1
间充质干细胞无血清培养基通过避免传统含胎牛血清的培养基所带来的异源成分和成分不明确等缺点，采用一系列可替代胎牛血清的组分，包括必需和非必需氨基酸、维生素、激素、生长因子、有机和无机化合物以及其他补给成分。
1. 在实验开始前一小时，将无血清添加剂成分放置于2-8°C进行溶解，并轻轻摇晃试剂瓶使冻融的成分充分混合。
2. 使用75%酒精消毒试剂瓶的开口外壁。
3. 待试剂瓶上的酒精挥发干净后，无菌打开各个试剂瓶。
4. 将添加剂加入间充质干细胞无血清基础培养基中。
5. 无菌吸取基础培养基洗涤添加剂瓶，尽可能将添加剂的所有成分完整地加入基础培养基中。
6. 重复上述步骤两到三遍。
7. 轻轻摇晃基础培养基瓶子，使各种成分充分混匀，并将配制好的完全培养基放置于4℃保存。
该培养基适用于多种来源的人类间充质干细胞的生长，如脐带（UCM-hMSC）、骨髓（BM-hMSC）、脂肪组织（AT-hMSC）等。
[1] 杨婷、陈广华、薛胜利、乔曼、刘慧文、田竤、乔淑敏、陈峰、陈志哲、孙爱宁 吴德沛。血清和含胎牛血清培养基培养的脐带间充质干细胞生物学特性比较研究。中华血液学杂志 显示全部
间充质干细胞无血清培养基通过避免传统含胎牛血清的培养基所带来的异源成分和成分不明确等缺点，采用一系列可替代胎牛血清的组分，包括必需和非必需氨基酸、维生素、激素、生长因子、有机和无机化合物以及其他补给成分。
1. 在实验开始前一小时，将无血清添加剂成分放置于2-8°C进行溶解，并轻轻摇晃试剂瓶使冻融的成分充分混合。
2. 使用75%酒精消毒试剂瓶的开口外壁。
3. 待试剂瓶上的酒精挥发干净后，无菌打开各个试剂瓶。
4. 将添加剂加入间充质干细胞无血清基础培养基中。
5. 无菌吸取基础培养基洗涤添加剂瓶，尽可能将添加剂的所有成分完整地加入基础培养基中。
6. 重复上述步骤两到三遍。
7. 轻轻摇晃基础培养基瓶子，使各种成分充分混匀，并将配制好的完全培养基放置于4℃保存。
该培养基适用于多种来源的人类间充质干细胞的生长，如脐带（UCM-hMSC）、骨髓（BM-hMSC）、脂肪组织（AT-hMSC）等。
[1] 杨婷、陈广华、薛胜利、乔曼、刘慧文、田竤、乔淑敏、陈峰、陈志哲、孙爱宁 吴德沛。血清和含胎牛血清培养基培养的脐带间充质干细胞生物学特性比较研究。中华血液学杂志
1
免疫细胞无血清培养基是一种用于体外诱导和扩增脐带血或外周血中分离的单核细胞向CIK细胞进行培养的培养基。
1、不含血清和细胞因子的培养基。
2、不含异源动物成分，化学成分经过限定的培养基。
3、具有优越的培养性能，支持高密度单核细胞的培养。
1、长期增殖培养DC细胞、CIK细胞和NK细胞。
2、长期增殖培养PBL细胞和TIL细胞。
3、长期增殖培养单核细胞和巨噬细胞。
4、长期增殖培养T淋巴细胞。
1、采集和分离外周血，使用Ficoll密度梯度离心法分离并收集单核细胞。
2、接种和诱导活化单核细胞
1) 在0天时，计数细胞并按照细胞密度2x106cell/mL接种到相应体积的培养液中。添加YC001诱导因子和10%自体血浆。
2) 在1天时（24小时），向已接种细胞的培养液中添加YC002、YC003和YC004诱导因子。将YC005添加到未使用的培养基中备用。
3、连续培养和扩增细胞
1) 在3天时，添加新鲜培养液，将细胞密度调整至(0.6-0.8)x106cell/mL。同时添加新加入培养液体积的10%自体血浆。补液比例大致为1：2（原有培养液体积：新加培养液体积）。
2) 在5天时，添加新鲜培养液，将细胞密度调整至(0.6-0.8)x106cell/mL。补液比例大致为1：3。
3) 在7天时，添加新鲜培养液，将细胞密度调整至(0.6-0.8)x106cell/mL。补液比例大致为1：2。
4) 在9天时，将剩余的培养液全部加入。
4、收获细胞
在培养周期结束后，根据细胞数量收获细胞。
[1] 孙婧、陈红松、高燕、王松霞、张毅、王宇；无血清培养基与完全培养基对体外诱导免疫细胞支持作用的比较。中国肿瘤生物治疗杂志。 显示全部
免疫细胞无血清培养基是一种用于体外诱导和扩增脐带血或外周血中分离的单核细胞向CIK细胞进行培养的培养基。
1、不含血清和细胞因子的培养基。
2、不含异源动物成分，化学成分经过限定的培养基。
3、具有优越的培养性能，支持高密度单核细胞的培养。
1、长期增殖培养DC细胞、CIK细胞和NK细胞。
2、长期增殖培养PBL细胞和TIL细胞。
3、长期增殖培养单核细胞和巨噬细胞。
4、长期增殖培养T淋巴细胞。
1、采集和分离外周血，使用Ficoll密度梯度离心法分离并收集单核细胞。
2、接种和诱导活化单核细胞
1) 在0天时，计数细胞并按照细胞密度2x106cell/mL接种到相应体积的培养液中。添加YC001诱导因子和10%自体血浆。
2) 在1天时（24小时），向已接种细胞的培养液中添加YC002、YC003和YC004诱导因子。将YC005添加到未使用的培养基中备用。
3、连续培养和扩增细胞
1) 在3天时，添加新鲜培养液，将细胞密度调整至(0.6-0.8)x106cell/mL。同时添加新加入培养液体积的10%自体血浆。补液比例大致为1：2（原有培养液体积：新加培养液体积）。
2) 在5天时，添加新鲜培养液，将细胞密度调整至(0.6-0.8)x106cell/mL。补液比例大致为1：3。
3) 在7天时，添加新鲜培养液，将细胞密度调整至(0.6-0.8)x106cell/mL。补液比例大致为1：2。
4) 在9天时，将剩余的培养液全部加入。
4、收获细胞
在培养周期结束后，根据细胞数量收获细胞。
[1] 孙婧、陈红松、高燕、王松霞、张毅、王宇；无血清培养基与完全培养基对体外诱导免疫细胞支持作用的比较。中国肿瘤生物治疗杂志。
1
无淀粉改良罗氏培养基是一种用于结核杆菌分离鉴定的培养基。它由新鲜鸡蛋液、谷氨酸钠、甘油、孔雀石绿、磷酸二氢钾、硫酸镁和柠檬酸镁等组成。
分枝杆菌等痰液细菌在人工培养时，需要充足的营养成分。谷氨酸钠提供氮源，鸡卵液是良好的营养物质，同时还能降低脂肪酸的毒性。甘油和枸橼酸盐提供碳源，而钾、镁、磷、硫等无机盐是细菌生长所需的元素。磷酸盐具有缓冲作用。因此，无淀粉改良罗氏培养基为分枝杆菌提供了良好的生长环境。结核分枝杆菌是细长略带弯曲的杆菌，大小约为1～4X0.4μm。分枝杆菌则较为粗短。分枝杆菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60%，其中有大量的分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面，这会影响染料的穿透。一般使用齐尼抗酸染色法来染色分枝杆菌，经过5%石炭酸复红加温染色后，分枝杆菌会染上颜色，而用3%盐酸乙醇则不容易脱色。如果再使用美蓝复染，分枝杆菌呈红色，而其他细菌和背景物质呈蓝色。该菌没有芽孢和鞭毛。结核分枝杆菌最适生长温度为37℃，低于30℃时无法生长。由于结核分枝杆菌细胞壁脂质含量较高，影响了营养物质的吸收，因此生长速度较慢。在一般培养基中，每分裂1代需时18～24小时，而在营养丰富的情况下，只需5小时。
无淀粉改良罗氏培养基是一种固体培养基，被广泛应用于临床，用于培养结核分枝杆菌。它具有制作简便、价格低廉、便于观察菌落形态等特点。由于添加了孔雀绿等抑制普通细菌生长的物质，罗氏培养基上很少有普通细菌生长的报道。目前，对无淀粉改良罗氏培养基的进一步改良研究正在进行中。
[1]A selective oleic acid albumin agar medium for tubercule bacilli.Mitchison,D.A.,B.W Allen,L.Carrol,J.M.Dickinson,V.R.Aber.J.Med.Microbiol.1972
[2]Diagnostic Methods in Tuberculosis.Ⅱ.Demonstration of M.tuberculosis by Culture.Cummings,M.M.Am.J.Clin.Path.1951
[3][Experience of disappearance of colonies,grown on Ogawa‘s 3%KH2PO4-egg yolk medium,which resemble colonies of Mycobacterium tuberculosis.].TOMITA T.Kekkaku.1958
[4][Experience of disappearance of colonies,grown on Ogawa‘s 3%KH2PO4-egg yolk medium,which resemble colonies of Mycobacterium tuberculosis.].TOMITA T.Kekkaku.1958
[5]于滨.对罗氏培养基进一步改良的初步研究[D].大连医科大学,2008.
显示全部无淀粉改良罗氏培养基是一种用于结核杆菌分离鉴定的培养基。它由新鲜鸡蛋液、谷氨酸钠、甘油、孔雀石绿、磷酸二氢钾、硫酸镁和柠檬酸镁等组成。
分枝杆菌等痰液细菌在人工培养时，需要充足的营养成分。谷氨酸钠提供氮源，鸡卵液是良好的营养物质，同时还能降低脂肪酸的毒性。甘油和枸橼酸盐提供碳源，而钾、镁、磷、硫等无机盐是细菌生长所需的元素。磷酸盐具有缓冲作用。因此，无淀粉改良罗氏培养基为分枝杆菌提供了良好的生长环境。结核分枝杆菌是细长略带弯曲的杆菌，大小约为1～4X0.4μm。分枝杆菌则较为粗短。分枝杆菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60%，其中有大量的分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面，这会影响染料的穿透。一般使用齐尼抗酸染色法来染色分枝杆菌，经过5%石炭酸复红加温染色后，分枝杆菌会染上颜色，而用3%盐酸乙醇则不容易脱色。如果再使用美蓝复染，分枝杆菌呈红色，而其他细菌和背景物质呈蓝色。该菌没有芽孢和鞭毛。结核分枝杆菌最适生长温度为37℃，低于30℃时无法生长。由于结核分枝杆菌细胞壁脂质含量较高，影响了营养物质的吸收，因此生长速度较慢。在一般培养基中，每分裂1代需时18～24小时，而在营养丰富的情况下，只需5小时。
无淀粉改良罗氏培养基是一种固体培养基，被广泛应用于临床，用于培养结核分枝杆菌。它具有制作简便、价格低廉、便于观察菌落形态等特点。由于添加了孔雀绿等抑制普通细菌生长的物质，罗氏培养基上很少有普通细菌生长的报道。目前，对无淀粉改良罗氏培养基的进一步改良研究正在进行中。
[1]A selective oleic acid albumin agar medium for tubercule bacilli.Mitchison,D.A.,B.W Allen,L.Carrol,J.M.Dickinson,V.R.Aber.J.Med.Microbiol.1972
[2]Diagnostic Methods in Tuberculosis.Ⅱ.Demonstration of M.tuberculosis by Culture.Cummings,M.M.Am.J.Clin.Path.1951
[3][Experience of disappearance of colonies,grown on Ogawa‘s 3%KH2PO4-egg yolk medium,which resemble colonies of Mycobacterium tuberculosis.].TOMITA T.Kekkaku.1958
[4][Experience of disappearance of colonies,grown on Ogawa‘s 3%KH2PO4-egg yolk medium,which resemble colonies of Mycobacterium tuberculosis.].TOMITA T.Kekkaku.1958
[5]于滨.对罗氏培养基进一步改良的初步研究[D].大连医科大学,2008.
