务必使其充满缓冲液，否则就会由此液流接头带入气泡。 10) 将上液流接头与泵连接（当心气泡），开始用泵装压柱子。先以层析样品时所用的流速装压柱子（对本实验中的柱子，流速为 100 ml/h)。装压时，要注意观察填料的顶部，随着填料顶部的下沉，下调上液流接头，使之始终处于填料床的顶部。然后，当填料停止下沉后，将流速增至层析流速的 150%(对于 S-300 柱来说，即把流速增至 150 ml/h)。继续压柱（并调节上液流接头，直至填料不再进一步压缩。此时层析柱即装填完毕，备用。注：装柱时，缓冲液中不必添加蛋白酶抑制剂和二硫苏糖醇。但样品上柱前，必须用至少为一个完整体积的含这些成分的缓冲液平衡柱子。 11）为检验柱子的性能，一个好的办法是上一份 2 mg/ml 的蓝葡聚糖样品于新装填的柱子进行层析。不要再原先上过蛋白质样品的柱子上层析蓝葡聚糖。用层析缓冲液（TM 缓冲液+0.1mol/L KCl) 制备 2 mg/ml 的蓝葡聚糖溶液，过滤（用 0.22um 滤膜除去小的、不溶的蓝葡聚糖顆粒。蓝葡聚糖按约 2% 总柱体积的量（对于 S-300 柱，约 4 ml) 上样，以 2.5 ml 为一管分部收集各组分。用蓝葡聚糖进行的层析可提供以下信息：①空体积；②样品稀释程度;③柱的总体质量，这可通过肉眼观察蓝葡聚糖在柱中的下移情况来判定，由此可揭示柱床的不足之处。查看更多

