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慢病毒操作步骤和滴度测定注意事项? （一）慢病毒安全操作规范维真生物慢病毒载体是第三代慢病毒载体，其 3" LTR 的增强子功能发生缺失，形成了自灭活（sefl-inactivating，SIN）的 3’ LTR, 5’LTR 中的 U3 区替换成CMV，是最安全的慢病毒载体。但操作者在实验中仍需保持高度警惕，严格按照以下操作规范进行： 1．使用慢病毒载体前请向您所在机构的生物安全部门征得许可和指令。 2. 请在 BL2 生物安全二级生物安全柜中操作病毒粒子。 3. 请务必穿着实验服，佩戴一次性口罩和手套。 4. 小心操作，避免产生气雾、飞溅或洒落。 5.被病毒污染的超净工作台，请立即用加入1% SDS 的 70%乙醇溶液擦拭干净；请务必将接触病毒的枪头、离心管、培养板、培养液使用新配制的 10％漂白粉、84 消毒液或 0.6%次氯酸钠溶液浸泡1 小时以上再丢弃。 6. 装盛慢病毒的实验用品需单独放置及培养，并加以标示。 7.用显微镜观察细胞感染情况时，请先拧紧培养瓶或盖紧培养板，用 70%乙醇擦拭培养瓶外壁后，显微镜下观察拍照。观察完毕，请用70%乙醇再次擦拭显微镜实验台。 8. 离心病毒时，应使用密封性好的离心管，或用封口膜封口后进行离心，请尽量使用组织培养室内的离心机。 9. 实验完毕脱掉手套后，请立即用肥皂和水清洗双手。 10.对共用实验室的人员需进行慢病毒安全培训或提示。（二）慢病毒感染目的细胞预实验不同的细胞所使用的病毒 MOI 值会有所不同。建议在正式实验前，在目的细胞中进行预实验摸索最佳MOI 值(维真生物）。为了节省病毒，推荐使用96 孔板进行预实验。操作步骤如下： 1. 第一天细胞的准备将目的细胞接种于96 孔板中，细胞融合率为 50%为最佳。为保证细胞生长良好，请保证细胞贴壁过夜。 2. 第二天病毒的稀释取10μL 慢病毒原液加入 90μL 培养液中做1:100 稀释（10-2），以此为起点做梯度稀释直至稀释10-7。可根据实际情况降低或提高稀释倍数。 3. 第二天感染目的细胞取出提前准备好的96 孔板，用准备好的病毒稀释液替代旧培养液，注意保留未加入病毒的细胞孔作为对照组。 4. 第二至十天观察荧光或检测慢病毒对细胞的感染较慢，请在感染细胞后 48、72、96、120小时分别观察细胞中荧光表达情况（如果您选择的产品不带有荧光标签，请在 48、72、96、120小时分别收获细胞并通过 Western-Blot 或其他检测手段来检测基因表达）。注意事项：由于不同细胞对慢病毒感染过程的承受能力不同，在加入病毒稀释液后，请于 12-24 小时后观察细胞状态以确认加入的病毒量是否合适。（三）慢病毒滴度测定维真生物慢病毒单位为TU/mL, 即每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数。如：病毒滴度为 1×108 TU/mL 即每毫升病毒液中至少含有1×108个具有生物活性的慢病毒颗粒。慢病毒的病毒滴度（TU/mL）可根据荧光蛋白在HEK293细胞中表达量确定，具体操作步骤如下： 1. 第一天细胞的准备在96孔板中的每个孔中接种1-4×104个 HEK293细胞。 2．第二天病毒的稀释和感染。在Eppendorf管中做10倍梯度稀释。稀释方法为：每种病毒准备8个1.5mLEppendorf 管，每管加入297μL完全培养液，向第一个管中加入33μL病毒原液，混匀后，吸取 30μL加入第二个管混匀。依此类推，做8个稀释度（10~10-6）。弃去96孔板中原有的培养液，每个稀释度重复3个孔，每孔加入含稀释好的病毒液100μL。并做好标记。 1. 第五天荧光计数和滴度计算用荧光显微镜对荧光阳性细胞进行计数。数出最后两个能观察到荧光的孔内的荧光细胞数，计算3个重复孔内的总数之和并计算出平均数，假设为A（倒数第二个能见荧光孔的荧光细胞平均数）和B（倒数第一个能见荧光孔的荧光细胞平均数）。慢病毒病毒滴度计算公式：病毒滴度(TU/mL) = （A+B×10）×1000/2/A孔病毒量（μL）（四）慢病毒感染目的细胞进行慢病毒感染实验时可使用完全培养液（培养目的细胞用）稀释。培养液中的血清、双抗或其他营养因子不会影响慢病毒的感染效率。以24 孔培养板为例，进行 HEK293 细胞的感染实验操作步骤如下：注意事项：实验前请按照不同的 MOI 设置不同的感染孔，并根据MOI 和细胞数量计算所需要的病毒量。 1. 第一天细胞的准备在24 孔培养板接种若干孔，每个孔内接种 3-5×104 个HEK 293 细胞，铺板时细胞的融合率为 50%左右，每孔培养液体积为 300μL，进行病毒感染时细胞的融合率约为70%左右。 2. 第二天病毒的准备根据实验的实际情况和 MOI 值，用培养液准确稀释慢病毒原液。注意事项：可使用PBS 缓冲液或无血清培养液稀释病毒原液。 3. 第二天感染目的细胞在目的细胞和对照细胞中分别加入计算好的病毒液，混匀后放于二氧化碳培养箱（37 ℃、5%CO2）孵育过夜。注意事项： 1）感染前细胞的状态好坏对最终的感染效果高低影响很大，请务必保证加入病毒前，细胞处于良好的生长状态。 2）若慢病毒对目的细胞的感染效率较低，可通过提高 MOI 值提高病毒的感染效率，也可在培养液中加入助感染试剂 ADV-HR（详见附录 1、附录 4、附录 5）来提高病毒的感染效率。 4. 第三天更换培养液病毒感染细胞 24 小时后，更换培养液。注意事项：换液具体时间需视细胞状态而定。如果慢病毒对细胞有明显毒性作用，影响细胞生长状态，最短可于加病毒 4 小时后更换新鲜培养液后继续培养。 5. 第六天感染效率检测在倒置荧光显微镜观察荧光，计算慢病毒感染目的细胞的效率。如选择的慢病毒载体不带有荧光标记，可以通过 Q-PCR(定量 PCR)检测目的基因的表达来评估感染效率。注意事项： 1）慢病毒表达较慢，荧光表达所需时间较长，建议感染96 小时后观察荧光的表达。 2）感染后的细胞可以连续培养一周，通过观察荧光表达的时间和强度来确定慢病毒对目的细胞的感染情况。 3）感染期间，请根据细胞生长的情况及时换液，以保证细胞良好的生长状态。查看更多

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为啥要做细菌培养和药敏试验? 细菌培养及药敏试验是诊治感染性疾病（如肺炎、脑膜炎、泌尿道感染、结核、伤害、霍乱、败血症，以及疖、痈）全过程的关键。我们不妨把这个过程当作一次军事行动，首先侦辑元凶，接着制定方案，最后克敌制胜。细菌培养——侦缉元凶。我们知道，自然界存在着较多的微生物，其中能引起人体患病的细菌侵犯人体后，可引起各种感染性疾病。同一种细菌侵犯人体不同的部位，可引起不同疾病的发生；而同一种疾病又可由不同细菌的侵犯而引起。为了明确诊断，只有从病人的血、尿或其他分泌物中取样进行细菌培养，快速、准确地“侦缉”到病原菌。药敏试验——制定方案。由于各种细菌对抗菌药物的敏感性不同，即使同一种细菌的不同菌株对各种抗菌药物的敏感性也有差别；在治疗过程中，细菌对药物的敏感性也会发生变化；随着各种抗菌药物的广泛应用，细菌的抗药性也随之增多。只有对病原菌进行多种抗菌药物的敏感度试验，才能选择到有效的抗菌药物及浓度。临床治疗——克敌制胜。医生根据准确的细菌培养及药敏试验结果进行有效的治疗，疾病就能治愈。需要提醒的是，细菌培养标本的正确采集对疾病的早期快速诊断极为重要。应严格在无菌的条件下由医务人员取样，由病人自己取样的应严格按要求留取。标本采集的时间应在抗菌药物使用前，如使用了抗菌药物应停药1-2天后再取样或向医生说明情况。另外，通过细菌培养和药敏试验，药剂科管理人员可以了解所在医院感染状况及病原菌耐药性的流行全部资料。自己配合医师在治疗中尽量地参照检验报告，选用抗菌谱窄、耐药性产生不大的抗生素，从而减少耐药菌的产生。查看更多

