今妾--盖德问答-化工人互助问答社区

今妾

影响力0.00

经验值0.10

粉丝13

给排水工程师

关注已关注 私信

目的蛋白的纯化出现了问题，怎么办? 我的目的蛋白在大肠杆菌中表达，可溶形式。但是目的蛋白的纯化出现了问题，该蛋白是一个融合蛋白，两个蛋白的等电点分别是8.4和4.2，用DNA star 分析该融合蛋白的等电点为4.8左右。我试过阴离子柱（Q，DEAE）PH7.0，8.0 ，9.0目的蛋白都是在硫穿当中，大部分杂蛋白挂在了柱上，但是杂蛋白结合的并不彻底，还有很多杂蛋白。阳离子柱（CM，SP）从PH4，4.5，6，7，8都试过都不结合，杂蛋白基本也不结合。疏水柱子也试过，结果都不理想，实在不知道还能怎么做。感觉两个蛋白融合后，可能构想就变了，其中等电点是8.4的蛋白有3个二硫键。我曾经想让蛋白表达形式为包涵体，可是不论怎么样都在上清，诱导5小时后蛋白开始降解。尝试了低温诱导，低IPTG诱导，改变过大肠杆菌的表达菌株，结果都没有用。哪位高人指点一下吧，谢谢！查看更多 1个回答 . 9人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

怎么在fluent定义相变（蒸发，液化）? 怎么在fluent定义相变（蒸发，液化）应该考虑液面曲率、温度，压强对（蒸发，液化）速度的影响。查看更多 1个回答 . 9人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

隧道地勘钻孔一般都是怎样布置? 一般有那些地方要注意点，从地形图上看那些点比较特殊。正在做初步设计，对隧道地勘钻孔布置不太熟悉，请问一般都是怎样布置的？查看更多 1个回答 . 12人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

目前在做一个氨基酸酯的衍生物。几个问题? 目前在做一个氨基酸酯的衍生物，如图所示，前面的原料没有手性可以利用，所以必须要在后边拆分，所以我想以下几个问题： 1。对于此类氨基酸酯，在我制备其游离胺化合物时，按照文献是通过先将其转化为盐酸盐，然后用10N NaOH调节pH为13-14，搅拌约15-30min。这样做会不会使得酯基皂化形成游离酸？如果有可能形成游离酸，那怎样检测？ 2。一般氨基酸酯的拆分是用L-酒石酸，L-樟脑磺酸等拆分剂进行拆分，在氨基用Boc保护后是不是就不能用这种方法了？（文献报道是用酶拆分，但周期太长）另外，哪位大侠可以给几篇文献或者书籍只类的东西，让我看看，以前没做做氨基酸类的东西，所以比较陌生。谢谢各位了！！！查看更多 1个回答 . 17人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

罐区用浪涌保护器品牌？ 大家在罐区机柜式端用浪涌保护器都什么品牌，我只知道有库柏的，其它的没用过，请赐教查看更多 1个回答 . 7人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

连接转化？ 做了两次连接转化，最后菌液pcr检测的时候只有二聚体条带，请问是没连接转化成功吗？有没有什么其他鉴定方法呢？查看更多 2个回答 . 3人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

如何处理Real time PCR的数据结果 ? 开始学习做Realtime PCR, 实验结果是出来了，得到的内参、目的基因的Ct值在15-25之间，熔融曲线基本上也是单峰，但不太会处理这个结果，对着数据发愁。。。不同的处理方法得到不同的结果。。。做的是相对定量，SYBR Green, 选用2^（-△△Ct）法一般大家是怎么处理的呢？比方实验设置如下：内参基因：对照组1、对照组2、对照组3 实验组1、实验组2、实验组3 目的基因：对照组1、对照组2、对照组3 实验组1、实验组2、实验组3 数据处理的时候，是先分别取内参、目的基因的三次平行实验的均值再拿相应均值相减得到△Ct，还是先算每组△Ct(目的基因-内参基因）后再取平均？还有对于内参基因的数据，如果所得Ct值差值在1以内，是否可以将所有的内参取平均，然后△Ct值就拿每个组的目的基因减去这个内参均值？对于内参的CT值怎样的数据算比较好呢？一般组间、组内CT差值在多少比较合理？另外对于这个REAL-TIME PCR的结果除了用EXCEL处理之外有没有其他比较可信方便的专业处理软件呢？查看更多 1个回答 . 15人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

为什么我每次融化四季清的血清都会有白色的沉淀? 为什么我每次融化四季清的血清都会有白色的沉淀，有时候还特别多，不知道是什么，师姐说让我扔了，请问各位是什么？查看更多 4个回答 . 9人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

请问远程空空导弹末制导阶段还有动力么? 如果是火箭发动机为动力的远程空空导弹，经过中制导无动力滑行段之后，进入末制导的时候会有发动机再开始工作么？查看更多 4个回答 . 7人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

总黄酮含量测定，采用常用的亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色后，样品在510nm附近没有最大吸收？大家好！我的总黄酮含量测定，采用常用的亚硝酸钠-硝酸铝- 氢氧化钠显色后，样品在510nm附近没有最大吸收，于是采用了1% 三氯化铝显色，以芦丁为对照品，在404nm和274nm有最大吸收，样品在271.5和396nm有最大吸收，于是选择了274nm做为测定波长，可是有文献说274nm的干扰很大，现在怀疑自己的做法是不是有很大的漏洞呢？不过方法学验证做了，都还可以，大家帮帮忙啊！感谢查看更多 3个回答 . 13人已关注

