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什么是细胞衰老，特征有哪些? 细胞衰老：是指细胞在执行生命活动过程中，随着时间的推移，细胞增殖与分化能力和生理功能逐渐发生衰退的变化过程。细胞的生命历程都要经过未分化、分化、生长、成熟、衰老和死亡几个阶段。衰老死亡的细胞被机体的免疫系统清除，同时新生的细胞也不断从相应的组织器官生成，以弥补衰老死亡的细胞。细胞衰老死亡与新生细胞生长的动态平衡时维持机体正常生命活动的基础。目前细胞衰老原因主要是两种学说： 1，端粒学说，认为随着细胞分裂次数增加，染色体上端粒越来越短，于是衰老； 2，自由基学说，由于细胞正常代谢过程中产生的自由基的有害作用造成的，认为生物体的衰老过程是机体的组织细胞不断产生的自由基积累结果。研究表明，衰老细胞的细胞核、细胞质和细胞膜等均有明显的变化： ①细胞内水分减少，体积变小，新陈代谢速度减慢； ②细胞内酶的活性降低； ③细胞内的色素会积累； ④细胞内呼吸速度减慢，细胞核体积增大，核膜内折，染色质收缩，颜色加深。线粒体数量减少，体积增大； ⑤细胞膜通透性功能改变，使物质运输功能降低。特征：（1）细胞结构的退行性变，如在细胞核，核膜凹陷，最终导致核膜崩解，染色质结构变化，超二倍体和异常多倍体的细胞数目增加；（2）细胞膜脆性增加选择性通透能力下降，膜受体种类、数目和对配体的敏感性等发生变化；（3）脂褐素在细胞内堆积，多种细胞器和细胞内结构发生退行性变。细胞衰老在生理学上的表现为功能衰退与代谢低下，如细胞周期停滞，细胞复制能力丧失，对促有丝分裂刺激的反应性减弱，对促凋亡因素的反应性改变；（4）细胞内酶活性中心被氧化，酶活性降低，蛋白质合成下降等。查看更多

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影响重组蛋白纯化的因素有哪些? 随着分子生物学技术的发展，以蛋白质的结构和功能为基础来认识生命现象，已经成为当代生物医药研发的关注点之一。为了研究蛋白质，首先需要进行蛋白分离和重组蛋白纯化，来得到高度纯化并且具有生物活性的蛋白质。由于每一种蛋白的性质都有不同，所以没有一种通用的蛋白纯化方法，但是总的来说，一般影响重组蛋白纯化的因素主要有以下几种： 1、蛋白的属性在进行重组蛋白纯化时，需要尽可能多的了解蛋白的属性。如蛋白的化学性质，是否容易被蛋白酶降解，是否会和一些金属离子、化学成分发生反应。蛋白的物理性质，是否对温度敏感等。还有目的蛋白表达的定位，目的蛋白表达在胞内、细胞内膜、周质空间还是胞外等。 2、细胞内形成的区域与形式细胞内区域化指的是模型细胞器对细胞的分割作用。内膜系统在细胞内形成一个个彼此隔离、相互独立的功能性结构区域，称为细胞内房室化或区域化。细胞内区域化可以扩大细胞内的表面积，为提高细胞代谢功能奠定基础，还可以形成细胞内不同的特殊微环境，有效提高了细胞新陈代谢的质量和效率。细胞内区域化还形成了一个严密而完善的细胞内体系。远慕生物可提供蛋白纯化服务！ 3、蛋白表达系统的选择一般来说蛋白表达的量依赖于所选择的蛋白表达系统。如对宿主细胞具有毒性，需要选择抗毒性的表达系统。而且不同表达系统，如大肠杆菌表达系统、酵母表达系统、CHO细胞表达系统等和培养方法都显着影响下游的处理过程。 4、菌株的背景在重组蛋白纯化的研究中，尤其是大肠杆菌表达纯化时，需要注意宿主菌的选择。多数人会直接选择自己实验室曾经用过的表达菌株，或者是载体配套的菌株，而不去追究原因，即使表达结果不佳，大多在表达条件和载体上找原因，也不会考究菌株的选择是否适合。菌株的背景很重要，如菌株内源的蛋白酶过多，可能会造成外源表达产物的不稳定，所以一些蛋白酶缺陷型菌株往往成为理想的起始表达菌株。在决定是否使用何种菌株时，还需要注意不同菌株有时已经携带某个质粒或者已经具有某种抗生素抗性，要注意自己的表达质粒是否能与之兼容。而且为了得到正确折叠的目的蛋白，在诱导方式的选择上，需要考虑表达菌株的一些情况。如表达菌种的生长情况，菌种是否健壮、是否是单克隆菌种、菌体的浓度是否适合诱导。生长状态不好的表达菌，一方面会造成目的蛋白的错误折叠，造成蛋白大小、形态等发生改变，另一方面会因为IPTG的加入，导致菌体死亡或者降解。 5、表达蛋白的应用蛋白表达、分离、纯化可以探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理、供作结构与功能的研究和作为催化剂、营养剂等。选择表达载体时，要根据所表达蛋白的最终应用考虑。如为方便纯化，可选择融合表达；如为获得天然蛋白，可选择非融合表达。培养条件的选择也很重要，在实际的操作中，需要根据实际情况先小量摸索蛋白纯化条件，待最佳条件确定，可以按照比例放大来纯化目的蛋白。查看更多

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生物医药

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什么是免疫球蛋白? 免疫球蛋白是一组具有抗体活性的球蛋白，存在于血清、体液、外分泌液和一些细胞膜上，免疫球蛋白的英文写作immunoglobulin，一般常缩写为Ig，通常可以分为五类，即IgA、IgG、IgM、IgD、IgE。免疫球蛋白测定的目的在于了解机体的免疫功能，了解人体对各种病毒、细菌的抵抗力、机体对各种抗原入侵的识别能力。查看更多