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怎样验证培养基是否被污染? 细胞培养技术在生物研究领域内是必不可少的核心环节,在培养过程中面临的一个严重问题就是细胞污染,其中支原体是最主要的污染源。支原体在光学显微镜下不可见,而且被支原体污染的细胞培养基在一般情况下往往并不浑浊,细胞受损程度也不明显,形态很少改变,因此细胞被支原体污染后很难察觉。细胞一旦被支原体污染后,支原体会消耗细胞培养基中的营养物质,代谢产物不断积累,会导致细胞培养环境中pH值的改变,诱导或抑制某些细胞因子的表达,会影响培养细胞的代谢和增殖特征。在日常工作环境中,支原体可以说无处不在,它可以通过人的毛发、口腔、穿着的衣服、动物的皮毛以及日常的细胞培养的操作环境造成对细胞的污染。能够造成细胞污染的支原体种类有很多,有些细胞甚至同时感染2种以上的支原体。由于支原体体积很小,直径约在0.2-2.0pm之间,可以通过滤膜而直接造成培养基或血清的污染。从形态结构上,支原体形态多变,多吸附在细胞表面或分散于细胞与细胞之间,是一类没有细胞壁的微生物,因此对作用于细胞壁类的抗生素(如青霉素)不敏感。常用的检测方法有培养法、荧光染色法、PCR法和电镜观察法。培养法是最为可靠且成本低廉的方法,但培养周期较长,常用于细胞以及临床治疗细胞的支原体检査; 荧光染色法是用特异荧光染料(Hoechst 33258)染色后在荧光显微镜下进行检测,荧光染料(Hoechst 33258)是一种能和DNA特异结合物质,如果检测样品为支原体污染,则附在细胞表面和分散在细胞与细胞之间的支原体DNA着色,在荧光显微镜下可见; PCR法检测是通过对支原体特定的序列设计引物,当存在支原体污染时通过PCR特异性扩增,会将目标DNA特异性的复制,然后通过琼脂糖电泳观检测,会跑出条带出现阳性结果,反之当没有支原体污染时,由于没有模板,PCR无法扩增,则琼脂糖电泳跑不出条带,出现阴性结果;电镜观察法是利用电子显微镜的超级放大功能,直接观察培养细胞中支原体污染情况。在此主要介绍利用荧光染色法来检测培养细胞中的支原体,具体检测步骤如下: (1)细胞爬片培养:待测细胞培养至传代水平,将细胞消化后接种至含有玻片的细胞板中,培养至60%-70%汇合时,进行检测; (2)漂洗:将细胞板中的培养液吸出,取出玻片,用PBS轻轻漂洗; (3)固定:加入适量的固定液,室温放置10min; (4)漂洗:用PBS轻轻漂洗3次; (5)染色:加入适量的荧光染料(Hoechst 33258)工作液,在室温下放置10min; (6)漂洗:用PBS轻轻漂洗3次; (7)镜下观察:将玻片晾干后,滴加抗荧光猝灭剂,于荧光显微镜下观察、拍照;查看更多

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如何提高蛋白质的表达量? 相信如何提高目的重组蛋白的诱导表达量是很多同学在研究中都会遇到的问题。泡了无数论坛，看了无数帖子，尝试过IPTG的诱导浓度、培养基成分、诱导温度、诱导时间，甚至让别的公司帮忙做密码子优化（将目的片段通过全基因合成的方式合成出来）。总的来说，提高IPTG浓度是可以提高目的蛋白的诱导表达量的，但一般也就用到1mM的浓度，再高对细胞有毒性；培养基营养越丰富，表达量越高，所以如果追求表达量的话，就不要用LB培养基了，用自动诱导培养基吧；诱导温度，温度越低表达量越低，但是可溶的比例一般来说会越高，所以如果追求表达量可以尝试37℃或者42℃（没试过42℃）；诱导时间，这个跟培养基成分及供氧情况很有关系，如果供氧不足/营养不够，提高时间会起到反效果。综合而言，一般用的重组蛋白诱导表达条件是固定的，有时候要追求可溶表达，顶多就调整下诱导温度（25℃）。条件就是：自动诱导培养基（不用额外的IPTG），37℃，20h。一般来说大分部蛋白的表达量都还可以。但有些蛋白的表达量不行，或者某些蛋白需要长期大量使用，因此提高这些重组蛋白的诱导表达量就十分有必要了，如果进一步提高呢？我们都知道，蛋白质的表达量和蛋白质的翻译效率有关，翻译效率又跟mRNA的二级结构又有关系，如果mRNA形成了复杂的二级结构，会导致核糖体无法顺畅的将整个mRNA读通，甚至会提前从mRNA上掉下来。一般公司号称的密码子优化，也就是通过替换掉一些稀有密码子，显然如果不从二级结构上考虑的话，是没法提高蛋白质的表达量的，而事实也确实如此。在公司做研发的几年中，做过多个蛋白的密码子优化（通过全基因合成的方式），结果差强人意。今天介绍的方法，不是从二级结构上来预测的（据我所知，目前没有比较准确的方法来预测mRNA的二姐结构），而是一种简单、高效的方法：通过优化目的基因的5'部分DNA序列，而且不需要通过软件预测，完全随机，包含所有可能（理论上），且不改变氨基酸序列。原理：蛋白质的翻译效率很大程度上跟翻译起始效率有关，因此mRNA的5'端必须得很好翻译，最好不要有复杂的二级结构；通过PCR的方法在基因的5‘端引入简并序列，构建克隆，挑选多个克隆，诱导表达之，SDS-PAGE电泳检测表达量的高低，挑选高表达克隆进行测序。实验步骤： 1.设计目的重组蛋白质的N端10-15个氨基酸的简并序列。 2.引物合成上述简并序列，同时设计合成目的基因反向引物。 3.PCR扩展目的基因，这样在目的基因的5‘端就引入了兼并序列，同时不改变氨基酸序列。 4.双酶切，插入到目标载体。 5.转化。 6.挑选多个克隆（比如100-200个）到1.5ml EP管，直接诱导表达（记得带上为改造克隆菌株的对照）。 7.SDS-PAGE检测。 8.挑选高表达的多个克隆，测序。查看更多

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质粒小量提取跟大量提取有什么区别? 区别： 1、所需菌液不同。质粒大用于大量菌液的提取，100ml-500ml 均可，而质粒小量用的菌液量很少，一般1.5-5ml。 2、纯度不同。一般试剂盒中质粒大量比质粒小量多了溶菌酶、异丙醇（回收沉淀核酸）、含一定量PEG的氯化物（回收质粒DNA）及乙酸铵等，其作用及目的都是有利于细菌的裂解和质粒的纯化，所以质粒大量提取的产物比质粒小量提取的量多很多，而且纯度很高。 3、实验要求不同。质粒小量提取一般用于质粒鉴定和对纯度要求不是很高的实验，质粒大量提取用于质粒的大量提取和转染等纯度要求很高的实验。质粒大量提取质粒和质粒小量提取质粒的基本原理是一样的，都是通过一定的方法（如加碱裂解）使在细菌内大量扩增的质粒释放出来，然后经过去蛋白去RNA等一系列步骤纯化DNA，最终将DNA提取出来。查看更多