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如何选择凝胶填料？科研人不能错过！？做分离纯化工作的人都知道，选择合适的填料是至关重要的。通过优化组合找到高效的纯化工艺，使用最少的步骤达到蛋白质产量和纯度的最大化。下面看看一下填料选择介绍。 1、测定-分子量、PI 当目标蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚时，可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的Superose HR预装柱很适合测定未知蛋白的分子量。用少量离子交换介质在多个含不同PH缓冲液的试管中，可简易地测出PI，并选择纯化用缓冲液的最佳PH。 2、选择-层析方法若对目标蛋白的特性或样品成分不太了解，可尝试几种不同的纯化方法： 1.使用最通用的凝胶过滤方法，选择分离范围广阔的介质如Superose、Sephacryl HR依据分子量将样品分成不同组份。 2.用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质，再用以结合目标蛋白。一步即可得到高纯度样品。 3.体积大的样品，往往使用离子交换层析加以浓缩及粗纯化。高盐洗脱的样品，可再用疏水层析纯化。疏水层析利用高盐吸附、低盐洗脱的原理，洗脱样品又可直接上离子交换等吸附性层析。两种方法常被交替使用于纯化流程中。 3、纯化-大量粗品处理大量原液时，为避免堵塞柱子，一般使用sepharose big beads、sepharoseXL、sepharose fast flow等大颗粒离子交换介质。扩张柱床吸附技术利用多种STREAMLINE介质，直接从含破碎细胞或组织萃取物的发酵液中俘获蛋白。将离心、超滤、初纯化结合为一。提高回收率，缩短纯化周期。 4、纯化-硫酸氨样品硫酸氨沉淀方法常被用来初步净化样品，经处理过的样本处于高盐状态下，很适合直接上疏水层析。若作离子交换，需先用Sephadex G-25脱盐。疏水层析是较新技术，随着介质种类不断增多，渐被融入各生产工艺中。利用Hitrap HIC Test Kit 和RESOURCE HIC Test Kit可在八种疏水介质中选择最适合介质及最佳的纯化条件。低盐洗脱的样品可稍加稀释或直接上其它吸附性层析。 5、纯化-糖类分子固化外源凝订素如刀豆球蛋白、花生、大麦等凝集素，可结合碳水化合物的糖类残基，很适合用作分离糖化细胞膜组份、细胞、甚至亚细胞细胞器，纯化糖蛋白等。两种附上外源凝集素的Sepharose 6MB亲和层析介质，专为俘获整个细胞或大复合物，如膜囊等。 6、纯化-膜蛋白膜蛋白分离常使用去污剂以保持其活性。离子性去污剂应选用与目标蛋白相反电荷者，避免在作离子交换时和目标蛋白竞争交换介质，籍此除去去污剂。非离子性去污剂可以疏水层析除去。 7、纯化-单抗、抗原单抗多为IgG。来源主要是腹水和融合瘤培养上清液。腹水有大量白蛋白、转铁蛋白和宿主抗体等。Mabselect、Protein G和Protein A对IgG的Fc区有专一性亲和作用，能一步纯化各种不同源的IgG。血清互补剂如小牛血清可先用蛋白G预处理，在培养前除去IgG。重组蛋白A介质Mabselect和rProtein A Sepharose FF对IgG有更高的载量和专一性，基团脱落更少。脱落的rProtein A用离子交换Q Sepharose HP或凝胶过滤Superdex 200，很容易去除。疏水层析Phenyl Sepharose HP亦很适合纯化IgG。宿主抗体和污染IgG可用凝胶过滤Superdex 200在精细纯化中去除。纯化IgG抗原最有效的方法是用活化偶联介质如CNBr、NHs activated Sepharose FF偶联IgG，再进一步获取IgG抗原。 HiTrap IgM是用来纯化融合瘤细胞培养的单抗IgM，结合量达5mg IgM。HiTrap IgY是专门用来纯化IgY，结合量达100mg纯IgY。 8、纯化-重组蛋白 1.重组蛋白在设计、构建时应已融入纯化构想。样品多夹杂了破碎细胞或溶解产物，扩张柱床吸附技术STREAMLINE便很适合做粗分离。Amersham biosciences提供三个快速表达、一步纯化的融合系统。 GST融合载体使要表达的蛋白和谷胱甘肽S转移酶一起表达，然后利用Glutathione Sepharose 4B作亲和层析纯化，再利用凝血酶或因子Xa切开。 2．蛋白A融合载体使要表达的蛋白和蛋白A的IgG结合部位融合在一起表达，以IgG Sepharose 6 FF纯化。含组氨酸标记（Histidine-tagged）的融合蛋白可用Chelating Sepharose FF螯合Ni2+金属，在一般或变性条件（8M尿素）下透过组氨酸螯合融合蛋白。HisTrap试剂盒提供整套His-Tag蛋白的纯化方法。 9、纯化-包涵体蛋白包涵体蛋白往往需溶于6M盐酸胍或8M尿素中。高化学稳定性的Superose 12及Sepharose 6FF凝胶过滤介质很适合在变性条件下做纯化。变性纯化后的蛋白需要复性至蛋白的天然构象。Superdex 75、Q Sepharose FF和Phenyl Sepharose FF分别被发现有助包涵体蛋白的复性。一般包涵体蛋白样品的纯度越高，复性效果越好。SOURCE 30 RPC反相层析介质很适合纯化复性前的粗品，并可以1MnaOH重生。此方法纯化后的包涵体蛋白，复性回收率明显提高。 10、包涵体蛋白固相复性近年许多文献报导将包涵体蛋白在变性条件下固定（吸附）在层析介质上，一般用各种Sepharose FF离子交换层析介质。去除变性剂后，蛋白在介质上成功复性，再将复性好的蛋白洗脱下来。固相复性避免了一般复性过程中蛋白质聚体的形成，所以复性得率更高，而且无需大量稀释样品，并将复性和初纯化合二为一，大大节省时间及提高回收率。固相复性方法也被用于以HiTrap Chelating金属螯合层析直接复性及纯化包涵体形式表达的组氨酸融合蛋白；以HiTrap Heparin肝素亲和层析直接复性及纯化包涵体形式表达的含多个赖氨酸的融合蛋白。两种亲和层析预装柱均可反复多次重复使用，比一般试剂盒更方便、耐用。 11、纯化-中草药有效成分中药的化学成分极其复杂。传统中药多是煎熬后服用，有效成份多较为亲水，包括生物碱、黄酮、蒽醌、皂甙、有机酸、多糖、肽和蛋白质。灵活及综合性地利用多种层析方法。如离子交换、分子筛、反相层析，更容易分离到单一活性成分。Sephadex LH-20葡聚糖凝胶同时具备吸附性层析和分子筛功能，例：如用甲醇分离黄酮甙，三糖甙先被洗下来，二糖甙其次，单糖甙随后，最后是甙元。Sephadex LH-20可使用水、醇、丙酮、氯仿等各种试剂，广泛用于各种天然产物的分离，包括生物碱、甙、黄酮、醌类、内脂、萜类、甾类等。 *生物碱在酸性缓冲液中带正电，成为盐，HiTrap SP阳离子交换层析柱可以分离许多结构非常近似的生物碱。相反，黄酮、蒽醌、皂甙、有机酸等可溶于偏碱的缓冲液中，在HiTrap Q阴离子交换柱上分离效果良好。 *一般多糖纯化大多使用分子筛如Sephadex，Sephacryl。若分子量在600KD以下，并需更高分辨率，可选择新一代的Superdex。一般植物可能含水溶性、酸溶性、碱溶性多种多糖。综合利用分子筛及离子交换层析有助进一步获各组份纯品。另外，多糖药物需去除可引起过敏的蛋白质，传统Sevag方法用丁醇脱蛋白需反复数十次。阴阳离子交换法可以一、两步快速去除多糖中残存的蛋白质。SOURCE5、15、30RPC反相层析也很适合各种中药有效成分的检测、分离和放大制备。由于中药的成分非常复杂，SOURCE反相层析可用范围为PH1-14 ，并可用1M NaOH，1M HCL清洗、再生。比传统硅胶反相层析更易于工艺优化及在位清洗，寿命也更长。 12、纯化-肽类肽类的来源有天然萃取，合成肽和重组肽三种。肽容易被酶降解，但可从有机溶剂或促溶剂中复性，所以多以高选择性的反相层析如SOURCE 30RPC、SOURCE 15RPC、SOURCE 5RPC或离子交换Minibeads、Monobeads作纯化。Superdex Peptide HR是专为肽分子纯化设计的凝胶过滤预装柱，能配合反相层析做出更精美的肽图。肽分子制备可用离子交换配合凝胶过滤Superdex 30 PG。 13、纯化-核酸、病毒核酸的纯化用于去除影响测序或PCR污染物等研究。核酸可大致上分为质粒DNA、噬菌体DNA和PCR产物等。病毒也可视作核酸大分子，和质粒DNA一样，可用分离大分子的Sephacry S-1000 SF、Superose或Sepharoce 4FF凝胶过滤介质去除杂蛋白，再配合离子交换如Mono Q、 SOURCE Q分离核酸。 14.纯化-寡核苷酸寡酸苷酸多应用在反义(anti-sense)DNA、RNA测序、PCR和cDNA合成等研究。合成后含三苯甲基的寡核苷酸以阴离子交换的Mono Q或快速低反压的SOURCE Q在PH12下可除副产物，并避免凝集和保护基的脱落。载量大大高过反相层析，可用做大量制备。不含三苯甲基的失败序列可用反相柱ProRPC去除。 15.脱盐、小分子去除使用凝胶过滤介质Sephadex G10，G15，G25，G50等去除小分子，效率高，处理量可达床体积30%。只需在进样后收集首1/3-1/2柱体积的洗脱液，就可以去除该填料分离范围上限以下的小分子，简单直接。由于只是去除小分子，柱高10cm以上即可。整个过程一般可于数分钟至半小时完成。Sephadex G25系列介质专为蛋白质脱盐而设计，预装柱HiTrap Desalting（5ml）可用针筒操作。HiPrep Desalting(26ml)可在数分钟为多至10ml样品脱盐。 16、疫苗纯化使用凝胶过滤介质Sepharose 4FF纯化疫苗，去除培养基中的杂蛋白，处理量可大于床体积10%。柱高一般40-70cm，整个过程约半至一小时。目前使用此法生产的疫苗品种有乙肝、狂犬、出血热、流感、肺结核、小儿麻痹疫苗等。分子量较小的疫苗可使用Sephacryl S-500HR，如甲肝疫苗等。查看更多