1
liz-gal琼脂是一种用于食品、饮料和饮用水中大肠菌群快速检验和计数的琼脂。它的成分包括胰蛋白胨、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和月桂基硫酸钠等。大肠菌群通过分解琼脂中的酶底物茜素-β-D-半乳糖苷(Aliz-gal)产生β-半乳糖苷酶，使茜素游离，并与培养基中的铝、钾、铁、铵离子结合形成紫色(或红色)的螯合物，使菌落呈现相应的颜色。
大肠菌群是与粪便污染有关的一组细菌，它们在生化及血清学方面有一定的特性。大肠菌群包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。这些细菌都来自于人和温血动物的肠道，能够在37℃条件下分解乳糖产酸产气。大肠菌群的检测可以评估食品的卫生质量，目前有多种方法可以进行检测，包括培养法、酶化学法、生物发光法、分子生物学法和免疫学法等。
大肠菌群的快速检测方法是对食品卫生质量评估中必不可少的一环。目前，常用的检测方法包括试管发酵法、平板法、膜过滤法、试纸片法、酶化学法、生物发光法、分子生物学法和免疫学法等。其中，试管发酵法和还原法相结合的方法可以通过颜色的变化来判定大肠菌群的数量，这种方法具有快速、准确的特点。
大肠菌群的检测方法在食品卫生质量评估、环境监测和水质检测等领域有着广泛的应用。通过检测大肠菌群的存在和数量，可以判断食品是否受到粪便污染，评估食品的卫生质量。同时，大肠菌群的数量也与食品受肠道致病菌的入侵程度成正比，因此对于食品安全的评估非常重要。
[1] Evaluation of dry medium(Sanita-Kun)for enumeration of coliforms and Escherichia coli in milk,ice cream,ham,and codfish fillet[J].Jung Hyun Park,Xin Yue Wang,Jong Suk Lee,Myunghee Kim.Food Science and Biotechnology.2012(6)
[2] An advanced PCR method for the specific detection of viable total coliform bacteria in pasteurized milk[J].Takashi Soejima,Jun-ichi Minami,Tomoko Yaeshima,Keiji Iwatsuki.Applied Microbiology and Biotechnology.2012(2)
[3] A rapid method for the detection of representative coliforms in water samples:polymerase chain reaction-enzyme-linked immunosorbent assay(PCR-ELISA)[J].Jong-Tar Kuo,Chiu-Yu Cheng,Hsiao-Han Huang,Chia-Fen Tsao,Ying-Chien Chung.Journal of Industrial Microbiology&Biotechnology.2010(3)
[4] Sensitive and rapid chemiluminescence enzyme immunoassay for microcystin-LR in water samples[J].F.Long,H.C.Shi,M.He,J.W.Sheng,J.F.Wang.Analytica Chimica Acta.2009(1)
[5] 吕肖楠.大肠菌群快速检测方法的研究[D].东北农业大学,2014.
显示全部liz-gal琼脂是一种用于食品、饮料和饮用水中大肠菌群快速检验和计数的琼脂。它的成分包括胰蛋白胨、氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和月桂基硫酸钠等。大肠菌群通过分解琼脂中的酶底物茜素-β-D-半乳糖苷(Aliz-gal)产生β-半乳糖苷酶，使茜素游离，并与培养基中的铝、钾、铁、铵离子结合形成紫色(或红色)的螯合物，使菌落呈现相应的颜色。
大肠菌群是与粪便污染有关的一组细菌，它们在生化及血清学方面有一定的特性。大肠菌群包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。这些细菌都来自于人和温血动物的肠道，能够在37℃条件下分解乳糖产酸产气。大肠菌群的检测可以评估食品的卫生质量，目前有多种方法可以进行检测，包括培养法、酶化学法、生物发光法、分子生物学法和免疫学法等。
大肠菌群的快速检测方法是对食品卫生质量评估中必不可少的一环。目前，常用的检测方法包括试管发酵法、平板法、膜过滤法、试纸片法、酶化学法、生物发光法、分子生物学法和免疫学法等。其中，试管发酵法和还原法相结合的方法可以通过颜色的变化来判定大肠菌群的数量，这种方法具有快速、准确的特点。
大肠菌群的检测方法在食品卫生质量评估、环境监测和水质检测等领域有着广泛的应用。通过检测大肠菌群的存在和数量，可以判断食品是否受到粪便污染，评估食品的卫生质量。同时，大肠菌群的数量也与食品受肠道致病菌的入侵程度成正比，因此对于食品安全的评估非常重要。
[1] Evaluation of dry medium(Sanita-Kun)for enumeration of coliforms and Escherichia coli in milk,ice cream,ham,and codfish fillet[J].Jung Hyun Park,Xin Yue Wang,Jong Suk Lee,Myunghee Kim.Food Science and Biotechnology.2012(6)
[2] An advanced PCR method for the specific detection of viable total coliform bacteria in pasteurized milk[J].Takashi Soejima,Jun-ichi Minami,Tomoko Yaeshima,Keiji Iwatsuki.Applied Microbiology and Biotechnology.2012(2)
[3] A rapid method for the detection of representative coliforms in water samples:polymerase chain reaction-enzyme-linked immunosorbent assay(PCR-ELISA)[J].Jong-Tar Kuo,Chiu-Yu Cheng,Hsiao-Han Huang,Chia-Fen Tsao,Ying-Chien Chung.Journal of Industrial Microbiology&Biotechnology.2010(3)
[4] Sensitive and rapid chemiluminescence enzyme immunoassay for microcystin-LR in water samples[J].F.Long,H.C.Shi,M.He,J.W.Sheng,J.F.Wang.Analytica Chimica Acta.2009(1)
[5] 吕肖楠.大肠菌群快速检测方法的研究[D].东北农业大学,2014.
1
葡萄球菌选择性肉汤培养基BAT-BOUILON肉汤是一种用于鉴定葡萄球菌的选择性培养基。它的主要成分包括水、碳源、氮源和盐类微量元素。
葡萄球菌是一类革兰氏阳性球菌，因其形状像葡萄串而得名。大多数葡萄球菌是非致病菌，但少数可以引起疾病。葡萄球菌是医院交叉感染的重要来源，其菌体直径约为0.8μm，呈小球形。在液体培养基中，葡萄球菌常常呈分散状态，单独存在。葡萄球菌病是由金黄色葡萄球菌引起的一种家禽传染病，临床上表现为关节炎、腱鞘炎、脚垫肿、脐炎和葡萄球菌性败血症等，给养禽业造成了较大的损失。葡萄球菌在自然界中广泛分布于健康禽类的皮肤、羽毛、眼睑、粘膜和肠道等部位。同时，葡萄球菌也是家禽孵化、饲养和加工环境中常见的微生物之一，其中包括金黄色葡萄球菌（黄色）、白色葡萄球菌（白色）和柠檬色葡萄球菌（橙色）等。金黄色葡萄球菌是各种脓疡的病原菌，白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌是半腐物营养型菌株。葡萄球菌在普通培养基上生长良好，培养相对简单，但从动物体上分离的葡萄球菌对各种氨基酸和生长因子的要求较高，尤其对烟酸和硫胺素的要求更为明显。
葡萄球菌选择性肉汤培养基BAT-BOUILON肉汤在研究肥胖与胃食管反流病的关系以及肥胖大鼠食管下段菌群及乳杆菌种的变化方面具有应用价值。
目前，国内外的研究表明，肥胖人群易患GERD症状。因此，本研究旨在分析肥胖患者各相关指标与GERD症状发生可能的关系。研究发现，肥胖相关指标中的BMI、腰围和WHI与GERD的发病有关，尤其是腰围和WHI增加代表的腹型肥胖与GERD的关系更为密切。GERD症状的加重对患者的生活质量造成了一定影响，GERD患者的生活质量评分和心理评分均低于正常人群。症状的严重程度与患者的心身健康水平在一定程度上相关，尤其在症状严重程度对患者体能、体能影响、身体疼痛、精力、社会活动和精神影响方面表现得更明显。目前对GERD发病机制的研究主要集中在胃食管连接部运动异常和食管下段清除能力下降方面。有研究表明，细菌不仅可以影响胃肠道平滑肌粘膜的敏感性，还会对平滑肌的动力产生影响。已经发现肥胖者的胃肠道细菌组成与普通个体存在差异。通过细菌培养、变性梯度凝胶电泳（DGGE）和测序的方法，可以了解高脂饮食诱导的肥胖是否会影响食管下段的菌群组成。
[1] Development of gut microflora in obese and lean rats[J]. Folia Microbiologica. 2010(4)
[2] Inflammation and Intestinal Metaplasia of the Distal Esophagus Are Associated With Alterations in the Microbiome[J]. Liying Yang, Xiaohua Lu, Carlos W. Nossa, Fritz Francois, Richard M. Peek, Zhiheng Pei. Gastroenterology. 2009(2)
[3] Gastroesophageal Reflux Disease (GERD): Risk Factors, and Impact on Quality of Life - A Population-based Study[J]. Guy D. Eslick, Nicholas J. Talley. Journal of Clinical Gastroenterology. 2009(2)
[4] Dysfunction of the lower esophageal sphincter and dysmotility of the tubular esophagus in morbidly obese patients[J]. Obesity Surgery. 2009(8)
[5] 赵鑫. 肥胖与胃食管反流病的关系及肥胖大鼠食管下段菌群及乳杆菌种的变化的研究[D]. 中南大学, 2011.
显示全部葡萄球菌选择性肉汤培养基BAT-BOUILON肉汤是一种用于鉴定葡萄球菌的选择性培养基。它的主要成分包括水、碳源、氮源和盐类微量元素。
葡萄球菌是一类革兰氏阳性球菌，因其形状像葡萄串而得名。大多数葡萄球菌是非致病菌，但少数可以引起疾病。葡萄球菌是医院交叉感染的重要来源，其菌体直径约为0.8μm，呈小球形。在液体培养基中，葡萄球菌常常呈分散状态，单独存在。葡萄球菌病是由金黄色葡萄球菌引起的一种家禽传染病，临床上表现为关节炎、腱鞘炎、脚垫肿、脐炎和葡萄球菌性败血症等，给养禽业造成了较大的损失。葡萄球菌在自然界中广泛分布于健康禽类的皮肤、羽毛、眼睑、粘膜和肠道等部位。同时，葡萄球菌也是家禽孵化、饲养和加工环境中常见的微生物之一，其中包括金黄色葡萄球菌（黄色）、白色葡萄球菌（白色）和柠檬色葡萄球菌（橙色）等。金黄色葡萄球菌是各种脓疡的病原菌，白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌是半腐物营养型菌株。葡萄球菌在普通培养基上生长良好，培养相对简单，但从动物体上分离的葡萄球菌对各种氨基酸和生长因子的要求较高，尤其对烟酸和硫胺素的要求更为明显。
葡萄球菌选择性肉汤培养基BAT-BOUILON肉汤在研究肥胖与胃食管反流病的关系以及肥胖大鼠食管下段菌群及乳杆菌种的变化方面具有应用价值。
目前，国内外的研究表明，肥胖人群易患GERD症状。因此，本研究旨在分析肥胖患者各相关指标与GERD症状发生可能的关系。研究发现，肥胖相关指标中的BMI、腰围和WHI与GERD的发病有关，尤其是腰围和WHI增加代表的腹型肥胖与GERD的关系更为密切。GERD症状的加重对患者的生活质量造成了一定影响，GERD患者的生活质量评分和心理评分均低于正常人群。症状的严重程度与患者的心身健康水平在一定程度上相关，尤其在症状严重程度对患者体能、体能影响、身体疼痛、精力、社会活动和精神影响方面表现得更明显。目前对GERD发病机制的研究主要集中在胃食管连接部运动异常和食管下段清除能力下降方面。有研究表明，细菌不仅可以影响胃肠道平滑肌粘膜的敏感性，还会对平滑肌的动力产生影响。已经发现肥胖者的胃肠道细菌组成与普通个体存在差异。通过细菌培养、变性梯度凝胶电泳（DGGE）和测序的方法，可以了解高脂饮食诱导的肥胖是否会影响食管下段的菌群组成。
[1] Development of gut microflora in obese and lean rats[J]. Folia Microbiologica. 2010(4)
[2] Inflammation and Intestinal Metaplasia of the Distal Esophagus Are Associated With Alterations in the Microbiome[J]. Liying Yang, Xiaohua Lu, Carlos W. Nossa, Fritz Francois, Richard M. Peek, Zhiheng Pei. Gastroenterology. 2009(2)
[3] Gastroesophageal Reflux Disease (GERD): Risk Factors, and Impact on Quality of Life - A Population-based Study[J]. Guy D. Eslick, Nicholas J. Talley. Journal of Clinical Gastroenterology. 2009(2)
[4] Dysfunction of the lower esophageal sphincter and dysmotility of the tubular esophagus in morbidly obese patients[J]. Obesity Surgery. 2009(8)
[5] 赵鑫. 肥胖与胃食管反流病的关系及肥胖大鼠食管下段菌群及乳杆菌种的变化的研究[D]. 中南大学, 2011.