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工艺技术

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慢病毒的相关操作方法与问题解答? 慢病毒（Lentivirus）是以人类免疫缺陷型病毒（HIV）为基础发展起来的基因治疗载体，它可以感染分裂细胞和非分裂细胞，可有效地感染包括几乎所有的哺乳动物细胞、干细胞和原代细胞。此外，慢病毒具有嗜核性，可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而可以在体内较长期表达。慢病毒的多种优点，使它成为基因传递的强大而有效的工具，获得了广泛的应用。因此，慢病毒成为了实验室的一大常客。在使用慢病毒的过程中，我们会遇到一些问题，比如细胞转染效率低，细胞状态差等等。为了在实验过程中更好地使用慢病毒，我们应该注意哪些问题呢？慢病毒载体是经过处理的HIV，理论上对人体是无害的，但病毒仍然具有潜在的生物学危险，慢病毒相关实验需要在生物安全柜（BL-2级别）内进行操作。因此在进行操作的时候，我们要按照如下基础规范进行实验： 1、在进入实验室工作时，穿着实验服或隔离服，戴上手套和口罩； 2、操作病毒时请尽量使用生物安全柜，小心不要产生气雾或液体飞溅； 3、如果使用普通超净工作台操作病毒，请在打开含有病毒的容器盖子前关闭超净台的风机（由于超净台风向外排，有可能将病毒吹向操作者），并尽快操作；尽量缩短开盖后的病毒在关闭了排风机的超净台中停留的时间，封闭所有含有病毒的容器、耗材、废液后，再打开超净台风机； 4、如果操作时台面有病毒污染，请立即用75%酒精加1%的SDS 溶液擦拭。接触过病毒的枪头，离心管，培养板，培养液请用75%酒精加1%的SDS 溶液或于84 消毒液浸泡过夜后弃去； 5、如需离心，应使用密封性好的离心管，或用封口膜封口后离心； 6、实验结束，脱掉手套前先消毒再摘除手套，随后用肥皂洗手。慢病毒的储存与稀释 1、病毒长期储存于-80℃冰箱，-20℃保存不要超过1周，4℃保存不要超过3天； 2、病毒的运输采用干冰，收到病毒液后若几天内用于实验，可于4℃保存（于3天内用完）。若短时间内不用，收到病毒后应立即放入-80℃冰箱进行长期保存。病毒使用过程中要避免反复冻融，否则会降低病毒滴度； 3、一般病毒可在-80℃存放1年，但存放时间超过6个月后使用，需重新检测病毒滴度； 4、需要稀释病毒时，将病毒从-80℃冰箱中取出，置于冰上溶解，然后用PBS或培养基（不含血清）稀释到所需浓度后轻柔混匀，尽快使用；慢病毒的使用预实验摸索慢病毒的最佳MOI 每种细胞对慢病毒的敏感性不同，有些容易感染，有些不容易感染，不同慢病毒的荧光强度也有差异，所以进行慢病毒操作实验之前，首先要了解MOI的概念，MOI（Multiplicity of Infection，感染复数）是指病毒感染细胞的比例。选择合适的MOI值，病毒的感染效率以及目的蛋白的表达量越高，相对细胞的毒性越小。对于分裂活跃的细胞，比如293细胞MOI=1时，95%以上的细胞均可以表达目的基因。而对于非分裂细胞，比如原代细胞，感染效率较低，MOI值可能达到200-300。我们建议通过比较不同MOI（比如0、1、5、10、50、100等）感染细胞MOI值的摸索。 1、感染前一天，一般用24孔板接种2×10?个细胞，第二天病毒感染时的细胞汇合度达到40-50%左右； 2、MOI值的设置若有文献参考，可以参考值为中心设置梯度覆盖参考值，举例：文献中某细胞系慢病毒MOI值为10，则设置MOI梯度为2.5,5,10,20,40等；若无文献参考可按10倍梯度稀释进行设置，每个梯度3次重复；注：（1）每孔加病毒量（μL）=MOI*细胞数/滴度（TU/mL）*10? 一般第二天按照细胞数倍增计算;如果病毒滴度很高，每孔加病毒量过少，可进行稀释后再加；Polybrene（常用浓度为5-10μg/mL）是否添加根据细胞种类及具体实验决定； 3、第三天（加病毒后12h-24h左右），弃去含病毒就培养基，更换新鲜培养基继续培养； 4、第五天，观察荧光情况，并进行拍照，确定最适合MOI值； 5、对于生长缓慢代谢慢的细胞，可以适当延长病毒感染时间，根据细胞状态决定何时更换培养基，保持细胞的活性。慢病毒感染目的细胞 1、通过感染预实验，确定细胞接种密度、最佳MOI等条件。正式实验前，调整并保持良好的细胞状态； 2、按实验需要将细胞铺板（qPCR检测用12孔板，WB检测用6孔板或更大面积的培养皿），细胞数以第2天密度约40-50%为宜，37℃ 培养过夜； 3、感染前，从-80℃冰箱取出病毒置于冰上融化，用PBS稀释成所需浓度，用移液器吹打均匀； 4、感染前给细胞换液，然后向每孔中均匀滴加稀释好的病毒液，轻轻摇匀，37℃培养过夜； 5、感染后根据细胞状态决定，更换新鲜的完全培养液，继续37℃培养。若病毒对细胞无毒性也可不换液。感染后48-72h观测荧光，拍照记录； 6、根据需要，或收细胞抽提RNA检测目的基因在mRNA水平的表达，或收细胞抽提蛋白检测目的蛋白的表达，或收细胞进行细胞功能检测； 7、在培养过程中，需要筛选稳定携带 Puromycin 抗性基因的病毒，则需换上含适当浓度 Puromycin 的新鲜完全培养液。查看更多

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原核生物与真核生物翻译起始阶段有何异同? 相同之处：（1）都需生成翻译起始复合物；（2）都需多种起始因子参加；（3）翻译起始的第一步都需核糖体的大、小亚基先分开；（4）都需要mRNA和氨酰- tRNA结合到核糖体的小亚基上；（5）mRNA在小亚基上就位都需一定的结构成分协助。（6）小亚基结合mRNA和起始者tRNA后，才能与大亚基结合。（7）都需要消耗能量。不同之处：（1）真核生物核糖体是80S（40S+60S）；eIF种类多（10多种）；起始氨酰- tRNA是met- tRNA（不需甲酰化），mRNA没有SD序列；mRNA在小亚基上就位需5′端帽子结构和帽结合蛋白以及eIF2；mRNA先于met-tRNA结合到小亚基上。（2）原核生物核糖体是70S（30S+50S）；IF种类少（3种）；起始氨酰- tRNA是fmet- tRNA（需甲酰化）；需SD序列与16S-tRNA配对结合，rps-1辩认识别序列；小亚基与起始氨酰-tRNA结合后，才与mRNA结合。查看更多

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质控样是什么意思？质控样同标样的区别？质控样，一般是实验室用来检验曲线做的是否标准用的，他是一个已知浓度的样品且浓度有正负误差，比如砷质控样浓度为3.240±0.012毫克/升。你将他带入你的曲线进行分析，看得出的数据是否在质控样浓度误差范围内，如果在范围内，则可以说明你的曲线没有问题，相应的其他数据也正确。如下图质控样在检测活动中的重要性检测过程中涉及到很多流程或者叫做步骤吧，或多多少会遇到一些不确定的因素，最终影响着我们的检测结果的准确性，那么如何确保我们的检测是在可控范围内，换句话说，如何保证我们的检测结果的有效性和可比性？这就需要质控样了，说到质控样大家一定不陌生吧也就是我们通常说的QC样，那么质控样都有哪些呢？我认为主要有三种：空白样、标准溶液（物质）、重复样。下面我就这三种来说说它们的在检测过程中的重要性吧。先来说空白样（BLK），但凡我们看到的标准方法都有这么一句：随样品做空白，有的还要做2个呢。为什么要做空白，做空白的意义何在呢？空白样品可以检验整个样品处理过程是否受到污染，试剂有无需要检测的成分，有多少含量，检测过程中仪器的检出限和基体干扰的扣除。接下来我们说说标准物质STD（溶液），标准物质一般我们会选择跟需要检测的样品基体相同或者相近的，所含元素含量或者组分含量一高一低的2个，通常一个放在空白样后面，另一个位置随机放置，购买质控样和标准溶液就到国家标准品网处理过程和样品一样。在前处理过程中，标准物质主要是用来监控处理过程有无异常，处理的是否充分、彻底；而在仪器检测过程中，主要是检验仪器测试状态是否正常，工作曲线是否偏差很大等。最后我们来说说重复样（DUP），重复样就是需要检测的样品的另一份取样，从同一个样品中取得的，前处理和样品一样。重复样的作用主要是检验样品的均匀性、代表性，如果你检测结果显示相差很远，你就要寻找原因了，是不是弄错样品了，还是样品的均匀性不好造成的？总结：看似很不起眼的质控样，其实在我们检测活动中起着很大的作用，监视着整个检测过程的质量，也为我们找寻和分析质量问题提供线索和依据。很多人不重视它，等到出了问题找原因就无从下手了。规范的实验室一般都要求加质控样的。查看更多