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PBS缓冲液和Hanks缓冲液的区别在哪? 实验时经常用到PBS缓冲液，但是很多文献里面也用到了Hanks缓冲液，不知道这两种缓冲液在细胞培养方面有什么区别吗?也就是说它分别适合于哪些情况? PBS ：磷酸缓冲盐溶液——具有pH缓冲作用的等渗盐溶液。PBS溶液又称磷酸盐缓冲溶液，一般选择K2HPO4和KH2PO4配制，因为钠盐溶解的较慢。根据不同pH的溶液，称量不同质量的磷酸盐，也可以用pH计调溶液的pH。PBS一般用作支持电解质。其配置方法如下：采用去离子水、KH2PO4和Na2HPO4·2H2O配制PBS溶液，按以下步骤进行： (1) 配制1/15mol/L KH2PO4，即每升水中溶解9.078克KH2PO4; (2) 配制1/15mol/LNa2HPO4·2H2O，即每升水中溶解11.876克Na2HPO4·2H2O;(3) 将18.2%(体积分数)KH2PO4溶液和81.8%Na2HPO4·2H2O混合;最终测定PBS液的PH值约为7.4。其作用接近于生理盐水，但是在实验室内比生理盐水的用途要广泛。 Hanks：平衡盐溶液——无机盐和葡萄糖浓度接近大部分动植物细胞的水平，可作为动植物细胞短期培养(保存)。 Hank's配方:NaCl 8.01;KCl 0.4;CaCl2 0.14; NaHCO3 0.35;KH2PO 4 0.06;Glucose 0.34(g/l); D-Hank' s:不含钙离子、镁离子、葡萄糖。( T7 e# L7 e, K2 N 相比较而言，hanks液中盐成分较PBS 复杂，且有葡萄糖，可为细胞提供简单的营养，而pbs中只有磷酸根，钠，钾，氯离子，只是最简单的盐平衡缓冲液，不能为细胞提供暂时的营养。关键要看你用这些液体来洗细胞还是存储细胞了 PBS 、hanks各都有两种，一种是含钙镁的，另一种是不含钙镁的：DPBS,DHANKS。 r) u7 n6 e3 R% P hanks比PBS成分稍微复杂点，一般细胞培养时用DPBS就够，Dhanks一般用到原代细胞消化分离操作实验中,一般培养用PBS就够了，感觉DHANKS上场的实验比较高级点哎，对于保护细胞活力等很有好处。 HANKS对细胞略好，不过一般洗涤等用PBS足够了。分离时，两者皆可，多数推荐HANKS，实际上差不多。如果分离时消化时间较长，建议HANKS查看更多