1
瑞德西韦是一种核苷类似物，属于RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp)抑制剂，可以通过抑制病毒核酸合成来抗击病毒。目前已经进行到了针对埃博拉病毒感染的临床研究的II期阶段。在小鼠感染MERS后，瑞德西韦的联合疗法表现出更好的效果，能够减少病毒复制并改善肺功能。最近的研究表明，瑞德西韦对抑制新冠病毒也具有一定的活性作用。
合成方法一：
瑞德西韦（GS-5734）的化合物专利CN103052631B和Dustin Siegel等人在2017年发表的JMC都报道了这条路线，但需要进行SFC拆分。首先，化合物15与内脂14在丁基锂的作用下进行糖苷化反应（其中包括化合物15的芳香伯胺的原位硅保护和脱保护过程）。然后，化合物16进行氰基化反应，接着进行脱苄基保护得到化合物4。化合物4再与化合物19反应得到消旋的最终化合物，最后通过SFC拆分得到手性化合物。
合成方法二：
Travis K. Warren等人在2016年发表的Nature以及Dustin Siegel等人在2017年发表的JMC都报道了瑞德西韦（GS-5734）的二代合成方法，这是一种手性合成方法，可以在实验室中放大至百克级。该方法共有6步反应，各步骤的收率分别为40%，85%，86%，90%，70%，69%。第一步的糖苷化反应使用碘代物取代了一代方法中的溴代物，并使用格氏试剂进行卤素交换，产率为40%，高于一代方法。氰基化反应和醚的脱苄基反应条件经过优化后，产率都有较大幅度的提高，成功得到化合物Nucleoside(Nuc)。通过保护邻位顺式双羟基，高产率得到化合物5。化合物5与单一构型的6进行反应，再进行脱保护反应，最终得到手性的最终化合物。在这里，单一构型的化合物6显得尤为重要。研究发现，在异丙醚作为溶剂重结晶的情况下，消旋的化合物9可以得到单一构型的化合物6，这一发现对于大规模生产非常重要。
[1]Warren,T.,Jordan,R.,Lo,M.etal.TherapeuticefficacyofthesmallmoleculeGS-5734againstEbolavirusinrhesusmonkeys.Nature531,381–385(2016).https://doi.org/10.1038/nature17180
[2] Siegel D , Hui H C , Doerffler E , et al. Discovery and Synthesis of a Phosphoramidate Prodrug of a Pyrrolo(2,1-f][triazin-4-amino] Adenine C-Nucleoside (GS-5734) for the Treatment of Ebola and Emerging Viruses[J]. Journal of Medicinal Chemistry, 2017, 60(5):1648-1661.
[3]CN103052631B
显示全部瑞德西韦是一种核苷类似物，属于RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp)抑制剂，可以通过抑制病毒核酸合成来抗击病毒。目前已经进行到了针对埃博拉病毒感染的临床研究的II期阶段。在小鼠感染MERS后，瑞德西韦的联合疗法表现出更好的效果，能够减少病毒复制并改善肺功能。最近的研究表明，瑞德西韦对抑制新冠病毒也具有一定的活性作用。
合成方法一：
瑞德西韦（GS-5734）的化合物专利CN103052631B和Dustin Siegel等人在2017年发表的JMC都报道了这条路线，但需要进行SFC拆分。首先，化合物15与内脂14在丁基锂的作用下进行糖苷化反应（其中包括化合物15的芳香伯胺的原位硅保护和脱保护过程）。然后，化合物16进行氰基化反应，接着进行脱苄基保护得到化合物4。化合物4再与化合物19反应得到消旋的最终化合物，最后通过SFC拆分得到手性化合物。
合成方法二：
Travis K. Warren等人在2016年发表的Nature以及Dustin Siegel等人在2017年发表的JMC都报道了瑞德西韦（GS-5734）的二代合成方法，这是一种手性合成方法，可以在实验室中放大至百克级。该方法共有6步反应，各步骤的收率分别为40%，85%，86%，90%，70%，69%。第一步的糖苷化反应使用碘代物取代了一代方法中的溴代物，并使用格氏试剂进行卤素交换，产率为40%，高于一代方法。氰基化反应和醚的脱苄基反应条件经过优化后，产率都有较大幅度的提高，成功得到化合物Nucleoside(Nuc)。通过保护邻位顺式双羟基，高产率得到化合物5。化合物5与单一构型的6进行反应，再进行脱保护反应，最终得到手性的最终化合物。在这里，单一构型的化合物6显得尤为重要。研究发现，在异丙醚作为溶剂重结晶的情况下，消旋的化合物9可以得到单一构型的化合物6，这一发现对于大规模生产非常重要。
[1]Warren,T.,Jordan,R.,Lo,M.etal.TherapeuticefficacyofthesmallmoleculeGS-5734againstEbolavirusinrhesusmonkeys.Nature531,381–385(2016).https://doi.org/10.1038/nature17180
[2] Siegel D , Hui H C , Doerffler E , et al. Discovery and Synthesis of a Phosphoramidate Prodrug of a Pyrrolo(2,1-f][triazin-4-amino] Adenine C-Nucleoside (GS-5734) for the Treatment of Ebola and Emerging Viruses[J]. Journal of Medicinal Chemistry, 2017, 60(5):1648-1661.
[3]CN103052631B
1
AGL1菌株是一种C58, RecA型背景的农杆菌，其核基因中含有筛选标签rif和carb，这使得该菌株对利福平和羧苄青霉素具有抗性。为了方便转化操作，AGL1菌株携带了无自身转运功能的琥珀碱型hi质粒phiBo542Dh-DNA。该质粒含有转入植物基因组所必需的vir基因，而phiBo542Dh-DNA质粒自身的转移功能已被破坏。此外，该质粒还含有链霉素抗性标签strep，使得AGL1菌株适用于水稻、拟南芥、杨树等植物的转基因操作。经过pCAMBIA2301质粒检测，AGL1菌株的转化效率可达到5X 103cfu/ug。
1. 取出保存在-80℃的农杆菌感受态细胞，等待其部分融化，然后将其插入冰中。每100ul感受态细胞中加入1ug质粒DNA（体积不大于10ul），用手拨打管底混匀，然后依次在冰上静置5分钟、液氮中5分钟、37℃水浴中5分钟、冰浴中5分钟。
2. 加入700ul无抗生素的LB或YEB液体培养基，在28℃下振荡培养2~3小时。
3. 以6000rpm离心一分钟，收集菌体，留取约10ul上清液，轻轻吹打重悬菌块，然后涂布于含有相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放置于28℃培养箱中培养2-3天。
1. 最好在冰上融化感受态细胞。
2. 在混入目的DNA时应轻柔操作。
3. 当平板中只含有50ug/ml kan时，28℃培养48小时即可；当平板中同时加入50ug/ml kan和20ug/ml rif时，需在28℃下培养60小时；如果使用的平板含有50ug/ml rif，则需要在28℃下培养82-90小时。
[1] 杨佳，怡荣，张立全，牛一丁，王秀珍，哈斯阿古拉。月见草△6-脂肪酸脱氢酶基因转化油菜的研究。华北农学报。
显示全部AGL1菌株是一种C58, RecA型背景的农杆菌，其核基因中含有筛选标签rif和carb，这使得该菌株对利福平和羧苄青霉素具有抗性。为了方便转化操作，AGL1菌株携带了无自身转运功能的琥珀碱型hi质粒phiBo542Dh-DNA。该质粒含有转入植物基因组所必需的vir基因，而phiBo542Dh-DNA质粒自身的转移功能已被破坏。此外，该质粒还含有链霉素抗性标签strep，使得AGL1菌株适用于水稻、拟南芥、杨树等植物的转基因操作。经过pCAMBIA2301质粒检测，AGL1菌株的转化效率可达到5X 103cfu/ug。
1. 取出保存在-80℃的农杆菌感受态细胞，等待其部分融化，然后将其插入冰中。每100ul感受态细胞中加入1ug质粒DNA（体积不大于10ul），用手拨打管底混匀，然后依次在冰上静置5分钟、液氮中5分钟、37℃水浴中5分钟、冰浴中5分钟。
2. 加入700ul无抗生素的LB或YEB液体培养基，在28℃下振荡培养2~3小时。
3. 以6000rpm离心一分钟，收集菌体，留取约10ul上清液，轻轻吹打重悬菌块，然后涂布于含有相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放置于28℃培养箱中培养2-3天。
1. 最好在冰上融化感受态细胞。
2. 在混入目的DNA时应轻柔操作。
3. 当平板中只含有50ug/ml kan时，28℃培养48小时即可；当平板中同时加入50ug/ml kan和20ug/ml rif时，需在28℃下培养60小时；如果使用的平板含有50ug/ml rif，则需要在28℃下培养82-90小时。
[1] 杨佳，怡荣，张立全，牛一丁，王秀珍，哈斯阿古拉。月见草△6-脂肪酸脱氢酶基因转化油菜的研究。华北农学报。
1
ADP核糖基化因子6抗体是一种多克隆兔源抗体，可与人、小鼠、大鼠、猪、鸡、马等多种生物交叉反应。该抗体可应用于多种实验方法，包括免疫印迹(WB)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组化(IHC)和免疫荧光(IF)等。其分子量约为20kDa，性状可为冻干粉末或液体，浓度为1mg/1ml。
ADP核糖基化因子(ADP-ribosylation factor, ARF)是Ras基因超家族的成员，属于约20kDa的鸟嘌呤核苷酸结合蛋白。除了作为霍乱毒素ADP-核糖转移酶的辅助因子共同作用于G蛋白a亚基，ARF还参与囊泡运输和调节磷脂酶D的活性，在细胞内物质运输和信号转导过程中具有重要的生理功能。
1.直接兔疫荧光法测抗原
基本原理：将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。该方法简便、特异性高，非特异性荧光染色较少。但敏感性较低，每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。常用于微生物的快速检查以及肾炎活检和皮肤活检的免疫病理检查。
2.试剂与仪器
- 磷酸盐缓冲盐水(PBS)：0.01mol/L，pH7.4
- 荧光标记的抗体溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS进行稀释
- 缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸盐缓冲液1份配制
- 搪瓷桶三只(内有0.01mol/L，pH7.4的PBS 1500ml)
- 有盖搪瓷盒一只(内铺一层浸湿的纱布垫)
- 荧光显微镜
- 玻片架
- 滤纸
- 37°C温箱等
[1] 王磊；宿红艳；王昌留；穆春华。ADP核糖基化因子的结构及其功能机制。细胞生物学杂志
显示全部ADP核糖基化因子6抗体是一种多克隆兔源抗体，可与人、小鼠、大鼠、猪、鸡、马等多种生物交叉反应。该抗体可应用于多种实验方法，包括免疫印迹(WB)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组化(IHC)和免疫荧光(IF)等。其分子量约为20kDa，性状可为冻干粉末或液体，浓度为1mg/1ml。
ADP核糖基化因子(ADP-ribosylation factor, ARF)是Ras基因超家族的成员，属于约20kDa的鸟嘌呤核苷酸结合蛋白。除了作为霍乱毒素ADP-核糖转移酶的辅助因子共同作用于G蛋白a亚基，ARF还参与囊泡运输和调节磷脂酶D的活性，在细胞内物质运输和信号转导过程中具有重要的生理功能。
1.直接兔疫荧光法测抗原
基本原理：将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应。该方法简便、特异性高，非特异性荧光染色较少。但敏感性较低，每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体。常用于微生物的快速检查以及肾炎活检和皮肤活检的免疫病理检查。
2.试剂与仪器
- 磷酸盐缓冲盐水(PBS)：0.01mol/L，pH7.4
- 荧光标记的抗体溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS进行稀释
- 缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油9份+ pH9.2 0.2M碳酸盐缓冲液1份配制
- 搪瓷桶三只(内有0.01mol/L，pH7.4的PBS 1500ml)
- 有盖搪瓷盒一只(内铺一层浸湿的纱布垫)
- 荧光显微镜
- 玻片架
- 滤纸
- 37°C温箱等
[1] 王磊；宿红艳；王昌留；穆春华。ADP核糖基化因子的结构及其功能机制。细胞生物学杂志
1
无血清培养基是一种不含异源动物成分（Xeno-free）的人免疫细胞培养基，适用于各类免疫细胞的培养，如人淋巴细胞、CIK、DC、NK等。它具有高成活率、杀伤活性和扩增倍数的特点。
无血清培养基是一种不需要添加血清的合成培养基。它包含了血清中的粘附因子、生长因子、必需的营养物质和激素等成分，可以减少血清带来的不利因素，提供更稳定的细胞培养条件。在细胞培养领域，无血清培养基已成为一种重要的趋势，它可以简化纯化和鉴定细胞产物的程序，避免病毒污染的危害。
该研究旨在探索人表皮干细胞在有血清和无血清培养基中的生长特性，并寻找适合其体外培养的条件，以实现人表皮干细胞的良好增殖。
研究采用DispaseⅡ酶和胰蛋白酶两步法分离出角朊细胞和成纤维细胞，并制备了基于人成纤维细胞条件培养基的表皮干细胞培养基。通过角朊细胞培养作为对照组，观察人表皮干细胞的细胞形态、克隆形成率和克隆维持时间，并使用免疫细胞化学法检测β1整合素和K19的表达，以鉴定表皮干细胞。此外，将富集分离出的人表皮干细胞分为有血清培养基和无血清培养基两组进行培养，观察和比较细胞形态、克隆形成率、生长曲线以及β1整合素和K19的强阳性表达率。