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生物医药

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如何选择牛血清白蛋白种类? 牛血清白蛋白(BSA)产品种类繁多，可满足不同种的应用。但是该怎么选择呢，目前BSA大致分为标准级BSA、BSA第五组分、无IgG试剂级BSA、无蛋白酶BSA、无脂肪酸BSA、低内毒素BSA、无蛋白酶/IgG BSA、诊断级BSA。我们一起来看一下他们的区别：标准级BSA 经热处理的普通BSA产品，可作为组织细胞（微生物、动物及昆虫细胞等）培养养料和培养成分以及蛋白分子量标准组份，为性价比较高的BSA产品， BSA第五组分 BSA第五组分较普通的BSA纯度更高。BSA第五组分使用Cohn方法纯化而来，是生物技术级的产品，一般可用于细胞培养，也可作为半抗原载体、保护剂以及蛋白补充物对照等。无IgG试剂级BSA 试剂纯级BSA比BSA第五组分具有更好的纯度，该粉末中不含有可能会干扰分析的球蛋白IgG成分。可作为组织细胞培养养料和培养成分以及蛋白分子量标准组份。无蛋白酶BSA 无蛋白酶的牛血清白蛋白可用于细胞培养生产蛋白实验，尤其适用于表达对蛋白酶活性敏感的蛋白。另外无蛋白酶的牛血清白蛋白也非常适合。无脂肪酸BSA 无脂肪酸BSA可用于脂肪代谢相关分析的载体蛋白，也可与某种特异性的脂肪酸结合以形成白蛋白，可应用于增强细胞培养体系的性能；若实验中脂肪或脂肪酸的存在影响激素或者胆固醇的读数时，这个产品是首选。低内毒素BSA 低内毒素牛血清白蛋白是细胞和组织培养非常理想的选择。可作为无血清和合成培养基营养补充剂的载体，另外作为实验室的一般试剂用来稳定和稀释敏感蛋白溶液，也可以作为诊断、分析工具，如ELISA。无蛋白酶/IgG BSA 不含有蛋白酶以及RNase酶活性，同时不含IgG，纯度等级更高，作为稀释液或封闭液应用于EIA和ELISA等试验中。诊断级BSA 诊断级牛血清白蛋白粉末是专门用于减少可能会产生背景干扰以及细胞培养体系抑制等因素，不含蛋白酶、生物负载以及IgG，具有很低活性的内毒素（低于3.0 EU/mg）。可用于蛋白标准品、稀释剂、偶联物或者酶稳定剂，也可以应用于高灵敏度的免疫分析实验、细胞培养以及杂交实验等。查看更多

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为啥非得要用琼脂糖凝胶做电泳载体? 常用的电泳实验载体： 1、醋酸纤维素薄膜电泳：醋酸纤维素薄膜电泳是以醋酸纤维素薄膜为支持物，它是纤维素的醋酸酯，由纤维素的羟基经乙酰化而制成。 2、琼脂糖凝胶电泳：琼脂糖凝胶电泳是一种以琼脂糖凝胶为支持物的凝胶电泳。 3、聚丙烯酰胺凝胶电泳：聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂又称为共聚体的N,N’-甲叉双丙烯酰胺（简称Bis）在加速剂和催化剂的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称PAGE)。 4、等电聚焦电泳：等电聚焦电泳是利用具有pH梯度的电泳介质来分离等电点(pI)不同的蛋白质的电泳技术。琼脂糖凝胶电泳其分析原理与其它支持物电泳的最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有网络结构，直接参与带电颗粒的分离过程，在电泳中，物质分子通过空隙时会受到阻力，大分子物质在泳动时受到的阻力比小分子大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅依赖于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大地提高了分辨能力。琼脂糖系天然的琼脂加工制得，天然琼脂是一种多聚糖，主要由琼脂糖（约占80%）及琼脂胶组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷。而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象。所以常用于血清蛋白、血红蛋白、脂蛋白、糖蛋白、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶等同工酶的分离和鉴定，为临床某些疾病的鉴别诊断提供了可靠的依据。与免疫化学反应相结合发展成为免疫电泳技术，用于分离和检测抗原。可对目前常用的琼脂糖进行某些修饰，如引入化学基团羟乙基，则可使琼脂糖在65℃左右便能熔化，被称为低熔点琼脂糖。该温度低于DNA的熔点，而且凝胶强度又无明显改变。以此为支持物进行电泳，称为低熔点琼脂糖凝胶电泳，主要应用于DNA研究。如DNA鉴定，DNA限制性内切酶图谱制作等，为DNA分子及其片段分子量测定和DNA分子构象的分析提供了重要手段。总结琼脂糖凝胶电泳的优点如下： 1. 琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理就可以进行电泳。 2. 琼脂糖凝胶结构均匀，含水量大(约占98%~99%)，近似自由电泳，样品扩散较自由电流，对样品吸附极微，因此电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。 3. 琼脂糖透明无紫外吸收，电泳过程和结果可直接用紫外光灯检测及定量测定。 4. 电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。制成干膜可长期保存。查看更多