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这些化学试剂开瓶后的有效期你知道吗? 按照中华人民共和国GB15346-94化学试剂包装标准规定：第9.1.1.M规定：要求注明有效期的必须注明有效期;生产日期或生产批号。我国化学试剂的分类：优级纯(GR，绿标签)：主成分含量很高、纯度很高，适用于精确分析和研究工作，有的可作为基准物质。分析纯(AR，红标签)：主成分含量很高、纯度较高，干扰杂质很低，适用于工业分析及化学实验。化学纯(CP，蓝标签)：主成分含量高、纯度较高，存在干扰杂质，适用于化学实验和合成制备。实验纯(LR，黄标签)：主成分含量高，纯度较差，杂质含量不做选择，只适用于一般化学实验和合成制备。指示剂和染色剂(ID或SR，紫标签)：要求有特有的灵敏度。指定级(ZD)：按照用户要求的质量控制指标，为特定用户订做的化学试剂。电子纯(MOS)：适用于电子产品生产中，电性杂质含量极低。当量试剂(3N、4N、5N)：主成分含量分别为99.9%、99.99%、99.999%以上。化学试剂有效期 :化学试剂在贮存、运输和销售过程中会受到温度、光辐照、空气和水份等外在因素的影响，容易发生潮解、霉素、变色、聚合、氧化、挥发、升华和分解等物理化学变化，使其失效而无法使用。因此要采用合理的包装，适当的贮存条件和运输方式，保证化学试剂在贮存、运输和销售过程中不变质。对一些对贮存和运输有特殊要求的应按特殊要求办理。有些化学试剂有一定的保质期，使用时一定要注意。化学试剂的有效期随着化学品的化学性质的改变，有着很大的区别。一般情况下，化学性质稳定的物质，保存有效期就越长，保存条件也简单。初步判断一个物质的稳定性，可遵循以下几个原则：无机化合物，只要妥善保管，包装完好无损，可以长期使用。但是，那些容易氧化、容易潮解的物质，在避光、荫凉、干燥的条件下，只能短时间(1～5年)内保存，具体要看包装和储存条件是否合乎规定。有机小分子量化合物一般挥发性较强，包装的密闭性要好，可以长时间保存。但容易氧化、受热分解、容易聚合、光敏性物质等，在避光、荫凉、干燥的条件下，只能短时间(1～5年)内保存，具体要看包装和储存条件是否合乎规定。有机高分子，尤其是油脂、多糖、蛋白、酶、多肽等生命材料，极易受到微生物、温度、光照的影响，而失去活性，或变质**，故此，要冷藏(冻)保存，而且时间也较短。基准物质、标准物质和高纯物质，原则上要严格按照保存规定来保存，确保包装完好无损，避免受到化学环境的影响，而且保存时间不宜过长。一般情况下，基准物质必须在有效期内使用。查看更多

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PBS缓冲液和Hanks缓冲液的区别? 实验时经常用到PBS缓冲液，但是很多文献里面也用到了Hanks缓冲液，不知道这两种缓冲液在细胞培养方面有什么区别?也就是说它分别适合于哪些情况? PBS ：磷酸缓冲盐溶液——具有pH缓冲作用的等渗盐溶液。PBS溶液又称磷酸盐缓冲溶液，一般选择K2HPO4和KH2PO4配制，因为钠盐溶解的较慢。根据不同pH的溶液，称量不同质量的磷酸盐，也可以用pH计调溶液的pH。PBS一般用作支持电解质。其配置方法如下：采用去离子水、KH2PO4和Na2HPO4·2H2O配制PBS溶液，按以下步骤进行： (1) 配制1/15mol/L KH2PO4，即每升水中溶解9.078克KH2PO4; (2) 配制1/15mol/LNa2HPO4·2H2O，即每升水中溶解11.876克Na2HPO4·2H2O;(3) 将18.2%(体积分数)KH2PO4溶液和81.8%Na2HPO4·2H2O混合;最终测定PBS液的PH值约为7.4。其作用接近于生理盐水，但是在实验室内比生理盐水的用途要广泛。 Hanks：平衡盐溶液——无机盐和葡萄糖浓度接近大部分动植物细胞的水平，可作为动植物细胞短期培养(保存)。 Hank's配方:NaCl 8.01;KCl 0.4;CaCl2 0.14; NaHCO3 0.35;KH2PO 4 0.06;Glucose 0.34(g/l); D-Hank' s:不含钙离子、镁离子、葡萄糖。( T7 e# L7 e, K2 N 相比较而言，hanks液中盐成分较PBS复杂，且有葡萄糖，可为细胞提供简单的营养，而pbs中只有磷酸根，钠，钾，氯离子，只是蕞简单的盐平衡缓冲液，不能为细胞提供暂时的营养。关键要看你用这些液体来洗细胞还是存储细胞了 PBS 、hanks各都有两种，一种是含钙镁的，另一种是不含钙镁的：DPBS,DHANKS。 r) u7 n6 e3 R% P hanks比PBS成分稍微复杂点，一般细胞培养时用DPBS就够，Dhanks一般用到原代细胞消化分离操作实验中,一般培养用PBS就够了，感觉DHANKS上场的实验比较高级点哎，对于保护细胞活力等很有好处。 HANKS对细胞略好，不过一般洗涤等用PBS足够了。分离时，两者皆可，多数推荐HANKS，实际上差不多。如果分离时消化时间较长，建议HANKS。查看更多

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实验室化学药品、试剂、仪器的使用禁忌你知道吗? 在实验室操作中，每天都会使用到各种化学药品、化学试剂、生物试剂、仪器设备，某些实验条件下，还会遭受诸如：高温、低温、高压、真空和辐射源的伤害，若缺乏必要的安全防护知识，会造成生命和财产的巨大损失。不管是仪器还是试剂、药品，都有一定的使用禁忌不得不知，如何才能有效预防及避免？让我们一起来了解吧! 实验室常见安全隐患有哪些? (一)、化学品危害主要是指根据化学品的性质所引起的中毒、易燃、易爆、易腐蚀情况的发生。 (二)、生物病菌危害主要是指由于实验室在科学研究、开发、生产和应用中(比如新型病毒的预防疫苗研究)造成对人类健康、生存环境和社会生活有害的影响。 (三)、仪器设备危害在某些特定的仪器如带放射性物质仪器的辐射危害，一些仪器运行过程中产生的噪声危害等。 (四)、其他潜在危害使用气体时，对气体存储安置不当，如平放或倒置气瓶、气体阀门长时间不检修造成气体泄漏所引起的毒害，爆炸等潜在危险情况。又如，烘箱高温烫伤、液氮使用不当，溅到到皮肤上造成的冻伤。谨记：实验室“四防” (一)、防毒大多数化学药品都有不同程度的毒性。有毒化学药品可通过呼吸道、消化道和皮肤进入人体而发生中毒现象。如氟化氢 HF 侵入人体，将会损伤牙齿、骨骼、造血和神经系统;烃、醇、醚等有机物对人体有不同程度的麻醉作用;三氧化二砷、氰化物、氯化高汞等是剧毒品，吸入少量会致死。防毒注意事项实验前应了解所用药品的毒性、性能和防护措施;使用有毒气体(如硫化氢H2S, 氯气Cl2,溴气 Br2, 二氧化氮NO2, 氯化氢HCl, 氟化氢HF)应在通风橱中进行操作;苯、四氯化碳、乙醚、硝基苯等蒸汽经常久吸会使人嗅觉减弱，必须高度警惕;有机溶剂能穿过皮肤进入人体，应避免直接与皮肤接触;剧毒药品如汞盐、镉盐、铅盐等应妥善保管;实验操作要规范，离开实验室要洗手。 (二)防火防止煤气管、煤气灯漏气，使用煤气后一定要把阀门关好;乙醚、酒精、丙酮、二硫化碳、苯等有机溶剂易燃，实验室不得存放过多，切不可倒入下水道，以免集聚引起火灾;金属钠、钾、铝粉、电石、黄磷以及金属氢化物要注意使用和存放，尤其不宜与水直接接触;万一着火，应冷静判断情况，采取适当措施灭火;可根据不同情况，选用水、沙、泡沫、二氧化碳或四氯化碳灭火器灭火。 (三)、防爆化学药品的爆炸分为支链爆炸和热爆炸氢、乙烯、乙炔、苯、乙醇、乙醚、丙酮、乙酸乙酯、一氧化碳、水煤气和氨气等可燃性气体与空气混合至爆炸极限，一旦有一热源诱发，极易发生支链爆炸;过氧化物、高氯酸盐、叠氮铅、乙炔铜、三硝基甲苯等易爆物质，受震或受热可能发生热爆炸。防爆措施：对于防止支链爆炸，主要是防止可燃性气体或蒸气散失在室内空气中，保持室内通风良好。当大量使用可燃性气体时，应严禁使用明火和可能产生电火花的电器;对于预防热爆炸，强氧化剂和强还原剂必须分开存放，使用时轻拿轻放，远离热源。 (四)防灼伤除了高温以外，液氮、强酸、强碱、强氧化剂、溴、磷、钠、钾、苯酚、醋酸等物质都会灼伤皮肤;应注意不要让皮肤与之接触，尤其防止溅入眼中。特别提醒：使用高压容器的安全防护高压气瓶的安全使用：气瓶应专瓶专用，不能随意改装;化学实验常用到高压储气钢瓶和一般受压的玻璃仪器，使用不当，会导致爆炸，需掌握有关常识和操作规程气体钢瓶的识别(颜色相同的要看气体名称) 氧气瓶：天蓝色; 氢气瓶：深绿色; 氮气瓶：黑色; 纯氩气瓶：灰色; 氦气瓶;棕色; 压缩空气; 黑色; 氨气瓶：黄色; 二氧化碳气瓶：黑色。气瓶应存放在阴凉、干燥、远离热源的地方，易燃气体气瓶与明火距离不小于 5 米;氢气瓶最好隔离;气瓶搬运要轻要稳，放置要牢靠;各种气压表一般不得混用;氧气瓶严禁油污，注意手、扳手或衣服上的油污;瓶内气体不可用尽，以防倒灌;开启气门时应站在气压表的一侧，不准将头或身体对准气瓶总阀，以防万一阀门或气压表冲出伤人。我们需要怎么做? 如果我们掌握并熟知试剂、化学品、仪器相关的使用禁忌以及实验室安全知识，可以尽可能的减少和避免实验室里安全事故的发生，即使在发生紧急事故时，也能够不慌不乱，把伤害和损失减少到最少程度。 1.实验时根据实验性质进行必要的防护。根据试验可能发生的危险事故佩戴必要的防护工具，例如穿好试验服，戴橡胶手套，防护面具，防毒面具等。实验前，要注意清理试验场周围的安全隐患。检查试验装置、药品和相关物品是否有不符合要求的情况等。 2.遵循化学药品的性质和化学反应的规律，不盲目蛮干和主观臆测化学反应的过程。应根据化学反应的性质和过程选择匹配的反应装置，不可图省事省去必要的安全措施。 3.对实验的危险性预估实验事故虽不可预测，但其危险性的大小是可以估计到的。即使对不大了解的实验，也必须推测其危险程度而制订相应的预防措施。比如下面这类实验，必须十分注意，以确保万无一失。 ①不了解的反应及操作; ②存在多种危险性的实验(如发生火灾、毒气等); ③在严酷的反应条件(如高温、高压等)下进行的实验。 4.做好预防措施并加以检查。平时注意熟悉需要关闭的主要龙头、电气开关，灭火器的位置及操作方法，避免发生事故时才四处寻找应急的物品。 5.实验后处理。实验的后处理工作，亦属实验过程的组成部份。值得一提的是，不可忽略回收溶剂和废液、废弃物等的处理。以上实验室的化学药品、化学试剂、生物试剂、仪器设备的使用禁忌介绍！希望能给大家带来帮助。查看更多