研究结果显示，在Ⅳ型胶原快速包被的培养皿中，快速贴壁细胞经继续培养后，细胞克隆数增多，两周后可见大克隆形成。与角朊细胞相比，表皮干细胞具有更强的克隆形成能力，并能形成较大的克隆，两者的形成率分别为17.04±1.01%和8.72±0.73%，两者之间存在显著差异（P<0.01）。免疫细胞化学染色结果显示，人表皮干细胞具有强阳性的β1整合素和K19表达。细胞形态学分析和生长曲线表明，在培养5天前，无血清培养的人表皮干细胞增殖细胞数较有血清培养的多，第9天达到细胞基本融合状态并出现接触抑制；而在有血清培养基中，人表皮干细胞继续增殖，第11天时达到生长峰值，随后进入平台期。克隆性分析显示，两种培养基培养的表皮干细胞均呈克隆性生长，但有血清组在克隆数目和大小、克隆形成率以及克隆持续时间方面明显优于无血清组（P<0.01）。细胞周期分析显示，在有血清培养基中，人表皮干细胞的G0～G1期细胞比例明显增加。
[1]Isolation of human epidermal stem cells by adherence and the reconstruction of skin equivalents[J].D.-S.Kim,H.-J.Cho,H.-R.Choi,S.-B.Kwon,K.-C.Park.Cellular and Molecular Life Sciences.2004(21)
[2]Epidermal Stem Cells[J].V.V.Terskikh,A.V.Vasil’ev.Biology Bulletin of the Russian Academy of Sciences.2001(6)
[3]An improved method for culture of epidermal keratinocytes from newborn mouse skin[J].Lari H?kkinen,Leeni Koivisto,Hannu Larjava.Methods in Cell Science.2001(4)
[4]Cultivation of human keratinocyte stem cells:current and future clinical applications[J].G.Pellegrini,S.Bondanza,L.Guerra,M.Luca.Medical&Biological Engineering&Computing.1998(6)
[5]邱泽亮.人表皮干细胞的分离和培养的研究[D].江西医学院,2005. 显示全部
无血清培养基是一种不含异源动物成分（Xeno-free）的人免疫细胞培养基，适用于各类免疫细胞的培养，如人淋巴细胞、CIK、DC、NK等。它具有高成活率、杀伤活性和扩增倍数的特点。
无血清培养基是一种不需要添加血清的合成培养基。它包含了血清中的粘附因子、生长因子、必需的营养物质和激素等成分，可以减少血清带来的不利因素，提供更稳定的细胞培养条件。在细胞培养领域，无血清培养基已成为一种重要的趋势，它可以简化纯化和鉴定细胞产物的程序，避免病毒污染的危害。
该研究旨在探索人表皮干细胞在有血清和无血清培养基中的生长特性，并寻找适合其体外培养的条件，以实现人表皮干细胞的良好增殖。
研究采用DispaseⅡ酶和胰蛋白酶两步法分离出角朊细胞和成纤维细胞，并制备了基于人成纤维细胞条件培养基的表皮干细胞培养基。通过角朊细胞培养作为对照组，观察人表皮干细胞的细胞形态、克隆形成率和克隆维持时间，并使用免疫细胞化学法检测β1整合素和K19的表达，以鉴定表皮干细胞。此外，将富集分离出的人表皮干细胞分为有血清培养基和无血清培养基两组进行培养，观察和比较细胞形态、克隆形成率、生长曲线以及β1整合素和K19的强阳性表达率。
研究结果显示，在Ⅳ型胶原快速包被的培养皿中，快速贴壁细胞经继续培养后，细胞克隆数增多，两周后可见大克隆形成。与角朊细胞相比，表皮干细胞具有更强的克隆形成能力，并能形成较大的克隆，两者的形成率分别为17.04±1.01%和8.72±0.73%，两者之间存在显著差异（P<0.01）。免疫细胞化学染色结果显示，人表皮干细胞具有强阳性的β1整合素和K19表达。细胞形态学分析和生长曲线表明，在培养5天前，无血清培养的人表皮干细胞增殖细胞数较有血清培养的多，第9天达到细胞基本融合状态并出现接触抑制；而在有血清培养基中，人表皮干细胞继续增殖，第11天时达到生长峰值，随后进入平台期。克隆性分析显示，两种培养基培养的表皮干细胞均呈克隆性生长，但有血清组在克隆数目和大小、克隆形成率以及克隆持续时间方面明显优于无血清组（P<0.01）。细胞周期分析显示，在有血清培养基中，人表皮干细胞的G0～G1期细胞比例明显增加。
[1]Isolation of human epidermal stem cells by adherence and the reconstruction of skin equivalents[J].D.-S.Kim,H.-J.Cho,H.-R.Choi,S.-B.Kwon,K.-C.Park.Cellular and Molecular Life Sciences.2004(21)
[2]Epidermal Stem Cells[J].V.V.Terskikh,A.V.Vasil’ev.Biology Bulletin of the Russian Academy of Sciences.2001(6)
[3]An improved method for culture of epidermal keratinocytes from newborn mouse skin[J].Lari H?kkinen,Leeni Koivisto,Hannu Larjava.Methods in Cell Science.2001(4)
[4]Cultivation of human keratinocyte stem cells:current and future clinical applications[J].G.Pellegrini,S.Bondanza,L.Guerra,M.Luca.Medical&Biological Engineering&Computing.1998(6)
[5]邱泽亮.人表皮干细胞的分离和培养的研究[D].江西医学院,2005.
1
间充质干细胞无血清培养基适用于多种来源的人类间充质干细胞的生长，如脐带（UCM-hMSC）、骨髓（BM-hMSC）、脂肪组织（AT-hMSC）等。该培养基专用于脐带间充质干细胞传代培养和复苏细胞的传代培养，可以稳定传代至20代，成分明确，无血清，无动物源组分，不含任何未知组分。
间充质干细胞无血清培养基规避了传统的含胎牛血清的培养基所带来的引入异源成分、成分不明确等的缺点，内含可代替胎牛血清的一系列组分：必需和非必需氨基酸、维生素、激素、生长因子、有机和无机化合物及其他补给成分。间充质干细胞（MSC），其来源有脐带、骨髓等。如果用一颗大树来形容人体的各种细胞，干细胞就是主干，由此派生出许多枝干、分枝与树叶（各种组织细胞）。间充质干细胞，在不同条件下，可分化成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞、神经细胞、肝细胞、心肌细胞等多种细胞。正是由于间充质干细胞（MSC）的这种特性，所以间充质干细胞在临床上就有修复人体受损器官、恢复人体受损组织功能的作用。现在临床广泛做法是在体外利用新生儿脐带培养出间充质干细胞，然后回输到人体，修复对应的组织或器官。新生儿脐带，就是在间充质干细胞无血清培养基中成为间充质干细胞并且实现了大量扩增的。间充质干细胞无血清培养基，是整个间充质干细胞体外培养的核心。
脐带间充质干细胞（umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs）来源于新生儿出生后废弃的脐带组织,具有强大的自我更新能力和向脂肪细胞、骨细胞、神经细胞、肝细胞及肌细胞分化潜能。因其来源丰富,易于获取,且获取无创伤加之免疫原性低下，增殖能力强，无伦理性争议等优势，成为组织修复和器官重建理想的种子细胞来源,广泛应用于再生医学当中。临床研究中发现:间充质干细胞移植治疗组织损伤时，单次移植细胞数量高达到1×109个才能有效发挥治疗作用。
另外干细胞再生医学研究中,为了保持实验结果的稳定性和可比性,需要大量的均一来源的种子细胞。因此如何高效规模化扩增具有原代生物学特征的间充质干细胞，成为干细胞再生医学研究和应用的基础和关键。利用微载体结合生物反应器,建立了三维立体培养、规模化扩增人脐带间充质干细胞的专利技术。该技术操作简单,效率高,短时间内扩增的种子细胞高达109以上,避免了因细胞反复传代而导致的间充质干细胞老化、甚至恶变。细胞生物学、分子生物学和生物化学检测发现:三维立体培养的脐带间充质干细胞具有与平面培养的脐带间充质干细胞相同干细胞表面标志物的表达水平和增殖能力以及成脂肪、成骨及成软骨分化潜能。
[1]Complete Meiosis from Embryonic Stem Cell-Derived Germ Cells In Vitro[J].Quan Zhou,Mei Wang,Yan Yuan,Xuepeng Wang,Rui Fu,Haifeng Wan,Mingming Xie,Mingxi Liu,Xuejiang Guo,Ying Zheng,Guihai Feng,Qinghua Shi,Xiao-Yang Zhao,Jiahao Sha,Qi Zhou.Cell Stem Cell.2016(3)
[2]Mesenchymal stem cell-derived exosomes from different sources selectively promote neuritic outgrowth[J].M.A.Lopez-Verrilli,A.Caviedes,A.Cabrera,S.Sandoval,U.Wyneken,M.Khoury.Neuroscience.2016
[3]Pluripotency without Proliferation[J].Xiaodong Shu,Duanqing Pei.Cell.2016(4)
[4]ER stress and autophagy are involved in the apoptosis induced by cisplatinin human lung cancer cells[J].Shaomin Shi,Ping Tan,Bingdi Yan,Rong Gao,Jianjun Zhao,Jing Wang,Jia Guo,Ning Li,Zhongsen Ma.Oncology Reports.2016(5)
[5]赵贵芳.脐带间充质干细胞及其来源外泌体修复皮肤损伤的机制研究[D].吉林大学,2016. 显示全部
间充质干细胞无血清培养基适用于多种来源的人类间充质干细胞的生长，如脐带（UCM-hMSC）、骨髓（BM-hMSC）、脂肪组织（AT-hMSC）等。该培养基专用于脐带间充质干细胞传代培养和复苏细胞的传代培养，可以稳定传代至20代，成分明确，无血清，无动物源组分，不含任何未知组分。
间充质干细胞无血清培养基规避了传统的含胎牛血清的培养基所带来的引入异源成分、成分不明确等的缺点，内含可代替胎牛血清的一系列组分：必需和非必需氨基酸、维生素、激素、生长因子、有机和无机化合物及其他补给成分。间充质干细胞（MSC），其来源有脐带、骨髓等。如果用一颗大树来形容人体的各种细胞，干细胞就是主干，由此派生出许多枝干、分枝与树叶（各种组织细胞）。间充质干细胞，在不同条件下，可分化成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞、神经细胞、肝细胞、心肌细胞等多种细胞。正是由于间充质干细胞（MSC）的这种特性，所以间充质干细胞在临床上就有修复人体受损器官、恢复人体受损组织功能的作用。现在临床广泛做法是在体外利用新生儿脐带培养出间充质干细胞，然后回输到人体，修复对应的组织或器官。新生儿脐带，就是在间充质干细胞无血清培养基中成为间充质干细胞并且实现了大量扩增的。间充质干细胞无血清培养基，是整个间充质干细胞体外培养的核心。
脐带间充质干细胞（umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs）来源于新生儿出生后废弃的脐带组织,具有强大的自我更新能力和向脂肪细胞、骨细胞、神经细胞、肝细胞及肌细胞分化潜能。因其来源丰富,易于获取,且获取无创伤加之免疫原性低下，增殖能力强，无伦理性争议等优势，成为组织修复和器官重建理想的种子细胞来源,广泛应用于再生医学当中。临床研究中发现:间充质干细胞移植治疗组织损伤时，单次移植细胞数量高达到1×109个才能有效发挥治疗作用。
另外干细胞再生医学研究中,为了保持实验结果的稳定性和可比性,需要大量的均一来源的种子细胞。因此如何高效规模化扩增具有原代生物学特征的间充质干细胞，成为干细胞再生医学研究和应用的基础和关键。利用微载体结合生物反应器,建立了三维立体培养、规模化扩增人脐带间充质干细胞的专利技术。该技术操作简单,效率高,短时间内扩增的种子细胞高达109以上,避免了因细胞反复传代而导致的间充质干细胞老化、甚至恶变。细胞生物学、分子生物学和生物化学检测发现:三维立体培养的脐带间充质干细胞具有与平面培养的脐带间充质干细胞相同干细胞表面标志物的表达水平和增殖能力以及成脂肪、成骨及成软骨分化潜能。
[1]Complete Meiosis from Embryonic Stem Cell-Derived Germ Cells In Vitro[J].Quan Zhou,Mei Wang,Yan Yuan,Xuepeng Wang,Rui Fu,Haifeng Wan,Mingming Xie,Mingxi Liu,Xuejiang Guo,Ying Zheng,Guihai Feng,Qinghua Shi,Xiao-Yang Zhao,Jiahao Sha,Qi Zhou.Cell Stem Cell.2016(3)
[2]Mesenchymal stem cell-derived exosomes from different sources selectively promote neuritic outgrowth[J].M.A.Lopez-Verrilli,A.Caviedes,A.Cabrera,S.Sandoval,U.Wyneken,M.Khoury.Neuroscience.2016
[3]Pluripotency without Proliferation[J].Xiaodong Shu,Duanqing Pei.Cell.2016(4)
[4]ER stress and autophagy are involved in the apoptosis induced by cisplatinin human lung cancer cells[J].Shaomin Shi,Ping Tan,Bingdi Yan,Rong Gao,Jianjun Zhao,Jing Wang,Jia Guo,Ning Li,Zhongsen Ma.Oncology Reports.2016(5)
[5]赵贵芳.脐带间充质干细胞及其来源外泌体修复皮肤损伤的机制研究[D].吉林大学,2016.