#PBS缓冲液

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如何给ELISA样本加样? 1.细胞上清：前处理必须是细胞离心去除，每孔直接加100μl即可。如果浓度太高需稀释时，用标准品稀释液直接稀释。 2.脑脊液：前处理必须是细胞离心去除，每孔直接加100μl即可。如果浓度太高需稀释时，用标准品稀释液直接稀释。 3.血清血浆：请加入50ul样本分析缓冲液后加50ul标本，如稀释量大，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。 ① 血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液。 ② 血浆标本，推荐用EDTA的方法收集若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于-20℃，避免反复冻融。 ③ 血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂。 ④ 标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。 ⑤ 请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。 4.组织匀浆液的样：要制备过程中需要在缓冲液中加入蛋白酶抑制剂，防止蛋白成份被内源性蛋白酶降解，造成检测结果的值偏低。因组织匀浆液的样本蛋白种类多，含量丰富，实验参照血清血浆标本的处理方法进行，否则就会影响实验结果。具体是加入50 ul样本分析缓冲液后加50 ul标本，需稀释时，请将样本与样本分析缓冲液等量加入，不足部分用标准品稀释液补充至100ul。因为目标蛋白不同，可能造成降解的蛋白类型可能不一样。查看更多

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PCR扩增不出来了怎么办? 这个问题是常见的问题，就是一个PCR实验一直都做得很好，停一段时间后再做就不行了。一通乱找原因后还是不行，很痛苦！找问题要从大到小： 1、PCR扩增体系问题用其他正在进行的且扩增正常的模板和引物证明PCR扩增体系没有问题，即PCR反应混合物、水、取液器、PCR仪、操作等都是好的（阳性对照） 2、引物问题用以前扩增产物做模板（稀释50倍），证明引物没有问题 3、只是模板问题了。因为样本降解的可能性比引物降解的可能性高得多。也可能是样本中的抑制物过多（新鲜时没有溶出来）。不要靠运气找问题，先做第一条很重要。乱找问题常常让人失去信心的。查看更多

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黑色素细胞那些事，你真的了解吗? 生活中我们会发现，不同物种和个体的肤色会表现出区域特异性。不同长度、厚度，不同身体部位的毛发色素沉积使我们有了不同的外观，如：东方人大多是黄皮肤黑头发，西方人很多是白皮肤金头发。基于黑色素的色素沉积不仅赋予人体皮肤抵御紫外线（UV）辐射的能力，而且还促进有害物质（如重金属）从体内排出。黑色素细胞起源于神经嵴，通过真皮迁移到表皮，最后迁移到毛囊。当黑色素母细胞归巢到毛囊凸起区域时，分化为黑色素细胞干细胞，黑色素细胞干细胞向下迁移并分化为毛发基质中的成熟黑色素细胞。成熟的黑色素细胞进一步分化生成黑色素，运输到周围的角质形成细胞，导致色素头发和皮肤的形成。黑色素细胞异常或功能失常引起的色素性疾病可能涉及色素沉着、感觉功能、自身免疫或恶性肿瘤等，不仅导致精神创伤，并显著影响人的社会交往。因此，黑色素细胞的研究深受关注。黑色素细胞研究进展黑色素细胞培养早期可以追溯到50年代，但直到80年代才真正建立可行的培养方法。20世纪60年代Cruickshank最-早报道体外黑色素细胞培养，由于当时技术的限制，未能大量培养出纯化的黑色素细胞。随着生物技术的发展，科学家发现在培养基中加入辅助致癌因子、霍乱毒素和血清可以获得大量的黑色素细胞。此后，黑色素细胞开始被广泛研究应用。几乎所有组织中均有黑色素细胞，但在皮肤和毛囊中发现的黑色素细胞数量最多。研究显示，黑色素细胞和角质形成细胞共同表达E-钙粘蛋白细胞粘附分子有助于缝隙连接的形成，并有助于抑制黑色素细胞增殖，表明黑色素细胞的增殖与上皮细胞密切相关。黑色素细胞生长培养基黑色素细胞培养开始使用的大多为DMEM、MEM等培养基，并添加血清、生长因子及霍乱毒素等成分。但对于原代黑色素细胞来说，由于血清成分复杂，并含有一定的细胞毒性物质和抑制剂，对细胞有去分化作用，影响细胞的功能表达，甚至影响最终研究结果。因此，不含血清或者其他天然成分的高品质培养基对原代黑色素细胞培养至关重要。古朵生物提供的黑色素细胞生长培养基不含血清和牛垂体提取物，实现高程度的标准化 ? 不含PMA（佛波醇肉豆蔻酸酯），对实验设置无不良影响 ? 对每批培养基进行细胞活力和细胞形态特征的测试 ? 培养基组分更清晰，批间差异小 ? 与所有可用的人原代黑色素细胞兼容查看更多