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化学试剂的性质对有效期的影响? 化学试剂都没有注明保质期，确定试剂是否变质主要是凭经验和做新旧试剂对比试验。要了解化学试剂的理化性质，化学试剂的有效期随着化学品的化学性质的改变，有着很大的区别。一般情况下，化学性质稳定的物质，保存有效期就越长，保存条件也简单。初步判断一个物质的稳定性，可遵循以下几个原则。无机化合物，只要妥善保管，包装完好无损，理论上可以无限期使用。但是，那些容易氧化(如亚硫酸盐、苯酚、亚铁盐、碘化物、硫化物等应将其固体或晶体密封保存，不宜长期存放;其水溶液亚硫酸、氢硫酸溶液要密封存放;钾、钠、白磷更要采用液封形式)、容易潮解的物质，在避光、阴凉、干燥的条件下，只能短时间(1～5 年)内保存，具体要看包装和储存条件是否符合规定。有机小分子量化合物一般挥发性较强，包装的密闭性要好，可以长时间保存(3～5 年)。但容易氧化、受热分解、容易聚合、光敏性物质等，在避光、阴凉、干燥的条件下，只能短时间(1～5 年)内保存，具体要看包装和储存条件是否符合规定。有机高分子，尤其是油脂、多糖、蛋白、酶、多肽等生命材料，极易受到微生物、温度、光照的影响，而失去活性，或变质腐败，故此，要冷藏(冻)保存，而且时间也较短。基准物质、标准物质和高纯物质，原则上要严格按照保存规定来保存，确保包装完好无损，避免受到化学环境的影响，而且保存时间不宜过长。一般情况下，基准物质必须在有效期内使用。GB/T 601-2002 中对标准溶液的有效期有明确的规定：在常温(15?C~25?C)下保存时间一般不超过2个月。超过两个月要重新标定或检查之后再用。培养基：按规定配制并消毒好培养基，冷至室温，保存在阴暗处(尽可能贮藏在冰箱内)，配制好的培养基应在一个月内用完，具体见培养基制备操作规程。除另有规定外、试液、缓冲液、指示剂(液)的有效期均为半年。HPLC 用的流动相、纯化水有效期为15 天。检验用的试剂、配制的试液必须贴好标签，配制的试液必须做好配制记录，其中培养基还必须做使用记录，标准滴定液领用后应做使用记录。检验用试剂的有效期必须在贮存期内。除另有规定外，液体试剂开启后一年内有效，固体试剂开启后三年内有效。查看更多

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分析药物质量标准的方法有哪些? 目的是证明采用的方法适合于相应的检测要求。验证内容：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。一、准确度：是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般以百分回收率表示。至少用9次测定结果进行评价。二、精密度：是指在规定的条件下，同一个均匀样品，经过多次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。 1、重复性：相同条件下，一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性。至少9次。 2、中间精密度：一个实验室，不同时间不同分析人员用不同设备测定结果的精密度。 3、重现性：不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。分析方法被法定标准采用应进行重现性试验。三、专属性：指在其他成分可能存在的情况下，采用的方法能准确测定出被测物的特性，用于复杂样品分析时相互干扰的程度。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，圴应考察专属性。四、检测限：指试样中被测物能被检测出的zui低量，无须定量。用百分数、ppm或ppb表示。五、定量限：指样品中被测物能被定量测定的zui低量，测定结果应具一定的精密度和准确度。六、线性：系指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。七、范围：能达到一定的精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。八、耐用性：指在一定的测定条件稍有变动时，测定结果不受影响的承受程度。查看更多

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工艺技术

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如何避免菌落总数的误操作? 菌落总数是评价食品卫生质量的重要指标，其检测工作在某种程度上具有相当的不可比性，这就要求检测人员要严格执行科学的操作程序。下面带大家了解下检测中容易出现的问题。 1、样品的制备和稀释倍数的选择对于冰冻的样品，在接种前要放到0~4℃的冰箱中解冻。固体样品要用灭菌刀或镊子从不同部位采取试验材料并混合，在无菌操作下充分研细，混匀，做成均匀稀释液。样品制备的整个过程都应在无菌状态下进行，以防污染。任何样品在打开包装前，都要在取样开口处的周围表面进行消毒。以上过程的误操作是：冰冻样品的解冻时间过长，导致细菌增殖，使实测结果偏高；固体样品取样不均衡，稀释液未充分混匀，使所测结果准确度降低；取样时未进行外包装消毒，引起样品污染。充气饮料应在无菌条件下进行排气；酸性样品用经过灭菌的20~30% 碳酸钠溶液调整pH 值到中性；含盐量较高的样品应用灭菌蒸馏水进行稀释。误操作是：充气饮料未经排气，使样品接种量偏低；酸性样品未调pH 值，使不适合酸性状态下生长的细菌受抑制；高盐样品仍用生理盐水进行稀释，使不适于高盐状态下生长的细菌受抑制，结果均使实测值偏低。不同的食品其「菌落总数」的检出限量也不一致。酱油、奶制品、熟肉制品等细菌含量一般偏高，稀释度可相应选择较大的，如1:100 和1:1000 等，而饮料、糕点类样品中细菌量偏低，稀释度应选择较小的，如液体样品可选原样，固体样品选1:10 等。误操作是或者选择的稀释度过大，使得菌落生长稀少，或者稀释度过小，菌落生长密度高，难以计数，导致实测结果或偏高或偏低。 2、接种、培养过程中应注意的问题接种时，用移液管吸取稀释液不应用吸球，而要用管口上部塞有脱脂棉球的经过高温烘烤的移液管，并且用嘴吸取，以防产生交叉污染。稀释液加入平皿后，应在尽可能快的时间内倾入琼脂（倾倒琼脂时，应保证琼脂温度在50~60℃，温度过高，易杀死细菌；温度过低，则琼脂提前凝固，导致检测失败），并立即在桌面上推旋平皿，使样液与琼脂混合均匀，切忌推旋动作过大，将琼脂溅到平皿盖上，影响测定结果。平皿内琼脂凝固后，不要长久放置后才翻转平皿培养，而应在琼脂凝固后立即将平皿翻转予以培养，这样可避免菌落蔓延生长，难以计数。配制、分装稀释液或倾注平板不能在日光直射下进行，以防强烈的日光将细菌杀死。在培养时，恒温培养箱的温度不能过高，以免出现蔓延生菌的趋势，但也要防止因通风和空气循环而造成的培养基太干，而影响细菌的正常生长。 3、灭菌消毒过程中应注意的问题细菌检测过程中所用到的一切用具和培养基都需经过灭菌程序。接种室要经常用消毒液进行地面、墙面和桌面的消毒处理。实验进行前，还要经紫外灯照射杀菌。检测人员的实验服也要经常用消毒液浸泡消毒。凡是能在高温下烘烤的玻璃器皿、金属器械等都应用专用纸包好并在170℃烘烤3 小时以上，以彻底灭菌。培养基和液体试剂，则要在高压锅内进行灭菌。高压锅使用时应注意在升压前要放净锅内残存的空气，以保证所需的压力，达到灭菌效果。灭菌效果的好坏可通过空白试验确定。空白试验有空气空白、稀释用水空白、器皿空白等，完美的空白试验平板上应该无细菌生长。 4、菌落计数和检测结果报告中应注意的问题菌落计数在完成培养后应立即进行，以防细菌继续生长蔓延影响实测结果。由于不小心、视力疲劳或菌落没有辨认好，均可导致错误的结果，因此，检测人员在计数时应采取多人同时进行计数的方法，以避免这种情况造成的误差。如果所有稀释度的平板均无细菌生长，则检测报告应以最低稀释度报出，如最低稀释度为1，则报为＜1；若最低稀释度为1:10，则报为＜10，而不能报为「未检出」。以上所述，均是在实际检测「菌落总数」过程中易发生误操作之处。只有检测人员严格按要求进行实际操作，避免产生上述错误，才能保证科学、准确地得出符合样品实际的检测结果，体现技术监督检测工作的科学性和公正性。查看更多