1
螺旋体是一类细长、弯曲呈螺旋状、运动活波的原核细胞型微生物，具有细菌的基本结构。螺旋体染色液是一种用于显示螺旋体的染色方法，主要用于显示梅毒螺旋体和钩端螺旋体。
1、将组织切片置于10%福尔马林中固定2～4天。
2、流水冲洗过夜。
3、95%乙醇浸泡24小时。
4、蒸馏水浸洗并不停摇动，直至组织下沉为止。
5、更换新的蒸馏水浸洗10分钟。
6、入硝酸银溶液，加盖置于37℃恒温箱孵育1天，更换新的硝酸银溶液，继续37℃恒温箱孵育2天。
7、蒸馏水浸洗3次，每次10分钟。
8、入配制好的Levaditi还原液，加盖室温避光孵育2天。
9、蒸馏水浸洗3次，每次2分钟。
10、常规脱水透明，浸蜡包埋。
11、切片厚度6～8μm，贴片，烤干。
12、二甲苯脱蜡2次，中性树胶封固。
梅毒螺旋体、钩端螺旋体呈黑色或棕黑色。
1、实验所用器皿需用硫酸洗液浸泡，洗干净。
2、步骤4、5的洗片步骤很有必要，一定要把组织中的甲醛和乙醇彻底清除，否则易导致组织内银盐的沉淀。
3、某些细菌和真菌菌丝也会被该染液染成黑色，应注意螺线体为螺旋状形态，并加以鉴别。
[1]螺旋体染色液(LEVADITI硝酸银法)操作说明
显示全部螺旋体是一类细长、弯曲呈螺旋状、运动活波的原核细胞型微生物，具有细菌的基本结构。螺旋体染色液是一种用于显示螺旋体的染色方法，主要用于显示梅毒螺旋体和钩端螺旋体。
1、将组织切片置于10%福尔马林中固定2～4天。
2、流水冲洗过夜。
3、95%乙醇浸泡24小时。
4、蒸馏水浸洗并不停摇动，直至组织下沉为止。
5、更换新的蒸馏水浸洗10分钟。
6、入硝酸银溶液，加盖置于37℃恒温箱孵育1天，更换新的硝酸银溶液，继续37℃恒温箱孵育2天。
7、蒸馏水浸洗3次，每次10分钟。
8、入配制好的Levaditi还原液，加盖室温避光孵育2天。
9、蒸馏水浸洗3次，每次2分钟。
10、常规脱水透明，浸蜡包埋。
11、切片厚度6～8μm，贴片，烤干。
12、二甲苯脱蜡2次，中性树胶封固。
梅毒螺旋体、钩端螺旋体呈黑色或棕黑色。
1、实验所用器皿需用硫酸洗液浸泡，洗干净。
2、步骤4、5的洗片步骤很有必要，一定要把组织中的甲醛和乙醇彻底清除，否则易导致组织内银盐的沉淀。
3、某些细菌和真菌菌丝也会被该染液染成黑色，应注意螺线体为螺旋状形态，并加以鉴别。
[1]螺旋体染色液(LEVADITI硝酸银法)操作说明
1
本试剂盒采用硅基质膜技术，通过简单的结合-洗涤-洗脱三步骤，能够从多种酶促反应液中纯化回收核苷酸链和DNA片段。该试剂盒适用于从去磷酸化、限制性内切酶酶切、连接、末端标记等反应产物中回收17-40mers的寡核苷酸片段。纯化过程能够去除10bp以下的寡核苷酸、盐和其他杂质，从而获得高纯度、完整性好、浓度高的DNA片段。纯化后的DNA片段可用于芯片分析、放射性和荧光测序、连接和转化、限制性酶酶切、标记、显微注射、PCR和体外转录等应用。
1. 本实验需要准备无水乙醇和离心管。
2. 本试剂盒可以无选择性地回收溶液中的所有DNA片段（可去除小于10bp的小片段），如果需要选择性回收特定片段并去除其他不同大小的片段，请选择胶回收试剂盒。
3. 使用前请检查Buffer1#是否出现结晶或沉淀，如果有，请在37℃水浴中加热几分钟以恢复澄清状态。
4. 第一次使用前，请按照试剂瓶标签的说明在Buffer3#中加入无水乙醇。
5. 回收率受初始DNA量和洗脱体积的影响。
6. 所有离心步骤均在室温下使用台式离心机进行。
1. 估计DNA反应液的体积，如果回收片段小于100bp，加入10倍体积的Buffer1#（例如PCR反应体系为50µl，则加入500µlBuffer1#）；如果回收片段大于等于100bp，则只需要加入5倍体积的Buffer1#（例如PCR反应体系为50µl，则加入250µlBuffer1#）。
2. 柱平衡：向已吸附柱中（吸附柱应预先装入收集管中）加入200μlBuffer2#，以12,000rpm（~13,400×g）离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
3. 将步骤1中得到的溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置2分钟，以12,000rpm离心1分钟。
注意：吸附柱容积为700µl，若样品体积大于700µl，可分批加入。
4. 离心后，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：对于含有放射性的样品，离心后，将装有废液的收集管弃掉，将吸附柱放入一个新的收集管中。
5. 向吸附柱中加入600µlBuffer3#（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），以12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：对于含有放射性的样品，向吸附柱中加入450µlBuffer3#（请先检查是否已加入无水乙醇），以12,000rpm离心1分钟。将废液弃掉，将吸附柱重新放回收集管中，重复操作一次。
6. 以12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱放置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
7. 将吸附柱放入一个新的离心管（自备），向吸附膜中间位置悬空滴加100-200µlBuffer4#，室温放置2分钟，以12,000rpm离心1分钟，收集DNA溶液。将DNA溶液保存在-20℃。
1. 洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响。若使用水作为洗脱液，应确保其pH值在7.0-8.5范围内（可以用NaOH将水的pH值调整到此范围）。
2. 为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回吸附柱中，重复步骤7。
3. 洗脱体积不应小于100μl，体积过少会影响回收效率。
4. 如果使用TE洗脱，应考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。
5. 回收大于10kb的DNA片段时，应在50℃水浴中预热Buffer4#，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。
主要参考资料
[1]寡核苷酸纯化试剂盒产品说明书
显示全部本试剂盒采用硅基质膜技术，通过简单的结合-洗涤-洗脱三步骤，能够从多种酶促反应液中纯化回收核苷酸链和DNA片段。该试剂盒适用于从去磷酸化、限制性内切酶酶切、连接、末端标记等反应产物中回收17-40mers的寡核苷酸片段。纯化过程能够去除10bp以下的寡核苷酸、盐和其他杂质，从而获得高纯度、完整性好、浓度高的DNA片段。纯化后的DNA片段可用于芯片分析、放射性和荧光测序、连接和转化、限制性酶酶切、标记、显微注射、PCR和体外转录等应用。
1. 本实验需要准备无水乙醇和离心管。
2. 本试剂盒可以无选择性地回收溶液中的所有DNA片段（可去除小于10bp的小片段），如果需要选择性回收特定片段并去除其他不同大小的片段，请选择胶回收试剂盒。
3. 使用前请检查Buffer1#是否出现结晶或沉淀，如果有，请在37℃水浴中加热几分钟以恢复澄清状态。
4. 第一次使用前，请按照试剂瓶标签的说明在Buffer3#中加入无水乙醇。
5. 回收率受初始DNA量和洗脱体积的影响。
6. 所有离心步骤均在室温下使用台式离心机进行。
1. 估计DNA反应液的体积，如果回收片段小于100bp，加入10倍体积的Buffer1#（例如PCR反应体系为50µl，则加入500µlBuffer1#）；如果回收片段大于等于100bp，则只需要加入5倍体积的Buffer1#（例如PCR反应体系为50µl，则加入250µlBuffer1#）。
2. 柱平衡：向已吸附柱中（吸附柱应预先装入收集管中）加入200μlBuffer2#，以12,000rpm（~13,400×g）离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
3. 将步骤1中得到的溶液加入到已装入收集管的吸附柱中，室温放置2分钟，以12,000rpm离心1分钟。
注意：吸附柱容积为700µl，若样品体积大于700µl，可分批加入。
4. 离心后，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：对于含有放射性的样品，离心后，将装有废液的收集管弃掉，将吸附柱放入一个新的收集管中。
5. 向吸附柱中加入600µlBuffer3#（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），以12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：对于含有放射性的样品，向吸附柱中加入450µlBuffer3#（请先检查是否已加入无水乙醇），以12,000rpm离心1分钟。将废液弃掉，将吸附柱重新放回收集管中，重复操作一次。
6. 以12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱放置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。
7. 将吸附柱放入一个新的离心管（自备），向吸附膜中间位置悬空滴加100-200µlBuffer4#，室温放置2分钟，以12,000rpm离心1分钟，收集DNA溶液。将DNA溶液保存在-20℃。
1. 洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响。若使用水作为洗脱液，应确保其pH值在7.0-8.5范围内（可以用NaOH将水的pH值调整到此范围）。
2. 为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回吸附柱中，重复步骤7。
3. 洗脱体积不应小于100μl，体积过少会影响回收效率。
4. 如果使用TE洗脱，应考虑其中含有的EDTA是否会影响后续的酶促反应。
5. 回收大于10kb的DNA片段时，应在50℃水浴中预热Buffer4#，适当延长吸附和洗脱时间，可增加回收效率。
主要参考资料
[1]寡核苷酸纯化试剂盒产品说明书
1
本试剂盒适用于从血清(血浆)等液体样品中提取病毒RNA，并可用于提取其他液体样品和微量样品。它具有以下特点：
1. 高回收率：回收率可达90%以上，高于大多数基于离心柱的提取方法。
2. 高灵敏度：最终灵敏度可达到50~100拷贝/ml。
3. 一管式操作：整个操作过程在室温下完成，无需使用离心柱。
4. 安全无毒：不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液。
5. 处理量大：最多可处理1.5 ml液体病毒样品。
提取的病毒RNA在常温下运输，4℃保存。
1. 自备材料：小型高速离心机、离心管、异丙醇、70%乙醇等。
2. 血浆的抗凝剂必须是EDTA或ACD，不能是肝素。使用ACD时，样品会被稀释，得到的病毒滴度会比使用EDTA低15%左右。
3. 用于制备血浆的全血在2~25°C放置的时间不能超过6小时，血浆可以在2~8°C或更低温度下运输和保存。
1. 在每管中加入0.6 ml Buffer Rlysis-VG溶液。
2. 快速震荡样品几秒，再短暂离心，取0.2 ml液体样品加入到已经装有0.6 ml Buffer Rlysis-VG溶液的离心管中。
3. 加入正负对照样品。
4. 室温放置10分钟。
5. 加入异丙醇，离心至少15分钟。
6. 移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀。
7. 加入70%乙醇，离心5分钟。
8. 移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀。
9. 移弃残留液体（70%乙醇）。
10. 加入Rnase-free水，溶解RNA沉淀。
11. 样品可以直接用于RT-PCR，也可保存于-70°C。
[1] 病毒 RNA 抽提纯化试剂盒产品说明书
显示全部本试剂盒适用于从血清(血浆)等液体样品中提取病毒RNA，并可用于提取其他液体样品和微量样品。它具有以下特点：
1. 高回收率：回收率可达90%以上，高于大多数基于离心柱的提取方法。
2. 高灵敏度：最终灵敏度可达到50~100拷贝/ml。
3. 一管式操作：整个操作过程在室温下完成，无需使用离心柱。
4. 安全无毒：不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液。
5. 处理量大：最多可处理1.5 ml液体病毒样品。
提取的病毒RNA在常温下运输，4℃保存。
1. 自备材料：小型高速离心机、离心管、异丙醇、70%乙醇等。
2. 血浆的抗凝剂必须是EDTA或ACD，不能是肝素。使用ACD时，样品会被稀释，得到的病毒滴度会比使用EDTA低15%左右。
3. 用于制备血浆的全血在2~25°C放置的时间不能超过6小时，血浆可以在2~8°C或更低温度下运输和保存。
1. 在每管中加入0.6 ml Buffer Rlysis-VG溶液。
2. 快速震荡样品几秒，再短暂离心，取0.2 ml液体样品加入到已经装有0.6 ml Buffer Rlysis-VG溶液的离心管中。
3. 加入正负对照样品。
4. 室温放置10分钟。
5. 加入异丙醇，离心至少15分钟。
6. 移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀。
7. 加入70%乙醇，离心5分钟。
8. 移弃上清，注意不要触及管底和管壁离心面的RNA沉淀。
9. 移弃残留液体（70%乙醇）。
10. 加入Rnase-free水，溶解RNA沉淀。
11. 样品可以直接用于RT-PCR，也可保存于-70°C。
[1] 病毒 RNA 抽提纯化试剂盒产品说明书
1
甲型流感病毒是一种严重威胁人类健康的病原体，一直备受关注。血凝素和神经氨酸酶是流感病毒外层的两个重要糖蛋白，它们在流感病毒的生命周期中起着关键作用。针对甲型H1N1亚型流感病毒的新型抑制类分子研究是当前的研究热点。随着实验筛选合成技术和计算机辅助工具的发展，越来越多的潜在小分子抑制剂和广谱中和抗体被发现，为抗流感病毒药物的发展提供了便利。
本研究选取了两种不同的甲型H1N1流感毒株和小分子抑制剂MBX2329为研究对象，应用分子对接、分子动力学模拟和结合自由能计算等理论研究方法，探究MBX2329与流感病毒外层蛋白的结合机制以及在酸性条件下的抑制效果。
研究结果表明，在中性条件下，MBX2329通过范德华作用力与流感病毒外层蛋白稳定结合，并协助其进入胞饮小泡。在模拟的酸性条件下，MBX2329能够移动到一个新的保守口袋处，发挥抑制作用。进一步分析发现，MBX2329的结合可以阻止流感病毒外层蛋白的分离，并维持其内部结构的稳定，从而阻止流感病毒在酸性条件下的解聚行为。
[1]Conserved stem fragment from H3 influenza hemagglutinin elicits cross-clade neutralizing antibodies through stalk-targeted blocking of conformational change during membrane fusion[J].Xin Gong,He Yin,Yuhua Shi,Shanshan Guan,Xiaoqiu He,Lan Yang,Yongjiao Yu,Ziyu Kuai,Chunlai Jiang,Wei Kong,Song Wang,Yaming Shan.Immunology Letters.2016
[2]A 3D‐RISM/RISM study of the oseltamivir binding efficiency with the wild‐type and resistance‐associated mutant forms of the viral influenza B neuraminidase[J].Jiraphorn Phanich,Thanyada Rungrotmongkol,Daniel Sindhikara,Saree Phongphanphanee,Norio Yoshida,Fumio Hirata,Nawee Kungwan,Supot Hannongbua.Protein Science.2016(1)
[3]Influenza virus-mediated membrane fusion:Structural insights from electron microscopy[J].Juan Fontana,Alasdair C.Steven.Archives of Biochemistry and Biophysics.2015
[4]Computational assay of Zanamivir binding affinity with original and mutant influenza neuraminidase 9 using molecular docking[J].Khac-Minh Thai,Duy-Phong Le,Nguyen-Viet-Khoa Tran,Thi-Thu-Ha Nguyen,Thanh-Dao Tran,Minh-Tri Le.Journal of Theoretical Biology.2015
[5]管珊珊.甲型H1N1流感病毒外层蛋白与抑制剂或抗体的作用机理研究[D].吉林大学,2018.