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血液保存液种类、主要成分及作用了解下? 1.血液保存液常用种类：配方可分为：ACD（A，枸橼酸；C，枸橼酸三钠；D，葡萄糖）与CPD（C，枸橼酸三钠；P，磷酸盐；D，葡萄糖及枸橼酸）两大类保存液。在CPD中加腺嘌呤即为CPDA-1。 2.血液保存液的主要成分及作用： ①枸橼酸盐：是所有抗凝保存液中的基本抗凝物质。最常用的是枸橼酸三钠，除抗凝作用外，它还能阻止溶血的发生。 ②枸橼酸：避免保存液中的葡萄糖在消毒中焦化。 ③葡萄糖：是红细胞代谢所必需的营养成分，可延长红细胞保存时间，且防止溶血；并减慢细胞中有机磷的消失，防止红细胞储存损伤。 ④腺嘌呤：可促进红细胞ATP合成，延长红细胞的保存期（达35d），并增强红细胞放氧功能。 ⑤磷酸盐：提高保存液pH，延长红细胞的保存期。ACD液pH较低，对保存红细胞不利，只能保存21d，且放氧能力迅速下降。CPD保存液中加入腺嘌呤与磷酸，从而延长红细胞的生存期。查看更多

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血清中常遇三大问题是? 血清，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白原分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞的起到某些保护作用。 1、如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损? 将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。长时间储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过1个月。若1次无法用完1瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 2、血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理? 沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清(400g，1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另1个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。 3、实验室如何选择适合的血清? 价格决定质量，但是总的来说这两种价格普遍偏贵，一般不是太娇气的细胞，国产的就够用了。本公司长期供应的相关产品有： ①动物血清系列：胎牛血清，特级新生牛血清，优级新生牛血清，标准新生牛血清，标准马血清，特级马血清，山羊血清，绵羊血清，兔血清，鸡血清，猪血清，大牛血清，小牛血清，狗血清，驴血清，大鼠血清，小鼠血清，豚鼠血清，巴比西鼠血清。 ②血浆系列：胎牛血浆，新生牛血浆，大牛血浆，小牛血浆，兔血浆，马血浆，山羊血浆，绵羊血浆，鸡血浆，猪血浆，狗血浆，驴血浆，大鼠血浆，小鼠血浆，豚鼠血浆。 ③脱纤维全血系列（玻璃瓶和Pet塑料瓶）：新生牛血，山羊血，绵羊血，马血，驴血，兔血，兔红细胞（20%），绵羊红细胞（20%），鸡红细胞（20%），兔红细胞（4%），绵羊红细胞4%，鸡红细胞（4%）。 ④抗凝全血系列：新生牛血，山羊血，绵羊血，马血，驴血 ⑤裂解全血（脱纤维裂解，抗凝裂解）脱纤维裂解血：小牛血，大牛血，山羊血，绵羊血，马血，驴血抗凝裂解血：小牛血，大牛血，山羊血，绵羊血，马血，驴血查看更多

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细胞培养箱的消毒和清洁该如何? 1.生化培养箱消毒：先用纯水擦拭，再用95的酒精擦拭，再照紫外就能够拉！注重周围环境的卫生就不会那么简单污染的啦！ 2.咱们的办法比较简单，先用75%酒精擦拭内壁，通风10分钟，紫外线照耀30分钟即可。 3.这么早就养细胞了，这里一般是用70％的乙醇擦拭，然后再用0.1％的新洁尔灭擦拭，不放心的话再用高锰-酸钾加甲醛1：1份额熏一遍。注重要是熏的话千万注重混合之后立刻脱离，然后密闭细胞培育室，滋味很影响的。在养细胞前消毒，不然，的确没当地放细胞。 4.一般处置是先用75%的酒精擦拭内壁，然后用甲醛高锰-酸钾熏蒸一个晚上，然后通风一整天(一起翻开紫外线照耀)。 5.熏蒸后吹一天是肯定不行的，最起码要一个星期才能够让甲醛散尽，要不细胞长欠好的。 6.先用75%酒精擦拭内壁，通风10分钟，紫外线照耀30分钟即可。 7.有的生化培养箱能加热内壁到90度，也有的带有紫外线功用。惯例应该每周用酒精擦拭内部一次。详细的操作请参阅培育箱的手册，或着征询培育箱技术支持。运用消毒剂应当心，培育箱内有检测温度、湿度和二氧化碳浓度的传感器，腐蚀性消毒剂或有机溶剂有能够损坏某些器材，请慎用。别的，挥发性的甲-醛有-毒，易燃、易爆。如果在培育箱内残留甲醛的话，细胞会死光光哦。总归，先看培育箱手册，再联络技术支持，方可满有把握啊。 8.惯例什么也不放！硫酸铜的作用是按捺细菌成长(但大都用在处置污染的孔板)。由于如今的孵箱都有抑菌功用。 9.在补充水时把水加热一下，到达培育箱的温度。 10.实验室的做法:把平皿高压灭菌后,在无菌操作台内参加过量的灭菌双蒸水或许生理盐水.再加少数新洁尔灭,浓度不要紧.细胞养的都能够. 11.把生化培养箱里的板层拿出来高压一下，箱壁用75％酒精擦一遍，换用诗乐氏擦一遍，再紫外照一夜，作用很好。查看更多