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滴定分析标准溶液有哪些制备方法? 滴定分析标准溶液：已知准确浓度的、经过均匀性和稳定性研究的、有不间断溯源链的用于滴定分析的溶液。滴定分析标准溶液制备方法有两种：一、直接配制法具体操作步骤：准确称取一定量的纯物质，溶解并稀释到准确体积，根据计算求出该溶液的准确浓度。例如：重铬酸钾标准滴定溶液、氯化钠标准滴定溶液制备等。直接配制法配制标准溶液的物质必须具备： 1.必须有足够的纯度，含量≥99.9%，其杂质含量应少于容量分析所允许的误差程度。例如：制备重铬酸钾标准滴定溶液使用的基准物质是国家二级标准物质重铬酸钾，其含量为99.99%。 2.物质组成与化学分子式应完全相符。若含结晶水，其含量也应与化学分子式相符。 3. 物理性质或化学性质稳定。二、间接配制法具体操作步骤：粗略称取一定量物质或量取一定体积溶液，配制成接近于所需要浓度的溶液，再用基准物质或已知浓度的标准溶液来确定其标准浓度。例如：高锰酸钾标准滴定溶液、盐酸标准滴定溶液、氢氧化钠标准滴定溶液、硝酸银标准滴定溶液等。间接法制备需要的基准物质的选择要求： 1.摩尔质量大摩尔质量大的基准物质可以减小天平的精度原因造成的称重误差，最终减小标定滴定溶液的误差。例如：标定氢氧化钠滴定分析标准溶液选择邻苯二甲酸氢钾作为基准物质，而不选用草酸。 2.易溶解标准滴定溶液的标定一般都在溶液间进行，液体状态反应比较快速。容易溶解的物质能够保证标定过程的正常进行，减少反应过慢、环境等因素的影响。 3.性质稳定基准物质需要稳定性高、不吸湿、不风化的性质。例如：标定盐酸标准滴定溶液选择稳定性更高的无水碳酸钠作为基准物质，而不选用硼砂。 4.能产生准确的当量反应与滴定分析标准溶液之间发生化学反应的关系越简单，就越容易对参与反应的物质进行定量，通过计算得到的标准溶液的浓度数值越准确。 5.反应终点易判断标准溶液标定一般采用指示剂法或电位滴定法，使用的基准物质要方便反应终点的判断，基准物质的颜色不能影响反应终点的判断。查看更多

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实验器皿清洗这件小事，你做对了吗? 清洁的实验器皿是实验得到正确结果的先决条件，因此，实验器皿的清洗是实验前的一项重要准备工作。下面古朵生物就为大家分享一下如何正确清洗实验器皿，希望对大家有帮助。 01、常规洗涤法（一般容器） 1.清洗实验器皿前先用肥皂洗手。 2.先用自来水冲去灰尘，再用毛刷蘸洗涤剂、液仔细刷净内外表面，之后边刷边用水冲至无洗涤剂、液。 3.再用自来水冲洗3～5次，去离子水冲洗3次。 4.不便刷洗的实验器皿先用洗涤剂、液浸泡后用水冲洗。洗净的玻璃器皿内外不挂水珠，器壁上残留的水用指示剂检查为中性。 5.去污粉不得用于洗涤刻度器皿和玻璃仪器内壁，以防划伤玻璃。 02、不同材质器皿的洗涤 1.银、镍和铁质器皿用NaOH熔融，也可用1：3稀HCl短时间浸泡后用水冲洗。 2.玛瑙器皿不宜浸洗，要先用洗涤剂洗后用水冲洗倒置架空晾干，不可烘干。 3.塑料、瓷质和玻璃器皿用稀HCl浸泡后冲洗。 03、特殊器皿洗涤 1.砂芯漏斗用热HCl或铬酸洗液边抽滤边清洗，再依次用自来水、蒸馏水抽洗。用后的砂芯漏斗应针对不同的沉淀物，采用适当的洗涤剂先溶解后抽洗。洗净后可在干燥箱中120℃烘干，但烘干前要除去水滴，以免滤片烘裂。洗净的砂芯漏斗要特别注意防尘。 2.成套组合玻璃器皿用常规洗净安装后，使用前应用水蒸气洗涤一段时间。用于微量、痕量分析的玻璃容器要用1：1～1：9HNO3浸泡后用常规方法洗涤。 3.污垢较重器皿的洗涤 shou次一般均需用HNO3浸泡进行预处理；洗液确定后增加浸泡时间和加温浸煮能强化洗涤效果；用超声波清洗器清洗。 04、特殊污垢的清洗 1.铁锈水垢用稀HCl或稀HNO3清洗； 2.盛高锰酸钾的器皿，用氯化亚锡的盐酸液或含草酸的硫酸溶液清洗； 3.难溶的银盐用硫代硫酸钠或氨水洗涤； 4.铝盐、磷钼酸喹啉、白色MoO3用稀NaOH溶液清洗； 5.四苯硼钾用丙酮清洗； 6.有脂肪性污物的器皿用汽油、甲苯、丙酮、酒精、二氯甲烷等有机溶剂擦洗或浸泡。 05、有毒有害物质器皿的洗涤 1.对分析致癌性物质或氰hua物等剧毒物质容器洗涤时，为防止对人体的危害，在洗涤之前，要使用对这些有害物质有破坏作用的洗涤液进行浸泡，然后再进行洗涤。 2.分析氰hua物的容器可用3%NaOH溶液浸泡消毒，然后用常规方法清洗。 3.分析苯并芘的玻璃容器用20%HNO3溶液浸泡24h，取出后用自来水冲去残留酸液，再按常规方法清洗。 06、不同项目取样容器的洗涤处理 1.用于检测重金属的水样的容器用1：4HNO3浸泡24h以上，取出后常规方法清洗； 2.检测微量有机物的水样的容器用铬酸洗液洗净烘干后，再用纯化过的己烷振摇除去器壁表面沾污的有机物，也可用高锰酸钾洗液浸洗后再用自来水和纯水冲洗干净； 3.检测阴离子表面活性剂水样的容器要用洗涤剂刷洗后，再用甲醇振摇1min，再依次用自来水、纯水冲洗干净；检测微生物水样的容器，用常规洗涤后，将玻璃器皿放置于高压灭菌锅中加热至121℃保持15min，予以灭菌。塑料容器浸泡在0.5%过氧乙酸溶液中10min或在环氧乙烷气体中进行低温灭菌。 4.聚丙烯耐热塑料容器可用高压灭菌锅121℃高压蒸汽灭菌15min； 5.测汞的水样容器要用1：3HNO3充分荡洗并浸置数小时，然后用自来水和超纯水冲洗干净；测微量硫酸盐水样的容器不能使用含硫酸的洗液洗涤； 6.测铬水样的容器不能用盐酸或重铬酸钾的洗液洗涤； 7.测磷酸盐的水样的容器不能用含磷的洗液洗涤； 8.测氨和凯氏氮水样的容器最后要用无氨水涮洗。 07、器皿的干燥玻璃器皿可采取控干、烘干、吹干、烤干等方法干燥处理。注意事项 1.任何量器均不得用烘干法干燥； 2.烤干时需注意由底到口，防止瓶口水滴回滴致玻璃炸裂； 3.烤干法只适用于硬质玻璃器皿，有些玻璃器皿，如，比色皿、比色管、称量瓶、试剂瓶等绝对不允许用烤干法； 4.干净的玻璃器皿倒置于器皿柜中，柜的隔板上衬垫清洁滤纸，关紧柜门防灰尘。查看更多