#亚硝酸钠

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

天根质粒小提试剂盒质粒浓度低的原因是什么? 最近在做载体构建，好不容易检测到了阳性克隆，准备摇菌提质粒进行酶切鉴定，进而测序。摇菌12-16小时后用天根小提质粒试剂盒提取质粒，加入P2后溶液没有变澄清，加P3后没有出现很大的絮状沉淀。最终测浓度只有15ng/ul左右. 跪求各位指导，不胜感激查看更多 1个回答 . 7人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

带有羧基或者酯基的仲醇能不能用沙瑞特试剂把羟基氧化成酮? 带有羧基或者酯基的仲醇能不能用沙瑞特试剂（铬酸－双吡啶络合物）把羟基氧化成酮？我就是要把酒石酸的羟基氧化成酮，最初想用丙酮和异丙醇铝，但是查资料说对碱敏感的基团不能用。大家认为用什么氧化剂好？条件要温和，后处理也容易查看更多 1个回答 . 10人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

求助石蜡切片的问题? 材料是柑橘油胞层及白皮层，材料大小长宽高5,5,2-3mm，从6月份开始采样，找了植物最常用的方法时间，6月份预实验结果非常好，然后7月份采样仍然采用此方法，做出来的片子细胞开始不完整，而且片子不清晰，后来重新调整透明和脱水时间，纯二甲苯和纯酒精时间都缩短了30min，效果还是不好，附上六月份和七月份的切片照片，难道是透蜡时间不够吗？可是六月份也是这么长时间啊，时间一点也没变过，好难过啊，本来都以为以及摸出来方法了的。查看更多 1个回答 . 6人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

一株细胞同时进行过表达和干扰的慢病毒稳转建立时，应该先进行哪一个？想做一株稳转细胞系，希望通过慢病毒过表达上游的诱导子，同时慢病毒干扰下游的介导子。想通过这样稳定表达刺激因素的同时通过封堵介导分子来判定下游靶基因是否还可以被激活。这个过程中我有个问题，就是不知道这两种病毒先哪个先进行。因为我的实验中这个被干扰的分子是可以被这个过表达的诱导分子上调的。所以，觉得应该先做过表达稳转，再做干扰的稳转，这样不仅内源性的还有后期上调的都被干扰掉了。不知道我这么分析对不对。期望有经验朋友指点迷津，或者有什么其他经验分享一下，谢谢！查看更多 2个回答 . 20人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

砂卵石地层超前小导管真的很难打吗? 当时在会上提出了“十八字方针”应该做一些修改，管超前、严注浆对于砂卵石地层来说并不适用，因为砂卵石地层打超前小导管并不是很容易，应该改成“管辅助”，这个我的理解是，如果像打钉子一样往砂卵石地层中打超前小导管，的确是很费劲，一旦小导管前顶上卵石，是很难前进的。但是我在某PBA车站，安装PBA工法扣拱初支的传感器时，发现工人并不是像钉钉子一样打超前小导管，而是先用一根细钢管，里面通压缩空气，在掌子面上方吹成比较深的孔。高速高压的空气流，会将细钢管与孔壁之间的砂石吹出，很快就形成了一个深孔，然后工人再把超前小导管推进去，似乎也没有遇到什么阻力。我的疑问是，上述案例是不是说明，砂卵石地层中打超前小导洞，也不是一件很困难的事？查看更多 5个回答 . 20人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

划线接菌，很难长出单菌落或者单菌落很少如何解决? 我划线接菌的时候已经很小心了，可还是很难长出单菌落或者单菌落很少。求助！！查看更多 3个回答 . 1人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

蛋白曝光有问题，怎么解决? 各位，最近在做蛋白，就突然出现今天的情况，上面的图是正常情况下的蛋白发现背景很好也不黑，而下面两个图发现背景很深不知道什么原因？是一抗问题吗？但是所有实验步骤都没有变化啊请教各位指导一下。谢谢查看更多 2个回答 . 8人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

人基因组血液购买？想做一个实际样品的snp检测，请问哪里能买到含特定snp的血液呢？文献中看到的好多都是检测中心或者医院提供的，不知道有没有商业化的可以买？查看更多 1个回答 . 14人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

定性定量分析？在一个混合物中，同时有氯离子、磷酸根离子、磷酸氢根离子、和磷酸二氢根离子四种离子的存在，怎样对磷酸根离子、磷酸氢根离子和磷酸二氢根离子进行定量定性分析呢查看更多 2个回答 . 4人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

PET基材上溅射沉积TiO2薄膜，怎么测量薄膜厚度？ 以前在学校是用椭偏仪测试的，但是现在学校的仪器坏了。请问哪里可以测量PET基材上溅射沉积TiO2薄膜的厚度啊？包括N,K 等参数。查看更多 2个回答 . 15人已关注

关注问题已关注 回答

登录后参与回答

上一页2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12下一页

简介

职业：九江天赐高新材料有限公司 - 给排水工程师

学校：福州大学 - 电气工程与自动化学院

地区：黑龙江省

个人简介：成功的秘诀，在永不改变既定的目的。查看更多

喜爱的版块返回首页

已连续签到天，累积获取个能量值

第1天
第2天
第3天
第4天
第5天
第6天
第7天