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常用实验室仪器的使用注意事项了解一下? 1.必须正确使用比色皿。（1）不可用手、滤纸、毛刷等摩擦透光面，只能用绸布和擦镜纸擦。（2）必须彻底洗净，塑料杯染了色，必须及时用乙醇荡洗，绝不可用乙醇、丙铜浸泡。（3）杯内溶液不可盛的过满过少。（4）拖动池架要轻，要到位。（5）杯内废液要倒入废液瓶，绝不允许洒在地上。（6）要区分参比杯和样品杯，不可随意互换。（7）石英杯不准放在台面上。只准放在仪器内或盒内，以防打破。 2.光源的反光镜拨杆要放置正确、到位。 3.753、752、722的显示窗不可长时间溢出。 4.仪器用完毕必须及时关闭全部电源，要节约氘灯的使用。高速冷冻离心机 1.未经过培训和考核者不能使用。 2.选择合适的转头和转速，绝不可超速使用。 3.选择合适的温度，通常4℃，除有机溶剂外不要低于零下，以免冰冻，损坏离心管和转头。 4.转头使用前必须用擦孔棒将管孔擦净，并仔细检查有无裂痕和孔底白斑。若有，转头报废。 5.离心管内装载的溶液量必须合适，不锈钢管无盖，只能装2／3，塑料管可装至肩部。管盖必须盖严绝不允许漏液。空管离心会变形。塑料管使用有机溶剂必须符合规定。 6.离心管必须成对放置，必须严格平衡，偏差＜0.1g。 7.不允许无转头空转，放取转头必须用手柄，以防转头滑落。转头要轻放、卡稳，旋下手柄时要用手扶住手柄只转转头。转头盖要盖严，无盖不准离心。 8.离心时不准打开机盖，不准扒扶在离心机上，如有异常声音和振动时立即停机。 9.转头使用后必须及时由转头室中取出、擦干，用擦孔棒将管孔仔细擦净。如有溶液溢出必须清洗干净，擦净转头室内凝水，开门凉干转头室。 10.使用离心机必须预约，用后必须登记。普通离心机 1.离心前必须仔细检查转头各孔内有无异物。 2.离心管必须仔细平衡。 3.机内若不清洁，离心管要用塑料薄膜封口。 4.必须慢起动，然后加速。 5.离心时不准开盖。 6.不准用手刹车。自动部分收集器 1.试管盘子绝不能互换。 2.所有的螺丝要拧紧，电线不要妨碍换管。 3.试管要轻放，检查有无漏管。 4.必须换到第1管位置从头开始收集，要检查换管是否对正。 5.BS型拨到自动时不可旋转定时旋钮。 6.BS型定时旋钮的锁紧螺丝不可拧的过松，否则螺母会脱落。 7.数显收集器开始自动收集前要使用秒和停（或置位）按钮置0。 8 改换收集时间后，要重新按秒和停（或置位）置0。恒流泵 1.开泵时经常注意硅胶管是否完好，绝不可漏液。 2.硅胶管要挤紧，但不可过紧。 3.硅胶管入口一端要压紧，必要时包上橡皮膏。 4.若发生漏液须立即清洗泵槽和轴套。 5.长时间不用应取下硅胶管洗净备用，每次使用后须用H2O冲洗硅胶管。电子天平 1.检查天平是否保持水平。 2.按＞0/T＜键开机，显示全部字符后接着显示0.0000g，空容器或称量纸置于称盘上，按＞0/T＜键去皮回零。 3.不准在称盘上直接称试剂。 4.称量完毕必须将天平复位，将天平内和台面清扫干净。试剂并盖原盖放好。 5.关机时按住ModeOff键至显示OFF后松开。微波炉 1.选择恰当的加热功率和时间。 2.无托盘不能加热。 3.不准空载加热。 4.试样不能直接放在托盘上加热。 5.不准加热密封容器。 6.不要盖住通风孔。 7.用毕擦净托盘。 8.严禁放入金属容器加热。超声波清洗器 1.槽内无水不准开机。 2.被清洗物品必须放在铁丝网上。主机上不准洒上水。 3.打开电源低压开关，必须予热3～5分钟后，方可开高压开关。 4.不可连续超声时间过长，槽内水温不可超过60℃。烘箱 1.烘干用110℃，灭菌用180℃，不可超温，不要随意旋动温度设定旋钮。 2.一般不要使用1的第3档升温。查看更多