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工艺技术

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这些实验操作坏习惯，你中招了吗？？良好的实验习惯是实验成功的基础，养成良好的实验习惯我们一说再说，好习惯对实验人员的影响我们也是深有体会，以往我们也会分享如何养成良好的实验习惯，可是有时候很多人明知道自己的操作是错的，但是已经习惯了，或者图省事，就一直错下去。这样不仅会给自己的实验数据带来不确定性，甚至还会影响到他人，得不偿失。那么今天，小编就不和大家说好习惯，我们来聊聊那些坏的实验习惯，看看你有有没有。实验过程中的坏习惯 1.样品称量或者测定的时候，把数据先记录在草稿纸上，样品做完再抄到记录本上去；有时候实验完毕才统一填写记录； 2.需要计时的步骤，使用手机或者电脑上的时间，控制得不严格； 3.气相色谱分析的时候，注射器针头直接用手指蹭下，不用滤纸擦拭； 4.洗完手以后直接在白大褂的屁股位置擦； 5.为贪图省事，实验室门经常不关，导致环境条件得不到有效的控制； 6.仪器还没降到限度以下，就开始关仪器。前处理过程中的坏习惯 1.称量前，不校正，不看水平气泡是否在中心地带； 2.天平还没稳定就开始称量、计数； 3.使用天平的时候，喜欢用手指尖按按钮，按钮都被按坏了； 4.称量样品时，多次重复使用称量纸； 5.有时候不戴手套进行称量或其他操作； 6.配置酸碱时不在通风橱内进行； 7.定容最后环节不采用滴管，而是直接用洗瓶，定容得不太准确，常常是静置后会超出刻度线； 8.定容时，不平视容量瓶刻度线； 9.看滴定量的时候，不把滴定管取下，直接看； 10.配置溶液时不记录步骤； 11.用药匙取料，多余的药品仍返回瓶内； 12.不注重进入实验区的穿戴：拖鞋上下阵，有时不穿白大褂，赤手取物品。实验完成后的坏习惯 1.实验室废液直接倒入下水池，而不是处理回收； 2.做完滴定，滴定管的液体不及时倒掉，有时候会放置很久； 3.用过的平板、培养液随手乱扔； 4.使用天平完毕后，不关闭天平门； 5.将实验室专用服装穿到实验室外如食堂等地。如果说坏习惯带来的问题，仅仅是实验这一层面的，我觉得问题也不会很大，大不了实验失败，重新来一次而已。但是如果因此产生了安全隐患，影响人身安全或导致环境污染，人生就没有再来一次的选择了。查看更多