显示全部甲型流感病毒是一种严重威胁人类健康的病原体，一直备受关注。血凝素和神经氨酸酶是流感病毒外层的两个重要糖蛋白，它们在流感病毒的生命周期中起着关键作用。针对甲型H1N1亚型流感病毒的新型抑制类分子研究是当前的研究热点。随着实验筛选合成技术和计算机辅助工具的发展，越来越多的潜在小分子抑制剂和广谱中和抗体被发现，为抗流感病毒药物的发展提供了便利。
本研究选取了两种不同的甲型H1N1流感毒株和小分子抑制剂MBX2329为研究对象，应用分子对接、分子动力学模拟和结合自由能计算等理论研究方法，探究MBX2329与流感病毒外层蛋白的结合机制以及在酸性条件下的抑制效果。
研究结果表明，在中性条件下，MBX2329通过范德华作用力与流感病毒外层蛋白稳定结合，并协助其进入胞饮小泡。在模拟的酸性条件下，MBX2329能够移动到一个新的保守口袋处，发挥抑制作用。进一步分析发现，MBX2329的结合可以阻止流感病毒外层蛋白的分离，并维持其内部结构的稳定，从而阻止流感病毒在酸性条件下的解聚行为。
[1]Conserved stem fragment from H3 influenza hemagglutinin elicits cross-clade neutralizing antibodies through stalk-targeted blocking of conformational change during membrane fusion[J].Xin Gong,He Yin,Yuhua Shi,Shanshan Guan,Xiaoqiu He,Lan Yang,Yongjiao Yu,Ziyu Kuai,Chunlai Jiang,Wei Kong,Song Wang,Yaming Shan.Immunology Letters.2016
[2]A 3D‐RISM/RISM study of the oseltamivir binding efficiency with the wild‐type and resistance‐associated mutant forms of the viral influenza B neuraminidase[J].Jiraphorn Phanich,Thanyada Rungrotmongkol,Daniel Sindhikara,Saree Phongphanphanee,Norio Yoshida,Fumio Hirata,Nawee Kungwan,Supot Hannongbua.Protein Science.2016(1)
[3]Influenza virus-mediated membrane fusion:Structural insights from electron microscopy[J].Juan Fontana,Alasdair C.Steven.Archives of Biochemistry and Biophysics.2015
[4]Computational assay of Zanamivir binding affinity with original and mutant influenza neuraminidase 9 using molecular docking[J].Khac-Minh Thai,Duy-Phong Le,Nguyen-Viet-Khoa Tran,Thi-Thu-Ha Nguyen,Thanh-Dao Tran,Minh-Tri Le.Journal of Theoretical Biology.2015
[5]管珊珊.甲型H1N1流感病毒外层蛋白与抑制剂或抗体的作用机理研究[D].吉林大学,2018.
1
A型流感病毒H7N9凝集素抗体是一种特异性免疫球蛋白，可以与A型流感病毒H7N9凝集素结合。
甲型流感病毒是一种常见的流感病毒，也是最容易发生变异的类型。禽流感是由禽流感病毒引起的一种急性传染病，病毒变异后可以感染人类，引起高热、咳嗽、流涕、肌痛等症状，严重情况下可能导致肺炎和多器官衰竭。凝集素是一种从植物、无脊椎动物和高等动物中提取的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其具有凝集红血球的能力而得名。
流感病毒分为甲、乙、丙三种型别，其中甲型流感病毒是引起流感大流行的主要类型之一。基于流感病毒保守性蛋白的候选疫苗可以诱导小鼠产生高水平的中和抗体，为广谱流感疫苗的研发提供了新的机会。甲型流感病毒的红细胞凝集素蛋白是主要的免疫反应抗原位点，同时具有较强的保守性，因此基于该蛋白的候选疫苗研发备受关注。
然而，基于高保守性蛋白的候选疫苗存在一些缺点。首先，大多数广谱中和抗体的诱导依赖于非连续性表位，增加了疫苗的生产和纯化难度。其次，一些中和抗体的中和机制尚不清楚，不利于广谱流感疫苗的深入研发。同时，高保守性蛋白的亚单位疫苗和表位疫苗的免疫原性较低，如何提高候选疫苗的免疫原性是一个重要问题。因此，广谱流感疫苗的成功关键在于同时具备高免疫原性和广谱保护性。通过将免疫原筛选方法和抑制机制应用于多亚型流感病毒，并结合No V P particle载体表达系统，成功制备和评价了新型流感病毒三价重组蛋白疫苗。
[1]Conserved stem fragment from H3 influenza hemagglutinin elicits cross-clade neutralizing antibodies through stalk-targeted blocking of conformational change during membrane fusion[J].Xin Gong,He Yin,Yuhua Shi,Shanshan Guan,Xiaoqiu He,Lan Yang,Yongjiao Yu,Ziyu Kuai,Chunlai Jiang,Wei Kong,Song Wang,Yaming Shan.Immunology Letters.2016
[2]Immunogenicity and protective efficacy of the norovirus P particle-M2e chimeric vaccine in chickens[J].M.Elaish,K.I.Kang,M.Xia,A.Ali,S.A.S.Shany,L.Wang,X.Jiang,C.W.Lee.Vaccine.2015(38)
[3]Protection against Multiple Subtypes of Influenza Viruses by Virus-Like Particle Vaccines Based on a Hemagglutinin Conserved Epitope[J].Shaoheng Chen,Dan Zheng,Changgui Li,Wenjie Zhang,Wenting Xu,Xueying Liu,Fang Fang,Ze Chen,Xuguang Li.BioMed Research International.2015
[4]Multiple antigen peptide mimetics containing gp41 membrane‐proximal external region elicit broad neutralizing antibodies against human immunodeficiency virus type 1 in guinea pigs[J].Lishuang Zhang,Liang Miao,Xin Gong,Huayan Zhang,Lan Yang,Yuhua Shi,Wei Kong,Chunlai Jiang,Yaming Shan.J.Pept.Sci..2013(8)
[5]龚鑫.基于甲型流感病毒红细胞凝集素颈部保守区表位免疫原的设计及其功能活性的研究[D].吉林大学,2016.
显示全部A型流感病毒H7N9凝集素抗体是一种特异性免疫球蛋白，可以与A型流感病毒H7N9凝集素结合。
甲型流感病毒是一种常见的流感病毒，也是最容易发生变异的类型。禽流感是由禽流感病毒引起的一种急性传染病，病毒变异后可以感染人类，引起高热、咳嗽、流涕、肌痛等症状，严重情况下可能导致肺炎和多器官衰竭。凝集素是一种从植物、无脊椎动物和高等动物中提取的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其具有凝集红血球的能力而得名。
流感病毒分为甲、乙、丙三种型别，其中甲型流感病毒是引起流感大流行的主要类型之一。基于流感病毒保守性蛋白的候选疫苗可以诱导小鼠产生高水平的中和抗体，为广谱流感疫苗的研发提供了新的机会。甲型流感病毒的红细胞凝集素蛋白是主要的免疫反应抗原位点，同时具有较强的保守性，因此基于该蛋白的候选疫苗研发备受关注。
然而，基于高保守性蛋白的候选疫苗存在一些缺点。首先，大多数广谱中和抗体的诱导依赖于非连续性表位，增加了疫苗的生产和纯化难度。其次，一些中和抗体的中和机制尚不清楚，不利于广谱流感疫苗的深入研发。同时，高保守性蛋白的亚单位疫苗和表位疫苗的免疫原性较低，如何提高候选疫苗的免疫原性是一个重要问题。因此，广谱流感疫苗的成功关键在于同时具备高免疫原性和广谱保护性。通过将免疫原筛选方法和抑制机制应用于多亚型流感病毒，并结合No V P particle载体表达系统，成功制备和评价了新型流感病毒三价重组蛋白疫苗。
[1]Conserved stem fragment from H3 influenza hemagglutinin elicits cross-clade neutralizing antibodies through stalk-targeted blocking of conformational change during membrane fusion[J].Xin Gong,He Yin,Yuhua Shi,Shanshan Guan,Xiaoqiu He,Lan Yang,Yongjiao Yu,Ziyu Kuai,Chunlai Jiang,Wei Kong,Song Wang,Yaming Shan.Immunology Letters.2016
[2]Immunogenicity and protective efficacy of the norovirus P particle-M2e chimeric vaccine in chickens[J].M.Elaish,K.I.Kang,M.Xia,A.Ali,S.A.S.Shany,L.Wang,X.Jiang,C.W.Lee.Vaccine.2015(38)
[3]Protection against Multiple Subtypes of Influenza Viruses by Virus-Like Particle Vaccines Based on a Hemagglutinin Conserved Epitope[J].Shaoheng Chen,Dan Zheng,Changgui Li,Wenjie Zhang,Wenting Xu,Xueying Liu,Fang Fang,Ze Chen,Xuguang Li.BioMed Research International.2015
[4]Multiple antigen peptide mimetics containing gp41 membrane‐proximal external region elicit broad neutralizing antibodies against human immunodeficiency virus type 1 in guinea pigs[J].Lishuang Zhang,Liang Miao,Xin Gong,Huayan Zhang,Lan Yang,Yuhua Shi,Wei Kong,Chunlai Jiang,Yaming Shan.J.Pept.Sci..2013(8)
[5]龚鑫.基于甲型流感病毒红细胞凝集素颈部保守区表位免疫原的设计及其功能活性的研究[D].吉林大学,2016.