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实验室玻璃仪器使用指南！? 实验室的玻璃器皿各种各样，尤其是化学实验室，每天都要跟这些瓶瓶罐罐打交道，使用它们该注意些什么呢？ shou先将化学实验室仪器按是否可以加热简单归一下类： A.不能加热：量筒、集气瓶、漏斗、温度计、滴瓶、表面皿、广口瓶、细口瓶等； B.能直接加热：试管、蒸发皿、坩埚、燃烧匙； C.间接加热：烧杯、烧瓶、锥形瓶；玻璃器皿用途（1）试管常用做: ①少量试剂的反应容器； ②也可用做收集少量气体的容器； ③或用于装置成小型气体的发生器。（2）烧杯主要用于： ②解固体物质、配制溶液以及溶液的稀释、浓缩； ②也可用做较大量的物质间的反应。（3）烧瓶（圆底烧瓶，平底烧瓶）： ①常用做较大量的液体间的反应； ②也可用做装置气体发生器。（4）锥形瓶常用于: ①加热液体； ②也可用于装置气体发生器和洗瓶器； ③也可用于滴定中的受滴容器。（5）蒸发皿通常用于溶液的浓缩或蒸干。（6）胶头滴管用于移取和滴加少量液体。注意： ①使用时胶头在上，管口在下（防止液体试剂进入胶头而使胶头受腐蚀或将胶头里的杂质带进试液）； ②滴管管口不能伸入受滴容器（防止滴管沾上其他试剂）； ③用过后应立即洗涤干净并插在洁净的试管内，未经洗涤的滴管严禁吸取别的试剂； ④滴瓶上的滴管必须与滴瓶配套使用。（7）量筒用于量取一定量体积液体的仪器。 ①量筒内稀释或配制溶液，决不能对量筒加热； ②在量筒里进行化学反应。注意：在量液体时，要根据所量的体积来选择大小恰当的量筒（否则会造成较大的误差），读数时应将量筒垂直平稳放在桌面上，并使量筒的刻度与量筒内的液体凹液面的最低点保持在同一水平面。（8）托盘天平是一种称量仪器，一般精确到0.1克。注意：称量物放在左盘，砝码按由大到小的顺序放在右盘，取用砝码要用镊子，不能直接用手，天平不能称量热的物体, 被称物体不能直接放在托盘上，要在两边先放上等质量的纸，易潮解的药品或有腐蚀性的药品（如氢氧化钠固体）必须放在玻璃器皿中称量。（9）集气瓶 ①用于收集或贮存少量的气体； ②也可用于进行某些物质和气体的反应。（瓶口是磨毛的）（10）广口瓶（内壁是磨毛的）常用于盛放固体试剂，也可用做洗气瓶。（11）细口瓶：用于盛放液体试剂，棕色的细口瓶用于盛装需要避光保存的物质，存放碱溶液时试剂瓶应用橡皮塞，不能用玻璃塞。（12）漏斗用于向细口容器内注入液体或用于过滤装置。（13）长颈漏斗用于向反应容器内注入液体，若用来制取气体，则长颈漏斗的下端管口要插入液面以下，形成“液封”，（防止气体从长颈斗中逸出）。（14）分液漏斗主要用于分离两种互不相溶且密度不同的液体，也可用于向反应容器中滴加液体，可控制液体的用量。（15）试管夹用于夹持试管，给试管加热，使用时从试管的底部往上套，夹在试管的中上部。（16）铁架台用于固定和支持多种仪器，常用于加热、过滤等操作。（17）酒精灯： ①用前先检查灯心，绝对禁止向燃着的酒精灯里添加酒精； ②也不可用燃着的酒精灯去点燃另一酒精灯（以免失火）； ③酒精灯的外焰最高，应在外焰部分加热先预热后集中加热； ④要防止灯芯与热的玻璃器皿接触（以防玻璃器皿受损）； ⑤实验结束时，应用灯帽盖灭（以免灯内酒精挥发而使灯心留有过多的水分，不仅浪费酒精而且不易点燃），决不能用嘴吹灭（否则可能引起灯内酒精燃烧，发生危险）； ⑥万一酒精在桌上燃烧，应立即用湿抹布扑盖。（18）玻璃棒用做搅拌（加速溶解）转移，如pH的测定等。（19）燃烧匙。（20）温度计刚用过的高温温度计不可立即用冷水冲洗。（21）药匙用于取用粉末或小粒状的固体药品，每次用前要将药匙用干净的滤纸揩净。玻璃器皿的基本操作（1）药品的取用：“三不准” ①不准用手接触药品； ②不准用口尝药品的味道； ③不准把鼻孔凑到容器口去闻气味。注意：已经取出或用剩后的药品不能再倒回原试剂瓶，应交回实验室。 A.固体药品的取用取用块状固体用镊子（具体操作：先把容器横放，把药品放入容器口，再把容器慢慢的竖立起来）；取用粉末状或小颗粒状的药品时要用药匙或纸槽（具体操作：先将试管横放，把盛药品的药匙或纸槽小心地送入试管底部，再使试管直立）。 B.液体药品的取用取用很少量时可用胶头滴管，取用较多量时可直接从试剂瓶中倾倒（注意：把瓶塞倒放在桌上，标签向着手心，防止试剂污染或腐蚀标签，斜持试管，使瓶口紧挨着试管口）。（2）物质的加热给液体加热可使用试管、烧瓶、烧杯、蒸发皿；给固体加热可使用干燥的试管、蒸发皿、坩埚。 A.给试管中的液体加热试管一般与桌面成45°角，先预热后集中试管底部加热，加热时切不可对着任何人。 B.给试管里的固体加热：试管口应略向下（防止产生的水倒流到试管底，使试管破裂）先预热后集中药品加热。注意：被加热的仪器外壁不能有水，加热前擦干，以免容器炸裂；加热时玻璃仪器的底部不能触及酒精灯的灯心，以免容器破裂。烧的很热的容器不能立即用冷水冲洗，也不能立即放在桌面上，应放在石棉网上。（3）过滤是分离不溶性固体与液体的一种方法（即，一种溶，一种不溶，一定用过滤方法）如，粗盐提纯、氯化钾和二氧化锰的分离。操作要点： “一贴”、“二低”、“三靠”； “一贴” 指用水润湿后的滤纸应紧贴漏斗壁； “二低”指 ②纸边缘稍低于漏斗边缘； ②滤液液面稍低于滤纸边缘； “三靠”指 ①烧杯紧靠玻璃棒； ②玻璃棒紧靠三层滤纸边； ③漏斗末端紧靠烧杯内壁。（4）仪器的装配装配时，一般按从低到高，从左到右的顺序进行。（5）检查装置的气密性先将导管浸入水中，后用手掌紧物捂器壁（现象：管口有气泡冒出，当手离开后导管内形成一段水柱。（6）玻璃仪器的洗涤如仪器内附有不溶性的碱、碳酸盐、碱性氧化物等，可加稀盐酸洗涤，再用水冲洗。如仪器内附有油脂等可用热的纯碱溶液洗涤，也可用洗衣粉或去污粉刷洗。清洗干净的标准是：仪器内壁上的水即不聚成水滴，也不成股流下，而均匀地附着一层水膜时，就表明已洗涤干净了。（7）常用的意外事故的处理方法 A.使用酒精灯时，不慎而引起酒精燃烧，应立即用湿抹布。 B.酸液不慎洒在桌上或皮肤上应用碳酸氢钠溶液冲洗。 C.碱溶液不慎洒在桌上应用醋酸冲洗，不慎洒在皮肤上应用硼酸溶液冲洗。 D.若浓硫酸不慎洒在皮肤上千万不能先用大量水冲洗。气体的制取、收集（1）常用气体的发生装置 A.固体之间反应且需要加热，用制O2装置（NH3、CH4）；一定要用酒精灯。（2）常用气体的收集方法 A.排水法适用于难或不溶于水且与水不反应的气体，导管稍稍伸进瓶内，（CO、N2、NO只能用排水法）； B.向上排空气法适用于密度比空气大的气体（CO2、HCl只能用向上排空气法）； C.向下排空气法适用于密度比空气小的气体。排气法：导管应伸入瓶底。（3）气体的验满： O2的验满：用带余烬的木条放在瓶口。 CO2的验满：用燃着的木条放在瓶口。证明CO2的方法是用澄清石灰水。注意事项（1）试管夹应夹在的中上部，铁夹应夹在离试管口的1/4处。（2）加热时试管内的液体不得超过试管容积的1/3，反应时试管内的液体不超过试管容积的1/2。（3）使用烧瓶或锥形瓶时容积不得超过其容积的1/2，蒸发溶液时溶液的量不应超过蒸发皿容积的2/3；酒精灯内的酒精不得超过其容积的2/3，也不得少于其容积的1/4。（4）在洗涤试管时试管内的水为试管的1/2（半试管水）；在洗气瓶内的液体为瓶的1/2；如果没有说明用量时应取少量，液体取用1-2毫升，固体只要盖满试管的底部；加热试管内液体时，试管一般与桌面成45°角，加热试管内的固体时，试管口略向下倾斜。查看更多