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细胞及分子

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细胞系与细胞株有何不同? 各种已被命名和经过细胞生物学鉴定的细胞系或细胞株，都是一些形态比较均一、生长增殖比较稳定的和生物性状清楚的细胞群。因此凡符合上述情况的细胞群也可给以相应的名称，即文献中常称之为已鉴定的细胞（Certified Cells）。已鉴定的细胞可用于各种实验研究和生产生物制品，当前世界上已建的各种细胞系（株）已难胜数。体外培养细胞的种类和命名体外培养细胞的名称，随培养细胞技术的发展和细胞种类的增多而演变。最早采用的名称为细胞株（Cell strain），以后又出现细胞系（Cell Line）一词，两者曾一度混用致概念不明确，导致文献中也很混乱。名词的由来细胞株（cell strain）最初为W.Earle（1940）所采用，他把自己建立的小鼠结缔组织L系称为“株”，1951年，George Gey把其建立的人体宫颈癌细胞Hela系称为“株”。1954年，White另外使用了“系”来称呼A Carrel培养的鸡胚心脏的细胞群，细胞系（cell line）由此产生，之后这两个名词长期混用。即使在1979年国际组织培养协会专业术语委员会颁布“专业名词建议”和1984年在宁波召开的全国动物组织和细胞培养会议通过“动物细胞、组织和器官培养技术中的一些术语的译名和解释”之后，到目前为止国内对这两个名词的使用仍是混乱的，不仅在商品名中混用，在专业文献中亦有混用现象。现将细胞系和细胞株区分如下： 1、细胞系（Cell Line）：原代培养物经首次传代成功即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系（Lineage of Cells）所组成。 2、细胞株（Cell Strain）：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。如果不能继续传代或传代数有限，称为有限细胞株（finitecell strain）；如果可以连续传代，称为连续细胞株（continuous cell strain）。对于人类肿瘤细胞，在体外培养半年以上，生长稳定，并连续传代的即可称为连续性株或系。因此，细胞系泛指可传代的细胞，细胞株是具有特殊性质的细胞系。（一）初代培养初代培养又称原代培养，即直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养物。一旦已进行传代培养（Subculture）的细胞，便不再称为初代培养，而改称为细胞系。（二）细胞系初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。如细胞系的生存期有限，则称之为有限细胞系（Finite Cell Line）；已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系（Infinite Cell Line）。无限细胞系大多已发生异倍化，具异倍体核型，有的可能已成为恶性细胞，因此本质上已是发生转化的细胞系。无限细胞系有的只有永生性（或不死性），但仍保留接触抑制和无异体接种致癌性；有的不仅有永生性，异体接种也有致瘤性，说明已恶性化。这两种不同性质的无限细胞系，在国内外文献中对这些名词的应用上也常不十分严格。为概念上的明确，对有恶性的无限细胞系采用“恶性转化细胞系”一词表示可能更妥。而对那些只具永生性而无恶性的细胞系，则用无限细胞系或转化细胞系即可。如 NIH3T3、Rat-1、10T1/2等均属这类细胞系。由某一细胞系分离出来的、在性状上与原细胞系不同的细胞系，称该细胞系的亚系（Subline）。（三）克隆细胞株从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株。再由原细胞株进一步分离培养出与原株性状不同的细胞群，亦可称之为亚株（Substrain）（四）二倍体细胞细胞群染色体数目具有与原供体二倍细胞染色体数相同或基本相同（2n细胞占75％或80％以上）的细胞群，称二倍体细胞培养。如仅数目相同，而核型不同的即染色体形态有改变者为假二倍体。二倍体细胞在正常情况下具有限生命期，故属有限细胞系。但随供体年龄和组织细胞的不同，二倍体细胞的寿命长短各异。人胚肺成纤维细胞可传50代土10代，人胚肾只有8～10代，人胚神经胶质细胞15～30代；如从老龄个体取可传50则细胞生存期更短。由不同年龄供体取材建立的二倍体细胞系可供研究衰老之用。为保持二倍体细胞能长期被利用，一般在初代或2～5代即大量冻存作为原种（Stook Cells），用时再进行繁殖，用后再继续冻存，可供长期使用或延缓细胞的衰老。查看更多

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怎样来鉴别反转录cDNA的质量? 用内参引物做一下Realtime PCR就行了，常见的ACTB、GAPDH、18S都可。一般大型实验室都会有自己独门的内参引物。如果Ct值在9~18之间，一般质量都不会有太大问题。查看更多

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细胞被支原体污染了会有哪些表现? 细胞培养被支原体污染是个世界性问题，在细胞培养中支原体感染发生率达到63%。支原体是一类无细胞壁，形态呈高度多形性，为圆形、丝状或梨形，其直径仅有0.13～0.18μm，变形能力大，故能通过滤菌器，最突出的结构特征是没有细胞壁，对作用于细胞壁生物合成的抗生素不敏感。研究表明，支原体能耗尽营养物，促进代谢积累，导致pH改变，对细胞造成多种影响，包括生长状况、生化特性、代谢、免疫、以及细胞存活等多方面的改变，继而干扰实验结果，或造成无法解释的差异。更加不幸的是拯救被感染的细胞几乎是不可能的。那如何检测你的细胞是否收到支原体的入侵呢?下面介绍了几种检测方式，或许对你的实验有用。分离培养法分离培养法是支原体检测的金标方法，其检测精确度最高。这种方法是从可疑的细胞培养体系中取样，并接种到最适宜支原体生长的琼脂平板上。如果样本中含有支原体，它们就会在这种琼脂平板上疯狂生长，最终形成明显可见的特征性菌落。分离培养法基本不会出现假阴性结果，因此被誉为支原体检测金标准。但是，分离培养法也存在两个弊端，一是检测时间太长，支原体要长出明显克隆至少需要4周时间。二是尽管可以检测绝大多数支原体种类，分离培养法也有力所不及的时候，例如支原体M. hyorhinis。 DNA检测法，也称直接培养法将可疑样品与指示细胞共同培养，一般需要几天时间。DNA检测所用的指示细胞通常是细胞质区域较大的Vero细胞，如果原样本中含有支原体，那么当细胞DNA被荧光染料(如Hoechst染料)染色时，就可以在指示细胞的核周围观察到荧光斑点或荧光颗粒。但是这种方法灵敏度太低，当检测成阳性时，细胞经常已经严重污染。且Hoechst荧光染色：操作复杂，操作不当易造成假阳性或假阴性。 PCR法 PCR法采用针对支原体DNA的引物用PCR检测可疑样本，其PCR引物可特异扩增支原体基因组中rDNA保守序列，包括所有已知的支原体，及细胞培养过程普遍遇到的种属，例如M. arginini、M. arthritidis、M. bovis、M. fermentans、M. genitalium、M. hominis、M. hyorhinis、M. neurolyticum、M. orale、M. pirum、M. pneumoniae、M. pulmonis、M. salivarium 和U. urealyticum。在凝胶电泳过程中，支原体DNA会显示为特异性条带，以此指示支原体的存在。 PCR法快速，简便，具有强扩增能力和极高的敏感性，可以检测大多数支原体，但谨慎起见最好同时使用另一种检测方法来进行验证。PCR法检测支原体只需几个小时，是最快但也是最不灵敏的支原体检测方法。酶学检测酶学检测是将可疑样本添加到特定底物中，在这一体系内支原体的酶可以将ADP转化为ATP，随后能利用ATP发光的luciferase酶就可以指示支原体的存在。最后，建议你进行定期检测支原体感染会影响细胞的正常生长，因此对培养细胞定期进行支原体检测非常重要。一般来说每1至3个月就应该进行一次支原体检测。将定期支原体检测常规化坚持下去，是细胞培养实验室应对支原体感染的关键。查看更多