1
病毒是一类微小的非细胞型微生物，它们寄生在活细胞内并以复制方式增殖。病毒可以感染人体细胞，通过细胞内的复制过程引起疾病。目前已知的DNA病毒有乙肝病毒、T2噬菌体、天花病毒、花椰菜花叶病毒等。在这些病毒中，乙肝病毒对人类的影响和危害最大，传染性最强。因此，提取乙肝病毒基因组DNA的方法尤为重要。
目前，乙肝病毒DNA检测已经成为临床乙肝病毒诊断的主要方法之一。要进行病毒DNA检查，首先需要从人体血液中提取病毒基因组DNA。传统的提取方法需要对血液进行血浆和血清分离，这样会增加操作步骤、工作量，并且容易造成二次污染和病毒DNA的损失。因此，研发一种直接从人体全血中提取病毒DNA的试剂盒和方法具有重要意义。
病毒DNA提取试剂盒适用于从血清、细胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因组，不适用于RNA病毒基因组的提取。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
（1）病毒DNA提取试剂盒中的WashingBuffer中已经加乙醇，无需单独添加。
（2）VirusDNA/RNALB1，储存时可能会有白色结晶沉淀，放置于56℃水浴锅溶解后，不影响使用效果。
（3）蛋白酶K（20mg/ml）长期保存请储存于-20℃，短期室温保存（6个月），其它组分储存于室温。
病毒DNA提取试剂盒能够在短时间内获得高质量的病毒DNA和RNA。操作简单，无需有机抽提或乙醇沉淀。重复性强，产量高。同时，该试剂盒能够完全去除污染物和抑制剂，方便下游应用。
应用病毒RNA提取试剂盒从含有丙型肝炎病毒（HCV）的血清样品中纯化得到病毒RNA，并进行逆转录后的qPCR实验。实验结果显示，该方法可以检测并稳定扩增含有103copies/ml的HCV病毒。
[1] 协和医学词典
[2] 病毒RNA提取试剂盒操作说明
显示全部病毒是一类微小的非细胞型微生物，它们寄生在活细胞内并以复制方式增殖。病毒可以感染人体细胞，通过细胞内的复制过程引起疾病。目前已知的DNA病毒有乙肝病毒、T2噬菌体、天花病毒、花椰菜花叶病毒等。在这些病毒中，乙肝病毒对人类的影响和危害最大，传染性最强。因此，提取乙肝病毒基因组DNA的方法尤为重要。
目前，乙肝病毒DNA检测已经成为临床乙肝病毒诊断的主要方法之一。要进行病毒DNA检查，首先需要从人体血液中提取病毒基因组DNA。传统的提取方法需要对血液进行血浆和血清分离，这样会增加操作步骤、工作量，并且容易造成二次污染和病毒DNA的损失。因此，研发一种直接从人体全血中提取病毒DNA的试剂盒和方法具有重要意义。
病毒DNA提取试剂盒适用于从血清、细胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因组，不适用于RNA病毒基因组的提取。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
（1）病毒DNA提取试剂盒中的WashingBuffer中已经加乙醇，无需单独添加。
（2）VirusDNA/RNALB1，储存时可能会有白色结晶沉淀，放置于56℃水浴锅溶解后，不影响使用效果。
（3）蛋白酶K（20mg/ml）长期保存请储存于-20℃，短期室温保存（6个月），其它组分储存于室温。
病毒DNA提取试剂盒能够在短时间内获得高质量的病毒DNA和RNA。操作简单，无需有机抽提或乙醇沉淀。重复性强，产量高。同时，该试剂盒能够完全去除污染物和抑制剂，方便下游应用。
应用病毒RNA提取试剂盒从含有丙型肝炎病毒（HCV）的血清样品中纯化得到病毒RNA，并进行逆转录后的qPCR实验。实验结果显示，该方法可以检测并稳定扩增含有103copies/ml的HCV病毒。
[1] 协和医学词典
[2] 病毒RNA提取试剂盒操作说明
1
间充质干细胞培养基是一种无血清、不含异源动物成分的人类干细胞培养基，适用于多种来源的人类干细胞，如骨髓和脐带干细胞。该培养基能够促进干细胞的长期生长，并保持其多向分化潜能。同时，与干细胞无血清营养添加物一起使用，可以提高细胞贴壁和增值效果。
1. 无血清、不含异源动物成分，所有成分都是明确的，且同种来源（人），包括蛋白质，不含抗生素。
2. 能够培养不同来源的人类间充质干细胞。
3. 维持人类干细胞的长期生长，保留类纤维原细胞形态。
4. 背景分化率极低。
5. 维持干细胞的自我更新及多向分化潜能，可分化为骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞。
1. 在实验开始前一小时，将无血清添加剂成分溶解并充分混合。
2. 使用75%酒精消毒试剂瓶的开口外壁。
3. 无菌打开各个试剂瓶。
4. 将添加剂加入到间充质干细胞无血清基础培养基中。
5. 无菌吸取基础培养基洗涤添加剂瓶，尽可能将添加剂的所有成分完整地加入基础培养基中。
6. 重复以上步骤两到三遍。
7. 轻轻摇晃基础培养基瓶子，使里面的各种成分充分混匀。将配制好的完全培养基放置于4℃保存。
该研究在建立了骨髓间充质干细胞的体外培养系统的基础上，对骨髓间充质干细胞进行了荧光标记，并研究了其向子宫内膜细胞和间质细胞分化的能力及可能的机制。进一步在动物模型中将体外培养的兔骨髓间充质干细胞标记后直接注射至双侧子宫肌壁间，观察干细胞在子宫组织的存活和迁移，以及移植后子宫内膜形态学的变化，并检测相关基因水平和蛋白表达的改变。
方法：在无菌条件下分离纯化兔骨髓间充质干细胞，并在含有胎牛血清的培养基中培养。通过流式细胞仪检测细胞表面标记物的表达，使用荧光标记和其他实验方法评估干细胞的生物学特性。
[1] Therapeutic effects of bone marrow-derived mesenchymal stem cells on pulmonary impact injury complicated with endotoxemia in rats[J]. Yujing Zhao, Ce Yang, Haiyan Wang, Haisheng Li, Juan Du, Wei Gu, Jianxin Jiang. International Immunopharmacology. 2012.
[2] Ex vivo-expanded bone marrow stem cells home to the liver and ameliorate functional recovery in a mouse model of acute hepatic injury[J]. Shi-Zhu Jin, Bing-Rong Liu, Jun Xu, Fu-Lai Gao, Zong-Jing Hu, Xin-Hong Wang, Feng-Hua Pei, Yu Hong, Hong-Yan Hu, Ming-Zi Han. Hepatobiliary&Pancreatic Diseases International. 2012.
[3] Bone marrow and adipose stem cells can be tracked with PKH26 until post staining passage 6 in in vitro and in vivo[J]. C.C. Ude, B.S. Shamsul, M.H. Ng, H.C. Chen, M.Y. Norhamdan, B.S. Aminuddin, B.H.I. Ruszymah. Tissue and Cell. 2012.
[4] Use of Mesenchymal Stem Cells and Darbepoetin Improve Ischemia-Induced Acute Kidney Injury Outcomes[J]. Altun Bulent, Yilmaz Rahmi, Aki Tuncay, Akoglu Hadim, Zeybek Dilara, Piskinpasa Serhan, Uckan Duygu, Purali Nuhan, Korkusuz Petek, Turgan Cetin. American Journal of Nephrology. 2012.
[5] 刘芳. 骨髓间充质干细胞移植联合雌激素治疗宫腔粘连的实验研究[D]. 南方医科大学, 2013.
显示全部间充质干细胞培养基是一种无血清、不含异源动物成分的人类干细胞培养基，适用于多种来源的人类干细胞，如骨髓和脐带干细胞。该培养基能够促进干细胞的长期生长，并保持其多向分化潜能。同时，与干细胞无血清营养添加物一起使用，可以提高细胞贴壁和增值效果。
1. 无血清、不含异源动物成分，所有成分都是明确的，且同种来源（人），包括蛋白质，不含抗生素。
2. 能够培养不同来源的人类间充质干细胞。
3. 维持人类干细胞的长期生长，保留类纤维原细胞形态。
4. 背景分化率极低。
5. 维持干细胞的自我更新及多向分化潜能，可分化为骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞。
1. 在实验开始前一小时，将无血清添加剂成分溶解并充分混合。
2. 使用75%酒精消毒试剂瓶的开口外壁。
3. 无菌打开各个试剂瓶。
4. 将添加剂加入到间充质干细胞无血清基础培养基中。
5. 无菌吸取基础培养基洗涤添加剂瓶，尽可能将添加剂的所有成分完整地加入基础培养基中。
6. 重复以上步骤两到三遍。
7. 轻轻摇晃基础培养基瓶子，使里面的各种成分充分混匀。将配制好的完全培养基放置于4℃保存。
该研究在建立了骨髓间充质干细胞的体外培养系统的基础上，对骨髓间充质干细胞进行了荧光标记，并研究了其向子宫内膜细胞和间质细胞分化的能力及可能的机制。进一步在动物模型中将体外培养的兔骨髓间充质干细胞标记后直接注射至双侧子宫肌壁间，观察干细胞在子宫组织的存活和迁移，以及移植后子宫内膜形态学的变化，并检测相关基因水平和蛋白表达的改变。
方法：在无菌条件下分离纯化兔骨髓间充质干细胞，并在含有胎牛血清的培养基中培养。通过流式细胞仪检测细胞表面标记物的表达，使用荧光标记和其他实验方法评估干细胞的生物学特性。
[1] Therapeutic effects of bone marrow-derived mesenchymal stem cells on pulmonary impact injury complicated with endotoxemia in rats[J]. Yujing Zhao, Ce Yang, Haiyan Wang, Haisheng Li, Juan Du, Wei Gu, Jianxin Jiang. International Immunopharmacology. 2012.
[2] Ex vivo-expanded bone marrow stem cells home to the liver and ameliorate functional recovery in a mouse model of acute hepatic injury[J]. Shi-Zhu Jin, Bing-Rong Liu, Jun Xu, Fu-Lai Gao, Zong-Jing Hu, Xin-Hong Wang, Feng-Hua Pei, Yu Hong, Hong-Yan Hu, Ming-Zi Han. Hepatobiliary&Pancreatic Diseases International. 2012.
[3] Bone marrow and adipose stem cells can be tracked with PKH26 until post staining passage 6 in in vitro and in vivo[J]. C.C. Ude, B.S. Shamsul, M.H. Ng, H.C. Chen, M.Y. Norhamdan, B.S. Aminuddin, B.H.I. Ruszymah. Tissue and Cell. 2012.
[4] Use of Mesenchymal Stem Cells and Darbepoetin Improve Ischemia-Induced Acute Kidney Injury Outcomes[J]. Altun Bulent, Yilmaz Rahmi, Aki Tuncay, Akoglu Hadim, Zeybek Dilara, Piskinpasa Serhan, Uckan Duygu, Purali Nuhan, Korkusuz Petek, Turgan Cetin. American Journal of Nephrology. 2012.
[5] 刘芳. 骨髓间充质干细胞移植联合雌激素治疗宫腔粘连的实验研究[D]. 南方医科大学, 2013.