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细胞受到支原体污染了咋办? 细胞培养被支原体污染是个世界性问题，在细胞培养中支原体感染发生率达到63%。支原体是一类无细胞壁，形态呈高度多形性，为圆形、丝状或梨形，其直径仅有0.13～0.18μm，变形能力大，故能通过滤菌器，最突出的结构特征是没有细胞壁，对作用于细胞壁生物合成的抗生素不敏感。研究表明，支原体能耗尽营养物，促进代谢积累，导致pH改变，对细胞造成多种影响，包括生长状况、生化特性、代谢、免疫、以及细胞存活等多方面的改变，继而干扰实验结果，或造成无法解释的差异。更加不幸的是拯救被感染的细胞几乎是不可能的。那如何检测你的细胞是否收到支原体的入侵呢？下面介绍了几种检测方式，或许对你的实验有用。分离培养法分离培养法是支原体检测的金标方法，其检测精确度最高。这种方法是从可疑的细胞培养体系中取样，并接种到最适宜支原体生长的琼脂平板上。如果样本中含有支原体，它们就会在这种琼脂平板上疯狂生长，最终形成明显可见的特征性菌落。分离培养法基本不会出现假阴性结果，因此被誉为支原体检测金标准。但是，分离培养法也存在两个弊端，一是检测时间太长，支原体要长出明显克隆至少需要4周时间。二是尽管可以检测绝大多数支原体种类，分离培养法也有力所不及的时候，例如支原体M. hyorhinis。 DNA检测法，也称直接培养法将可疑样品与指示细胞共同培养，一般需要几天时间。DNA检测所用的指示细胞通常是细胞质区域较大的Vero细胞，如果原样本中含有支原体，那么当细胞DNA被荧光染料（如Hoechst染料）染色时，就可以在指示细胞的核周围观察到荧光斑点或荧光颗粒。但是这种方法灵敏度太低，当检测成阳性时，细胞经常已经严重污染。且Hoechst荧光染色：操作复杂，操作不当易造成假阳性或假阴性。 PCR法市面上有许多商机提供基于PCR的支原体检测试剂盒，如GeneCopoeia。这种方法已经比较成熟，应用的范围也较为广泛。 PCR法采用针对支原体DNA的引物用PCR检测可疑样本，其PCR引物可特异扩增支原体基因组中rDNA保守序列，包括所有已知的支原体，及细胞培养过程普遍遇到的种属，例如M. arginini、M. arthritidis、M. bovis、M. fermentans、M. genitalium、M. hominis、M. hyorhinis、M. neurolyticum、M. orale、M. pirum、M. pneumoniae、M. pulmonis、M. salivarium 和U. urealyticum。在凝胶电泳过程中，支原体DNA会显示为特异性条带，以此指示支原体的存在。 PCR法快速，简便，具有强扩增能力和极高的敏感性，可以检测大多数支原体，但谨慎起见最好同时使用另一种检测方法来进行验证。PCR法检测支原体只需几个小时，是最快但也是最不灵敏的支原体检测方法。酶学检测酶学检测是将可疑样本添加到特定底物中，在这一体系内支原体的酶可以将ADP转化为ATP，随后能利用ATP发光的luciferase酶就可以指示支原体的存在。最后，建议你进行定期检测支原体感染会影响细胞的正常生长，因此对培养细胞定期进行支原体检测非常重要。一般来说每1至3个月就应该进行一次支原体检测。将定期支原体检测常规化坚持下去，是细胞培养实验室应对支原体感染的关键。查看更多

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初学者如何做好蛋白表达？古朵生物为你解答？重组蛋白表达技术可以用来分析基因调控以及研究蛋白质结构和功能。无论是体内功能研究还是用于结构研究的大规模生产，以及生物治疗领域的药物开发都需要用到蛋白表达技术。蛋白质通用合成路径 DNA — mRNA— 蛋白实际操作流程为 1. 克隆或合成目的基因 2. 载体构建 3. 蛋白表达与纯化 4. 蛋白的大量表达与纯化（或无）克隆或合成目的基因典型的表达载体包括至少 4 个主要元件：目的基因表达框（包括启动子和基因终止或 poly (A) 信号）细菌的复制起始点（ori）特定宿主的抗生素选择框（如潮霉素 B、霉酚酸、嘌呤霉素、杀稻瘟菌素 S 等）大肠杆菌的抗生素选择框（如氨苄青霉素、杀稻瘟菌素 S、羧苄青霉素、Zeocin 选择性抗生素抗性等）其他元件还包括：多克隆位点（MCS）（即多酶切接头）表位标签分泌信号蛋白酶识别位点内部核糖体插入位点（IRES）不同蛋白表达系统选择几种常见的蛋白表达案例蛋白表达是许多小伙伴的实验课题中的主要内容。由于涉及不同的研究领域，表达载体多种多样，每个人要表达的蛋白特性更是千差万别，特别是一些小伙伴是第一次做课题，关于怎样表达蛋白，怎样安排实验步骤更是一头雾水。这里按照不同表达载体，列举最常用的重组蛋白表达方案。对每一种蛋白表达案例从实验步骤、大只需用时间以及每个步骤需要完成的目标进行比较，大家可以对照自己的实验内容，希望能有所帮助。常用的蛋白表达（含细胞株的制备）： CHO 稳定细胞株开发 HEK293 稳定细胞株开发原核蛋白表达哺乳动物细胞瞬时表达酵母蛋白表达杆状病毒与昆虫细胞蛋白表达重组蛋白技术方案 1. CHO 稳定细胞株开发 2. HEK293 稳定细胞株开发 3. 原核蛋白表达流程 4. 哺乳动物细胞瞬时表达流程 5. 酵母蛋白表达流程 6. 杆状病毒 - 昆虫细胞蛋白表达流程 7 不同蛋白表达之比较以上实验方案的完成时间是较为成熟的实验室的工作流程用时，小伙伴可以根据自己的实验安排灵活掌握。完成目标也应该根据自己的课题要求进行适当增减。查看更多

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血清的功能及对血清瓶的要求? 血清在细胞培养中对细胞的生长增值具有难以替代的作用，那么血清是如何在细胞培养中发挥作用，对血清瓶包装又有哪些要求呢？血清的功能： 1、血清中的主要物质为蛋白质，白蛋白等具有缓冲细胞培养液酸碱度、维持渗透压的作用； 2、转铁蛋白、甲状腺素结合蛋白等结合蛋白，有识别维生素、脂类、金属和其它激素等，并能与有毒金属和热原质结合，从而起到解毒作用； 3、纤维粘连素、胎牛血清中的胎球蛋白、贴壁因子等能促进细胞贴壁、铺展； 4、多肽类如血小板促生长因子、成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子、胰岛素、类胰岛素生长因子、促生长激素、氢化可的松等能支持细胞分裂增殖并维持细胞对数生长； 5、巨球蛋白等蛋白酶抑制剂能抑制蛋白酶，保护细胞不受损害； 6、血清中还含有丰富的氨基酸、葡萄糖、酮酸及与蛋白相结合状态的微量元素等，对细胞培养均有意义。对血清瓶的要求：血清具有复杂的成分和重要功能，所以血清的保存和使用显得非常重要。在血清瓶的选择上一般要求瓶体透明，无DNA酶、无RNA酶、无热源等影响细胞生长的物质，密封防渗漏。值得注意的是，血清一般需要在-5℃至-20℃环境中储存，因此血清瓶的材料还必须满足耐低温的特性。查看更多