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培养基不能凝固的原因是什么? 培养基不能凝固 ①培养基制备过程中过度加热 ②低pH值造成培养基酸解 ③琼脂使用量不正确 ④琼脂未完全溶解 ⑤培养基成分未充分混匀查看更多

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标准品对照品为啥总是被混用? 标准品实际上就是大家所说的标准物品，它所充当的角色就是衡量标准，专门用做药物方面对照品的一种衡量标准，即为含量测定中的标准含量。标准品种类也是多式多样的，常见的有冶金标准品、化学计量标准品和药检标准品等。虽然标准品与对照品有一定的区别，但是标准品或对照品混用的现象是司空见惯的，这就带来了一定的麻烦。那么，为什么会出现标准品或对照品混用的情况呢?下面小编来给大家简单分析一下其原因。为什么会出现标准品或对照品混用的情况呢： (1)卫生部提供的对照品使用说明书不够详尽，极其关键部分并没有做一个详尽的介绍，大多无对照品质量要求及标定方法，这就使得人们在使用标准品和对照品的时候出现了纰漏。 (2)使用者们对标准品或者对照品，甚至是两者的正确使用方法知识相当的缺乏，正所谓要使用一个东西就必须对其有一个充分的了解，所以在不了解的情况下出现错误是情理之中的。 (3)日常科研中极难找到相应的对照品，所以科研人员就只好用标准品代替对照品，久而久之大家就搞混了两者的区别。 (4)中国药典正文中也常存在对照品混用的问题，如常将含量测定用的标准品或对照品用于溶出度检查，而含量测定方法与溶出度分析方法又不同，故极易引起混用。总而言之，上述所介绍的四点就是标准品和对照品常常出现混用情况的原因，希望大家在彻底了解了其相关原因之后，能够竭尽所能的改正自己常常犯的错误，在使用标准品或者对照品的时候，大家务必要认真检测自己是否拿错了，接着看看标准品和对照品的说明书，然后在正确将其投入使用中。查看更多

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如何根据实验需要制备斜面? 答：根据实验需求，摆放斜面一般有三种形式：（1）长斜面：斜面底部刚覆盖试管底部，上部距管口2.5-3cm左右；例如TSA传代斜面。（2）高层斜面：斜面与底层高度约为2:3，即底部高约3cm，斜面长度约2cm；如三糖铁高层斜面。（3）普通斜面：斜面底部距试管底部约1cm，上部距管口约2.5-3cm。查看更多

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为什么要进行样品前处理? 1.复杂体系中将待测组分与基体进行分离，并通过纯化和富集以提高浓度，制成便于测定的溶液形式 2.除去对分析测定有干扰的杂质； 3.通过样品衍生技术处理样品使原本对检测器响应弱或无响应的样品定量地转化成一种易于检测的化合物。查看更多

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怎么看PCR扩增电泳条带分析? PCR扩增后一般进行琼脂糖凝胶电泳分析，电泳后一般有以下几种条带： 1、引物带。引物浓度过高或是扩增效率不是特别高时都会有，一般不呈现为细带，为发散状；如果目的扩增产物带和引物带都很亮，可以考虑适当降低引物量。 2、引物二聚体带。比引物跑得慢一点，条带清晰，但如果扩增产物小于100bp时，产物与引物二聚体就不好分别了，建议采用DNA聚丙烯酰胺电泳（不是蛋白质的SDS聚丙烯酰胺电泳）；如果引物二聚体在优化复性温度后仍然严重影响目的产物的扩增，优先考虑更换引物设计（因为引物合成的成本比反复优化条件的成本低） 3、目的扩增产物带。其大小与设计大小相同，条带清晰。 4、非特异扩增产物带。其大小与设计大小不相同，条带清晰。一般考虑通过提高复性温度来减少或消除（也可用温度梯度功能来寻找zui佳的复性温度，东胜龙811型PCR仪就有此功能）。如果其片段大小比目的片段大较多，可以通过减少延伸时间来减少或消除（即不给它足够的延伸时间）。还有一种非特异扩增产物带是来自于逆转录PCR实验时的基因组DNA的污染，如果目的扩增产物中有内含子，扩增产物很可能大于目的基因。这种条带通过优化复性温度是不能消除的，可以在逆转录前用无RNA酶的DNA酶进行样本处理。 5、模板DNA带。模板浓度过高时可能出现。如果是基因组DNA为模板，条带可能会很乱且较大。一般进行PCR扩增时，模板浓度都不要太大，否则会产生一些比目的基因长一点的杂质DNA（可能不成条带，也看不到），这是由PCR扩增原理造成的。 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及，④PCR循环条件。当结果分析出现假阴性，不出现扩增条带时，寻找原因进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应固定不宜随意更改。酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭。引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。有些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度高，一条浓度低，造成低效率的不对称扩增，对策为：①选定一个好的引物合成单位。②引物的浓度不仅要看OD值，更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳，一定要有引物条带出现，而且两引物带的亮度应大体一致，如一条引物有条带，一条引物无条带，此时做PCR有可能失败，应和引物合成单位协商解决。如一条引物亮度高，一条亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度。③引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效。④引物设计不合理，如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。或100ul，应用多大体积进行PCR扩增，是根据科研和临床检测不同目的而设定，在做小体积如20ul 后，再做大体积时，一定要模索条件，否则容易失败。物理原因：变性对PCR扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性；退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。有时还有必要用标准的温度计，检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度，这也是PCR失败的原因之一。靶序列变异：如靶序列发生突变或缺失，影响引物与模板特异性结合，或因靶序列某段缺失使引物与模板失去互补序列，其PCR扩增是不会成功的。查看更多