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酶联免疫法与化学发光法的区别? 酶联免疫法它的中心就是让抗体与酶复合物结合，然后通过显色来检测。化学发光法是物质在化学反应过程中，其物质分子吸收化学能产生光的辐射现象，今天的文章中，上海古朵将为您区分：酶联免疫法与化学发光法的区别 1.一个生物的方法，一个化学方法！生物方法的特异性强点，干扰因素少点，结果准确点。 2.化学发光与酶联免疫都是生物学检测，只不使用的指示系统不一样，化学发光是通过光子计数来定量，酶联免疫是通过颜色深浅来区分，化学发光使用成本高、可以自动化、灵敏度高、适合疾病治疗过程中的动态观测，酶联免疫成本低、操作方便、灵敏度低，适合疾病的初期定性诊断与大面积体检。 3.包被板不同，底物不同，检测系统三种均不同。其余的抗原、抗体、酶都可相同。查看更多

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为什么你的化学试剂变质那么快? 化学试剂在贮存过程中是否会发生变质，取决于内外两个方面的因素，内因是试剂本身化学结构所决定的理化性质；外因则是试剂所处的环境条件。实验室化学试剂没有保质期，那怎么办？实验室试剂的有效期如何确定？实验室溶液、溶剂的有效期到底是多少？要做到合理保管，一要了解试剂结构与性质间关系，二要创造适应试剂贮存的外部环境。下面来深刻了解一下！化学试剂变质的原因环境主要是指贮存的温度、光照和介质。介质一般是指空气和混有的杂质。贮存室里除空气中含有的氧、二氧化碳和水蒸气以外，还往往含有存放的各种挥发性试剂扩散到空气中的蒸气，常见的有氯化氢、硝-酸、硫化氢、2氧化硫、溴、碘、yi烯、甲醛等蒸气；另外还有飘混在空气中的尘埃，其中有无机物也有有机物及各种微生物。化学试剂在一定的温度、光照、介质条件下会逐渐变化以致变质，该过程有物理变化，亦有化学变化。前者使化学试剂产生损耗，后者则能使试剂完全变质失效。引发和促使化学试剂发生变化的原因，大致可归纳如下。 a. 挥发挥发是挥发性试剂造成试剂损耗、浓度改变、规格下降的最常见的原因。挥发性试剂的一般特点是：分子量较小、沸点较低。常见的无机试剂有：浓盐酸、浓硝酸、发烟硫酸等，有机试剂则有碳原子数较少的液态物质，如：甲醇、乙醇、石油醚、汽油等。 b. 升华具有升华性质的一类试剂一般是升华热较少的分子晶体。实验室里一般有室温下升华的试剂(如碘萘等)和受热条件下升华的试剂(如硫与氯化汞)两种。这类试剂的升华主要造成损耗和污染空气。 c. 潮解和稀释能发生潮解的化学试剂为数不多，它们大部分是易溶性化合物，一般阴离子半径远小于阳离子半径，也有阴阳离子半径相近而阳离子所带电荷较多。此类试剂吸收水分在表面形成饱和溶液后，若产生的水蒸气气压小于空气中的水蒸气分压，潮解将继续进行，直至全部形成溶液。如：氢氧化钠、碱石灰等，有机物中易潮的有醋酸钠、醋酸铵等。稀释是指试剂溶液吸收空气中的水分导致浓度下降变稀的现象。发生原因与潮解一样，是外界水蒸气分压大于试剂的水蒸气分压所致。易发生稀释现象的常见试剂有浓硫酸、正磷酸、乙二醇等。 d.风化风化的原因和潮解相反，是结晶水合物的水蒸气分压高于空气中水蒸气分压的缘故。空气越干燥，风化速度越快。实验室中常见的易风化剂有：Na2CO3?10H2O、Na2SO4?7H2O、CuSO4?5H2O、MgSO4?7H2O、ZnSO4?7H2O等。发生风化虽未波及试剂的化学性质，但使试剂外观改变，质量减少。 e. 浓缩和析晶浓缩和析晶产生的原因是在环境干燥的条件下，试剂溶液的水蒸气压高于外界空气中水蒸气压，造成溶液水分的蒸发而浓缩、析晶，各种固体溶质的试剂一般均有此类现象，特别是一些浓度较大的溶液，浓缩和析晶虽对瓶中试剂性质影响不大，但也会改变其浓度、规格和外观。对某些溶点较低的有机物，在外界温度下降较大的情况下，也会发生析晶现象，比较明显的例子是冰醋酸。 f. 水解容易水解的盐类试剂大都具有共价键，凡是强酸和弱碱和弱酸和弱碱所生成的盐，遇水都会发生不同程度的水解。实验室中一些金属元素的卤化物很容易水解，如：TiCl4、AlCl3、FeCl3、SnCl2, 等，它们是带电荷高、半径小的阳离子化合物或是非惰气型的阳离子化合物。此类试剂可因易吸水水解而变质，易水解的有机物是含有酰基的化合物，如：酯、酰卤等物质。 g. 分解分解反应也是引发和促进试剂损耗和变质的原因。试剂的分解速度通常和环境温度密切相关。温度高分解速度加快，通常易分解的二元化合物其化学键键能较低。键能越低，越易分解，例如：碘化合物就比溴化物更易分解。有的分解反应还和试剂的含水量有关，如：硫酸氢铵，含水量越大，温度越高分解速度也越快。而含氧酸盐，如：硝酸盐、高锰酸盐则要在受热时才发生分解。 h. 氧化和还原通常易被氧化的是标准电极电位低，具有还原性的试剂，它的名称中常常带有“低”或“亚”字。还有部分活泼金属和非金属单质，过氧化物及某些有机试剂，常见的有硫酸亚铁、硫酸亚铁铵、亚硫酸、无水亚硫酸钠、钠、钾、钙、锌粉、还原铁粉、乙醛等。还原性越强的试剂越易因氧化而变质。使其氧化的原因是空气中的氧和具有氧化性的杂质所为。标准电极电位较高的试剂，在以固态形式存在时，通常在空气中比较稳定，如：高锰-酸钾、重铬-酸钾等。但以溶液存在时就易和空气中的一些还原性杂质，如H2S，SO2等作用而变质，如：KMnO4，Na2S2SO4，K3Fe(CN)6等溶液。 i. 非氧化——还原反应有些试剂的变质并非一定要引起元素价态的变化，即发生非氧化——还原反应也能使其失效。实验室中最常见的实例，如：生石灰因吸收水分变成熟石灰，进一步吸收二氧化碳而失效；氢氧化钠和氢氧化钾固体也因吸收二氧化碳而带有杂质，若长期暴露在空气中则完全转化成碳酸盐；此外氧化镁、氧化钡、氢氧化钡也应防止它们和空气中二氧化碳反应。 J. 聚合和缩合分子结构中含有不饱和双键或叁键的有机物质容易发生聚合，如：甲醛溶液常会聚合生成白色的三聚甲醛，氰化钾试剂也易聚合。有电荷高、半径小的中心离子形成的含氧酸盐溶液则能因缩合而析出多酸盐沉淀，如：钼酸铵溶液能缩合析出四钼酸铵沉淀，三聚甲醛经加热处理尚可重新释放出甲醛气体，但有些试剂，一旦发生聚合或缩合反应，往往是不可逆的，从而造成变质失效。 k. 光化学反应光作为一种能量也能使某些试剂反应而变质。光能引发分解反应导致银盐分解就是实例。光也能引发氧化反应，如：ben甲醛在光照下，易被空气氧化成苯甲酸，苯胺则能从无色变成棕色。此外，碘hua汞、邻苯3酚、lv仿，硫酸汞、亚铁qing化钾等也易发生光化学反应。霉变所谓霉变则指在化学试剂中霉菌滋生繁殖的现象。在空气中尘埃里含有无数菌类微生物，在一定温度条件下就能繁衍。实验室中的碳水化合物，酯类、蛋白质类试剂，含有氮、硫、磷的有机试剂正是菌类繁衍的良好营养物质和温床。上述试剂只要密闭不严与空气有所接触皆可发生霉变。查看更多