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污染细胞的支原体从哪里来? 在培养细胞时，人们常常关注细菌和真菌的污染，认为它们是细胞培养的主要干扰因素。但其实，更严重的是支原体的感染，它的发生率非常高，而且不易被发现。古朵生物为您分析污染细胞的支原体从哪里来。不仅普通光镜下无法发现支原体，而且培养基也不容易变色。但支原体对细胞的各种干扰却是不容忽视的。它不仅导致细胞状态不佳，生长速度慢，而且会使细胞内DNA、RNA及蛋白表达发生改变，严重影响实验结果。因此，在预防和治疗支原体污染之前，有必要去了解细胞被支原体污染的可能途径。支原体可以通过顶部的细胞器特异性和宿主细胞结合。这些顶部的细胞器含有高浓度的粘附蛋白，可粘附到真核细胞并穿入到细胞内部。支原体缺乏细胞壁，它们的胞膜可和宿主的细胞膜融合并交换其胞膜和胞浆成分。支原体污染的频率和污染来源细胞培养中有几种支原体污染与人、牛和猪有关。实验室的工作人员是口腔支原体、发酵支原体和人型支原体的主要来源。这三种支原体占细胞培养中支原体污染的一半以上，它们主要存在于人的口咽部。精氨酸支原体和无胆甾原体是另两类细胞培养中的支原体，它们来自胎牛血清和新生牛血清。胰酶如果是猪来源的，那么也可能存在猪鼻支原体。支原体在实验室内的扩散来源 McGarrity设计了一个模型，来发现支原体是如何在超净台里的细胞传代过程中发生传播的。他先故意用支原体感染细胞。在超净台中，用胰蛋白酶消化该污染的细胞后发现，活的支原体可从细胞培养瓶外的细胞计数板、移液器、废弃盘中被技术员分离出来。即使过了四至六天，活的支原体仍然可以存在于超净台表面，可被成功恢复。在超净台里，传代完被支原体污染的细胞后，再传代干净的不含支原体的细胞，结果仍然在6周后被检测出支原体阳性。这些结果表明，支原体的传播是多么的快速和容易！它也警告我们，要zui大限度的避免支原体的污染，因为一瓶细胞发生污染，就会带来支原体传播的可能。未真正消毒的耗材、培养基和溶液不恰当的消毒导致污染的另一个原因。高压锅或干热烤箱中堆积太多的物品造成加热不均，使一小部分耗材未得到消毒。灭菌循环时间过短是另一个消毒上犯的错误，特别是对于超过500ml的液体，或者是包含固体成分的溶液，或胶体物质如琼脂、淀粉等。为了实现无菌，灭菌材料的尺寸、质量、性质和体积必须始终考虑。在无菌和无昆虫区域存放消毒好的物品，使防止再次污染的前提。良好的无菌操作也是至关重要的。实验室人员在因人导致的细胞支原体污染中，口腔支原体发生率zui高，它主要存在人的口咽部。发酵支原体和唾液支原体也在污染的细胞培养液中被检测出来，不过发生率更低。被支原体污染的细胞实验室内细胞支原体的相互传染，有必要对于从外源获得的新的细胞系进行支原体检测。一瓶细胞中的单个支原体的存在足以威胁到其他培养的细胞。支原体的污染能通过细胞操作产生的气溶胶或液滴传播。所以，应一次只操作一种细胞，为每种细胞系配置单独的培养基和试剂，这能避免支原体的污染。细胞培养的正确操作和对新培养的细胞定期检查，可以减少支原体污染的机会。查看更多

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生物安全柜标准操作你知道吗? 生物安全柜在致病菌检测过程中起着至关重要的作用，本文为大家提供了生物安全柜操作规程的制定思路，希望对大家工作有所帮助！ 1、安全柜应放置于十万级以下的初级净化间。操作前应打开紫外灯，照射30min，后将本次操作所需的全部物品移入安全柜，避免双臂频繁穿过气幕破坏气流；并且在移入前用75%酒精擦拭物品表面消毒，以去除污染。 2、打开风机10min，待柜内空气净化并气流稳定后再进行实验操作。将双臂缓缓伸入安全柜内，至少静止2min，使柜内气流稳定后再进行操作。 3、生物安全柜内不放与本次实验无关的物品。物品应尽量靠后放置，不得挡住气道口，以免干扰气流正常流动。 4、操作时应避免交叉污染。为防止可能溅出的液滴，应准备好75%的酒精棉球或用消毒剂浸泡的小块纱布，避免用物品覆盖住安全柜的格栅。 5、在实验操作时，不可完全打开玻璃视窗，应保证操作人员的脸部在工作窗口之上。在柜内操作时动作应轻柔、舒缓，防止影响柜内气流。 6、安全柜应定期进行检测与保养，以保证其正常工作。工作中一旦发现安全柜工作异常，应立即停止工作，采取相应处理措施，并通知质量部经理。 7 、检验完成后，关闭玻璃视窗，保持风机继续运转10min，同时打开紫外灯，照射30min。 8、安全柜应定期进行清洁消毒，可用75%酒精或0.2%新洁尔灭溶液擦拭工作台面及柜体外表面；每次检验工作完成后应全面消毒。 9、柜内使用的物品应在消毒缸消毒后再取出，以防止将标准菌株残留带出而污染环境，造成生物危害。 10、使用方法： 10.1安全柜采用LED液晶面板控制，控制面板包括的功能键有：电源开关键、杀菌灯键、风挡键（快速、慢速、无风）、照明键。 10.2插上220V交流电源后，按下控制面板上的所示电源开关开启即可使用；需要灭菌时，按灭菌灯键；风挡键有三级（快速、慢速、无风）循环，默认为无风，按一次为慢速，再按为快速，第三次则回到无风，如此循环；平时操作照明，只需按照明键即可。 11 设备的维护保养： 11.1每次检验操作后用75%的酒精（其他杀菌剂视用户使用的材料而定）彻底对安全柜内部工作区域表面、侧壁、后壁、窗户进行表面净化。切勿使用含有氯的杀菌剂，因为它可能对安全柜的不锈钢结构造成损坏。同时对紫外灯和电源输出口表面进行清洁。当清洁安全柜内部区域时，操作人员除了手放以外，身体的其他任何部位不能进入安全柜。 11.2长时间未实验时也得每两周进行清洁维护，按5.1进行，定期清洁不锈钢表面会使之保持表面的光滑美观。 11.3每月用湿布对安全柜外部表面进行擦拭，尤其是安全柜的前面和上部，把堆积的灰尘打扫干净。并检查所有的维护配件的合理使用情况。 11.4根据实际情况，每个季度或者半年检查安全柜的任何物理异常或故障，如有异常及时报修；将初效过滤器拆下清洗，防止积尘将导致进风量不足，而降低洁净效果。 11.5每年请具备资格的认证技术人员对安全柜进行性能认证，依据紫外灯使用寿命效果，进行紫外灯的更换；当正常调节或清洗初效空气过滤器后，仍达不到理想的截面风速时，则应调节风机的工作电压（旋动旋钮），从而达到理想的均匀风速（将调节风速旋钮从左向右，从低速向高速缓慢调节，新工作台不应调至最高风速）。 11.6在使用十八个月后当风机工作电压调整至最高点时，仍不能达到理想风速时，则说明高效空气过滤器积尘过多（滤料上滤孔已基本被堵，要及时更新），一般高效空气过滤器的使用期限为十八个月；更换高效空气过滤器时，应注意型号规格尺寸（原生产厂家配置），按箭头风向装置，并注意过滤器的周边密封，绝对无渗漏现象发生。查看更多

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微生物菌种菌剂有多少种?怎么分类? 微生物菌种菌剂有很多种分类，按微生物菌种菌剂中特定的微生物大致可以分为细菌、放线菌（比如抗生菌）、真菌（如菌根真菌类）、固氮蓝藻菌等。当然，还可以按微生物菌种菌剂的作用机理等进行分类。微生物菌种菌剂是一种含有活微生物的特定制品，以微生物生命活动的过程和产物来改善作物营养件，发挥土壤潜在肥力，刺激作物生长发育，抵抗各种病虫害，从而提高作物产量和品质。它并不像一般的肥料那样，可以直接给作物提供养料物质。 1、按微生物菌种菌剂制品内含物可分为单纯的微生物菌剂和复合(或复混)微生物菌剂等.例如,鹤壁人元生物微生物菌剂属于真菌菌剂,固氮类菌剂和复合微生物菌剂。 2、按微生物菌种菌剂制品中特定的微生物种类分为细菌菌剂、放线菌菌剂(如抗生菌类)、真菌菌剂(如菌根真菌类)、固氮蓝藻菌剂等； 3、按微生物菌种菌剂作用机理分为根瘤菌类菌剂、固氮菌类菌剂、解磷菌类菌剂、解钾菌类菌剂；微生物菌剂的作用主要是与营养元素的来源和有效性有关,或与作物吸收营养、水分和抗病有关,总的来说以下几个方面： 1、增进土壤肥力：这是微生物菌剂的主要功效，可以改善土壤团粒结构，增强土壤的物理性能和保护植物根免受病原微生物的入侵和土壤颗粒的损失。 2、制造和协助农作物吸收营养。 3、增强植物抗病和抗旱能力。微生物菌种菌剂在作物生长所需的养分有着举足轻重的地位，不仅为作物提供了生长所需的各种养分，微生物菌种菌剂也起到了抵抗病虫害的作用。查看更多

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