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免疫组化实验DAB显色时间如何把握? （1）DAB显色时间不是固定的，主要由显微镜下控制显色时间，到出现浅棕色本底时即可冲洗；（2）DAB显色时间很短（如几秒或几十秒）就出现很深的棕褐色，这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长，需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间；（3）此外，若很短时间就出现背景很深，还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全，需要延长封闭时间；（4）DAB显色时间很长（如超过十几分钟）才出现阳性染色，一方面可能说明你的抗体浓度过低或孵育时间过短（最好一抗4度过夜）；另一方面就是封闭时间过长。 DAB显色一定不要超过10min，最好控制在5min之内。鉴于你的结果，建议考虑以下问题： 1、一抗的有效性。 2、二抗的有效性。 3、DAB是否有效。此外，一切都没问题时，DAB显色在30秒之内即出结果，并且一定要在镜下控制，否则，时间过长，非特异性染色会出现，背景加深。查看更多

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药敏和细菌培养报告单你能看懂吗? 1、药敏试验是如何测定的？根据美国临床标准委员会推荐的纸片扩散法测定。将含有一定量抗菌药的纸片贴在涂有细菌的琼脂平板表面，35℃培养过夜，测量纸片周围抑菌圈的大小确定细菌对药物的敏感性，抑菌圈越大敏感性越高。不同细菌对不同抗菌药敏感性的判定标准不同，例如头孢噻肟对肠杆菌科细菌的抑菌圈≤14mm为R，15mm-22mm为I，≥23mm为S；苯唑西林对金黄色葡萄球菌抑菌圈≤10mm为R，11mm-12mm为I，≥13mm为S。 2、药敏试验报告中S、I、R 指的是什么？ S ：是指细菌对抗菌药敏感，使用常规剂量时的平均血浓度超过MIC 5倍以上，用常规剂量通常有效； I ：是指细菌对抗菌药中度敏感，常规剂量时平均血浓度等于或略高于MIC，需用高剂量或对体内药物浓缩部位的感染可能有效； R ：是指细菌对某种抗菌药耐药，药物对细菌的MIC 高于应用常规剂量时的血浓度，应用常规剂量治疗通常无效。 3、药敏试验中，测试抗菌药物的品种是如何选定的？抗菌药有近200种，药敏试验中没必要也不可能包括每种抗菌药。所测试的抗菌药纸片的种类是根据各类细菌对抗菌药的敏感性及临床可能选用的药物而确定的，同类药物通常只选择1-2个代表品种。NCCLS对各种细菌的药敏试验中宜测试的药物品种进行了推荐，如测定葡萄球菌属的药敏试验应包括苯唑西林、青霉素、红霉素、克林霉素、复方磺胺甲恶唑（SMZ-TMP）和万古霉素；此外可根据情况增加其他品种如氯霉素、环丙沙星、庆大霉素、利福平和呋喃妥因等。 4、为什么肠球菌属细菌药敏报告的测定药物这么少？对头孢菌素类和多种抗菌药天然耐药，故药敏试验中所包括的抗菌药品种较少，NCCLS 推荐的测试品种为氨苄西林或青霉素、万古霉素（去甲万古霉素），此外亦可增加庆大霉素、氯霉素、红霉素、利福平、环丙沙星和呋喃妥因等，后两者适用于尿标本。 5、细菌对多种抗菌药物敏感时，如何选择最有效药物？应根据感染部位、病情严重程度、药物的抗菌作用及药动学特点选择抗菌药。 6、是否所有阳性培养均有临床意义？并非所有阳性培养都是真正的病原菌，原因可能有： ①所报告细菌为污染菌，细菌培养结果的临床意义大小与所取标本有关，如为关节液、胸腔积液等无菌标本则临床意义较大，但即使血培养阳性也可能为污染菌，据报道单次血培养凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌、肠球菌阳性，污染可能性分别为85%、52%、22%。某些标本易受污染如痰标本易于受咽喉部携带菌的污染，尿培养易受下尿道、尿道口寄居菌污染。 ②可能为应用抗菌药后的菌群交替，特别是原为复数菌感染时，针对优势菌治疗一段时间后可能非优势上升为优势菌，广谱抗菌药治疗后可能出现真菌感染，故使用抗菌药时间较长的感染，疗程中需复查细菌培养。此外影响临床疗效的因素很多，据报道药敏试验结果与临床疗效的符合率约为70%，因此细菌培养及药敏试验报告只能作为临床用药的参考，应根据患者用药后的治疗反应和临床病情调整用药。查看更多