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药品的取用和保存你知道吗? 药品的取用和保存试剂试药的取用固体试药的取用液体试剂的取用试剂试药的存放试剂试药的取用试剂试药的取用在满足鉴别的前提下，从经济和环保上考虑，取用量应越少越好。如果没有说明用量，一般应按最少量取用:液体1 -2mL，固体只需要盖满试管底部。实验剩余的试剂试药既不能放回原瓶，也不要随意丢弃，要放入指定的容器内。固体试药的取用取用固体试药一般用药匙。往试管里装入固体粉末时，为避免药品沾在管口和管壁上，先使试管倾斜，把盛有试药的药匙(或用小纸条折叠成的纸槽)小心地送入试管底部，然后使试管直立起来，让药品全部落到底部。有些块状的药品可用镊子夹取。液体试剂的取用取用少量液体时可用胶头滴管吸取。取用较多量液体时可用直接倾注法:取用细口瓶里的试液时，先拿下瓶塞，倒放在桌上，然后拿起瓶子(标签应对着手心)、瓶口要紧挨着试管口，使液体缓缓地倒入试管。为防止残留在瓶口的药液流下来，腐蚀标签。一般往大口容器或容量瓶、漏斗里倾注液体时，最好用玻璃棒引流。注意：取用硫酸、硝酸浓氢氧化钠等腐蚀性较强的液体时，千万不能溅在手上或身上。另外，硝酸易挥发，应在通风处或室外使用。试剂试药的存放碘易升华且具有强烈刺激性气味，盛放在磨口的广口瓶里。浓硝酸、硝酸银见光易分解，应保存在棕色瓶中，贮放在黑暗而且温度低的地方。氢氧化钠固体易潮解，应盛放在易于密封的干燥大口瓶中保存;其溶液盛放在无色细口瓶里，瓶口用橡皮塞塞紧，不能用玻璃塞。查看更多

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简介

职业：上海古朵生物科技有限公司 - 销售经理

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地区：上海市

个人简介：上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量”的方针。查看更多

企业简介

企业名称：上海古朵生物科技有限公司

企业性质：贸易商,代理商,

主营业务：质粒载体定制，ELISA检测试剂盒，细胞培养，抗体抗原，蛋白纯化，染色液溶液，标准品对照品,微生物培...

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