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微生物细胞的固定方法有哪些? 微生物细胞的固定方法有主要有物理吸附法和包埋法两种. 1．物理吸附法带电的微生物细胞和载体之间的静电相互作用,使细胞体吸附固定在硅藻土、木材、玻璃、陶瓷和塑料等载体上.如酵母细胞是带负电的,在固定时要选择带正电的载体.在PH4时,热带假丝酵母、酿酒酵母等在陶瓷表面上的吸附程度较大,载体表面的40~70%被细胞牢固吸附,不会被高流培养液冲掉.载体的性质也影响细胞与载体之间的相互作用,主要是载体的成分、表面电荷、表面积和PH的影响.所有的玻璃和陶瓷都是由不同比例的氧化硅、氧化镁等组成,如将玻璃等放在溶液中,在它的表面会发生离子交换,形成不再是铝、硅等的氧化物,而为相应的氢氧化物.载体表面的羟基可被微生物细胞表面的氨基或羧基所取代,在细胞与载体之间形成键.物理吸附法固定化活细胞的酶活性不受影响,但吸附过程相当复杂,吸附过程与微生物的性质、载体的特性及细胞与载体之间发生的相互作用有关,只有这些参数配合恰当时才能形成稳定的微生物细胞-载体复合物. 2．包埋法将微生物细胞用物理的方法包埋在琼脂、海藻酸钠、明胶、聚丙烯酰胺和聚乙烯醇（PVA）等凝胶载体内,使微生物细胞固定化.一般的包埋成形法比较复杂、机械性能差、易磨损、不适于大批量生产.因而近年来一些学者又研究了一种制备珠型固定化细胞技术. 1）琼脂凝胶包埋法,称取4g琼脂或琼脂糖溶于50ml 0.2M pH7.0磷酸缓冲液中,加热溶解后,冷却到55℃左右,将细胞浓度为60%左右细菌悬浮液于40℃下保温,然后与琼脂溶液混合均匀.用注射器针头将热的混合液滴入冷的甲苯溶液,四氯乙烯溶液或液体石腊内,冷却形成2~3mm直径的小球.或将热琼脂-细菌混合液流加到搅拌下的500ml30℃的醋酸丁酯中,加完后继续搅拌3分钟,到混合物分散成小滴,迅速加入300ml冷的醋酸丁酯,再搅拌2~5分钟,倾去醋酸丁酯,抽滤干,用缓冲液洗至无醋丁酯味,即制成珠型固定化细胞,小珠约在1~3mm.使用前将球形固定化细胞放入消毒好营养液中30℃活化24小时后再用. 2）海藻酸钙凝胶包埋法称取2g海藻酸钠,加30ml生理盐水于高压灭菌锅中加热溶解、冷却到40℃,取20ml与20ml细胞浓度为50%的细菌悬浮混合均匀,然后用注射器针头滴加到0.1M氯化钙或4%的氯化钡溶液中,边滴边摇,使其形成2mm直径球型小珠,然后用生理盐水洗涤.或将混合液流加到搅拌下的200~500ml醋酸丁酯中,当分散成小滴后,迅速加入5ml 0.1M的二氯化钙溶液,继续搅拌5~10分钟,自然沉降,倾去醋酸丁脂,再加入50ml 0.1M的二氯化钙溶液,浸泡1小时,进一步固化,然后用蒸馏水彻底洗涤,即得直径为1~3mm珠型固定化细胞.干后可保存于低温下,使用前需放入消毒好的营养液中30℃活化24小时后再用.由于磷酸盐会破坏凝胶的结构,因而在使用海藻酸钠固定细胞时尽量防止磷酸盐的加入. 3）明胶包埋法称取6g明胶,加入50ml 0.1M pH7.0的磷酸缓冲液,加热溶解后冷却至40℃,取20ml与20ml细胞浓度为60%的细菌悬液在40℃混合均匀,冷却凝固后切成1~2mm3方块,然后再加2.5%戊二醛,使包埋块悬浮在戊二醛溶液中,室温下轻轻搅拌4小时进行交联,滤去戊醛后,逐次用0.1M氯化钠和去离子水洗涤后即成.或者将明胶-菌体混合液流加到200ml 20℃搅拌下的醋酸丁酯溶液中,当分散成小珠后,迅速加入5ml 5%的戊二醛溶液,继续搅拌5~10分钟,倾去醋酸丁酯,水洗即得到珠型固定化细胞,再放入50ml的pH5.0的戊二醛溶液中浸泡30分钟,然后彻底洗涤,即获得直径1~3mm的球形小珠.使用前将其放入营养液中30℃活化24小时后再用.用戊二醛交联的明胶包埋法,可获得机械强度及工作稳定性较好的固定化细胞. 4）聚丙烯酰胺凝胶包埋法,引此法是较常用的一种包埋法.聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化剂作用下聚合形成三维网状结构的凝胶.常用的催化剂和加速剂是过硫酸铵和四甲乙二胺或三乙醇胺. 称取17.6g丙烯酰胺和1.2g N—N′—甲叉双丙烯酰胺溶于0.05M pH7.0的Tris-HCl缓冲液中,取20ml与5g的湿菌泥混合均匀,加入50μl的40%过硫酸铵,混合均匀后流加到搅拌的豆油或液体石蜡中,搅拌分散成小滴,迅速加入250μl的四甲基乙二胺,小滴即很快聚合形成小珠,倾去流体,用水或缓冲液充分洗涤即可获得珠型固定化细胞.或将菌泥混合液加入1%过硫酸铵0.25ml和10%三乙醇胺4 ml,将上述混合液搅拌均匀,不要出现气泡,置于40℃恒温浴中30分钟左右,即形成聚内烯酰胺凝胶固定化细胞,在凝胶未干时切成2~3mm3小块,于50~60℃中干燥后保存.使用前将包埋好的固定化细胞放入消毒后的营养液中活化24小时再用.最常用的是包埋法.查看更多

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个人简介：上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量”的方针。查看更多

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