1
B细胞转录激活因子抗体是一类多克隆抗体，可以特异性结合B细胞转录激活因子，主要用于免疫组化和ELISA等实验。转录激活蛋白因子是一种能与启动子中特定DNA序列结合并激活基因转录反应的蛋白质分子。细菌RNA聚合酶通过σ因子来识别基因，其中很多应激反应基因依赖于σ54因子，它们能与启动子DNA结合形成稳定的封闭复合物，这对于转录过程非常重要。转录的开始需要结合于转录起始位点上游的激活蛋白驱动的ATP水解。
BATF编码的基本亮氨酸拉链ATF样转录因子是核碱性亮氨酸拉链蛋白，属于转录因子的AP-1/ATF超家族。该蛋白的亮氨酸拉链介导与Jun蛋白家族成员的二聚化。该蛋白被认为是AP-1/ATF转录事件的负调节剂。B-ATF是一种核碱性亮氨酸拉链蛋白，属于转录因子AP-1/ATF超家族。B-ATF的亮氨酸拉链介导与Jun蛋白家族成员的二聚化。B-ATF蛋白不能有效地二聚化，而是优先与c-Jun形成异二聚体。B-ATF/c-Jun蛋白复合物可以与包含AP-1共有共识结合位点的DNA相互作用，这表明B-ATF在人细胞中充当AP-1转录复合物的组织特异性调节剂。
B-ATF也与IFP35结合，IFP35是一种亮氨酸拉链蛋白，在IFN处理后会转移到细胞核。编码B-ATF的基因（也称为SFA-2）在成熟的T和B淋巴细胞中强烈表达，并在被I型人T细胞白血病病毒转化后被上调。
研究人员使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测了102例系统性红斑狼疮(SLE)患者和30例健康人的血清中BATF和IL-17的表达水平，并进行了分析。结果显示，SLE患者血清中BATF和IL-17水平较健康对照组升高，活动期患者血清中BATF和IL-17水平较非活动期患者升高。SLE患者血清中BATF和IL-17水平呈正相关。狼疮性肾炎组血清中BATF和IL-17水平高于非狼疮性肾炎组。研究结果表明，SLE患者血清中BATF和IL-17水平异常与疾病的发生发展和肾脏的损害相关，Th17细胞可能在SLE的发病中起着重要作用。
[1] Xue-Fei Zhao, Hai-Feng Pan, Hui Yuan, Wen-Hui Zhang, Xiang-Pei Li, Gui-Hong Wang, Guo-Cui Wu, Hong Su, Fa-Ming Pan, Wen-Xian Li, Lian-Hong Li, Guo-Ping Chen, Dong-Qing Ye. Increased serum interleukin 17 in patients with systemic lupus erythematosus. Molecular Biology Reports. 2010(1).
[2] Xue-Fei Zhao, Hai-Feng Pan, Hui Yuan, Wen-Hui Zhang, Xiang-Pei Li, Gui-Hong Wang, Guo-Cui Wu, Hong Su, Fa-Ming Pan, Wen-Xian Li, Lian-Hong Li, Guo-Ping Chen, Dong-Qing Ye. Increased serum interleukin 17 in patients with systemic lupus erythematosus. Molecular Biology Reports. 2010(1).
[3] John J.O'Shea, Scott M.Steward-Tharp, Arian Laurence, Wendy T.Watford, Lai Wei, Adewole S.Adamson, Samuel Fan. Signal transduction and Th17 cell differentiation. Microbes and Infection. 2009(5).
[4] Rosanne Spolski, Warren J.Leonard. Cytokine mediators of Th17 function. European Journal of Immunology. 2009(3).
[5] 黎艳. 系统性红斑狼疮患者血清中BATF与IL-17的异常及其意义. 广西医科大学, 2012.
显示全部B细胞转录激活因子抗体是一类多克隆抗体，可以特异性结合B细胞转录激活因子，主要用于免疫组化和ELISA等实验。转录激活蛋白因子是一种能与启动子中特定DNA序列结合并激活基因转录反应的蛋白质分子。细菌RNA聚合酶通过σ因子来识别基因，其中很多应激反应基因依赖于σ54因子，它们能与启动子DNA结合形成稳定的封闭复合物，这对于转录过程非常重要。转录的开始需要结合于转录起始位点上游的激活蛋白驱动的ATP水解。
BATF编码的基本亮氨酸拉链ATF样转录因子是核碱性亮氨酸拉链蛋白，属于转录因子的AP-1/ATF超家族。该蛋白的亮氨酸拉链介导与Jun蛋白家族成员的二聚化。该蛋白被认为是AP-1/ATF转录事件的负调节剂。B-ATF是一种核碱性亮氨酸拉链蛋白，属于转录因子AP-1/ATF超家族。B-ATF的亮氨酸拉链介导与Jun蛋白家族成员的二聚化。B-ATF蛋白不能有效地二聚化，而是优先与c-Jun形成异二聚体。B-ATF/c-Jun蛋白复合物可以与包含AP-1共有共识结合位点的DNA相互作用，这表明B-ATF在人细胞中充当AP-1转录复合物的组织特异性调节剂。
B-ATF也与IFP35结合，IFP35是一种亮氨酸拉链蛋白，在IFN处理后会转移到细胞核。编码B-ATF的基因（也称为SFA-2）在成熟的T和B淋巴细胞中强烈表达，并在被I型人T细胞白血病病毒转化后被上调。
研究人员使用酶联免疫吸附法(ELISA)检测了102例系统性红斑狼疮(SLE)患者和30例健康人的血清中BATF和IL-17的表达水平，并进行了分析。结果显示，SLE患者血清中BATF和IL-17水平较健康对照组升高，活动期患者血清中BATF和IL-17水平较非活动期患者升高。SLE患者血清中BATF和IL-17水平呈正相关。狼疮性肾炎组血清中BATF和IL-17水平高于非狼疮性肾炎组。研究结果表明，SLE患者血清中BATF和IL-17水平异常与疾病的发生发展和肾脏的损害相关，Th17细胞可能在SLE的发病中起着重要作用。
[1] Xue-Fei Zhao, Hai-Feng Pan, Hui Yuan, Wen-Hui Zhang, Xiang-Pei Li, Gui-Hong Wang, Guo-Cui Wu, Hong Su, Fa-Ming Pan, Wen-Xian Li, Lian-Hong Li, Guo-Ping Chen, Dong-Qing Ye. Increased serum interleukin 17 in patients with systemic lupus erythematosus. Molecular Biology Reports. 2010(1).
[2] Xue-Fei Zhao, Hai-Feng Pan, Hui Yuan, Wen-Hui Zhang, Xiang-Pei Li, Gui-Hong Wang, Guo-Cui Wu, Hong Su, Fa-Ming Pan, Wen-Xian Li, Lian-Hong Li, Guo-Ping Chen, Dong-Qing Ye. Increased serum interleukin 17 in patients with systemic lupus erythematosus. Molecular Biology Reports. 2010(1).
[3] John J.O'Shea, Scott M.Steward-Tharp, Arian Laurence, Wendy T.Watford, Lai Wei, Adewole S.Adamson, Samuel Fan. Signal transduction and Th17 cell differentiation. Microbes and Infection. 2009(5).
[4] Rosanne Spolski, Warren J.Leonard. Cytokine mediators of Th17 function. European Journal of Immunology. 2009(3).
[5] 黎艳. 系统性红斑狼疮患者血清中BATF与IL-17的异常及其意义. 广西医科大学, 2012.
1
细菌RNA小量提取试剂盒采用硅胶柱纯化方式，适用于从各种来源的细菌培养液中快速简单地提取RNA。一次可以处理3ml正处于指数生长期的细菌培养物(细菌数量:1x109)。纯化的RNA产物可直接用于RT-PCR，Northern杂交等实验。完成一次抽提只需50min，纯化过程不需要用到有害的酚氯fang等有机物抽提和耗时的异丙醇或乙醇沉淀。
该方法提供了两种去除细菌细胞壁的方法，包括溶菌酶和酸洗玻璃珠(0.1-0.2mm)，对于大多数的细菌只需使用溶菌酶即可，对于一些细胞壁较厚的细菌将两种方法结合起来，以保证充分的破壁效果。 收集正处于指数生长期的细菌培养液中的细菌，经溶菌酶或玻璃珠去除细胞壁，加入裂解液裂解细胞，加入乙醇调节RNA与柱子的结合能力，转移至柱子上离心吸附RNA，经过三次快速洗涤，最后RNA溶解于DEPC水。
安全--无需使用酚氯fang进行抽提。
可靠--操作简单，每次都能获得理想的效果。
快速--可在50min内完成一次抽提工作。
高效--物理和化学的双层破壁效果。
RNA完整--纯化的RNA不会发生降解，纯度高。
[1]俞垭美；王姗姗；褚丽花；冯宜；葛洪斌；张喆。适用于结核分枝杆菌RNA抽提的实验方法学研究。《临床肺科杂志》
细菌RNA小量提取试剂盒采用硅胶柱纯化方式，适用于从各种来源的细菌培养液中快速简单地提取RNA。一次可以处理3ml正处于指数生长期的细菌培养物(细菌数量:1x109)。纯化的RNA产物可直接用于RT-PCR，Northern杂交等实验。完成一次抽提只需50min，纯化过程不需要用到有害的酚氯fang等有机物抽提和耗时的异丙醇或乙醇沉淀。
该方法提供了两种去除细菌细胞壁的方法，包括溶菌酶和酸洗玻璃珠(0.1-0.2mm)，对于大多数的细菌只需使用溶菌酶即可，对于一些细胞壁较厚的细菌将两种方法结合起来，以保证充分的破壁效果。 收集正处于指数生长期的细菌培养液中的细菌，经溶菌酶或玻璃珠去除细胞壁，加入裂解液裂解细胞，加入乙醇调节RNA与柱子的结合能力，转移至柱子上离心吸附RNA，经过三次快速洗涤，最后RNA溶解于DEPC水。
安全--无需使用酚氯fang进行抽提。
可靠--操作简单，每次都能获得理想的效果。
快速--可在50min内完成一次抽提工作。
高效--物理和化学的双层破壁效果。
RNA完整--纯化的RNA不会发生降解，纯度高。
[1]俞垭美；王姗姗；褚丽花；冯宜；葛洪斌；张喆。适用于结核分枝杆菌RNA抽提的实验方法学研究。《临床肺科杂志》
1
MMO-MUG培养基是一种用于检测生活饮用水及其水源水中大肠菌群和大肠埃希氏菌的方法。在我国，大肠菌群和大肠埃希氏菌被用作评价生活饮用水、水源水和地表水卫生状况的指标，以此来指示粪便污染。固定底物技术酶底物法是一种快速简便的检测方法，该方法使用MMO-MUG培养基。
原理：固定底物技术酶底物法利用大肠菌群细菌产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG使培养液呈黄色，以及大肠埃希氏菌产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的原理，来判断水样中是否含有大肠菌群和大肠埃希氏菌。
1、定性试验：取100ml无菌稀释瓶，加入100ml水样和2.7±0.5克MMO-MUG培养基，混合均匀后放入36±1℃培养箱中培养24小时。
2、10管法。
3、51孔定量盘法。
结果：如果水样变黄，则表示含有总大肠菌群。如果培养液在波长366nm紫外光下产生荧光，则表示含有大肠埃希氏菌。
比较多管发酵法（包括乳糖蛋白胨和EC-MUG培养基）与酶底物法（MMO-MUG培养基）在水中大肠菌群和大肠埃希氏菌检测方面的差异，以选择最佳的检测方法。根据《生活饮用水标准检验方法》GB5750-2006的要求，对多管发酵法和酶底物法进行适用性试验、灵敏度试验、水样加标试验和实际水样检测应用。
结果显示，多管发酵法和酶底物法在检测结果上存在一些菌株的差异；灵敏度试验中，酶底物法约为1 cfu/100 mL，多管发酵法约为1 cfu/100 mL；加标试验结果显示三种培养基方法无明显差别；在水样检测中，两种方法的结果差异不显著。结论是多管发酵法和酶底物法在水中大肠菌群和大肠埃希氏菌检测方面的结果没有显著差异，但酶底物法只需一种培养基，在24小时内同时检测出大肠菌群和大肠埃希氏菌的结果，操作更为方便，节约时间并且结果观察直观易懂。
[1]Standard methods for the examination of water and wastewater.American Public Health Association,American Water Works Association,Water Environment Federation..1998
[2]Microbial ecology of the human large intestine.Conway,PL,Gibson,GR,Macfarlane,GT.Human Colonic Bacteria:Role in Nutrition,Physiology,and Pathology.1995
[3]水中大肠菌群检测方法的等效性判定[J].孙宗科,高飞,张伟,鲁波,白雪涛,陈西平.环境与健康杂志.2011(04)
[4]三种方法检测水中总大肠菌群的比较探讨[J].关丽梅,钟宁.福建分析测试.2009(01)
[5]袁月明,俞慕华,袁梦.水中大肠菌群和大肠埃希氏菌检测方法的比较[J].河南预防医学杂志,2009,20(03):185-186+216.
显示全部MMO-MUG培养基是一种用于检测生活饮用水及其水源水中大肠菌群和大肠埃希氏菌的方法。在我国，大肠菌群和大肠埃希氏菌被用作评价生活饮用水、水源水和地表水卫生状况的指标，以此来指示粪便污染。固定底物技术酶底物法是一种快速简便的检测方法，该方法使用MMO-MUG培养基。
原理：固定底物技术酶底物法利用大肠菌群细菌产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG使培养液呈黄色，以及大肠埃希氏菌产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的原理，来判断水样中是否含有大肠菌群和大肠埃希氏菌。
1、定性试验：取100ml无菌稀释瓶，加入100ml水样和2.7±0.5克MMO-MUG培养基，混合均匀后放入36±1℃培养箱中培养24小时。
2、10管法。
3、51孔定量盘法。
结果：如果水样变黄，则表示含有总大肠菌群。如果培养液在波长366nm紫外光下产生荧光，则表示含有大肠埃希氏菌。
比较多管发酵法（包括乳糖蛋白胨和EC-MUG培养基）与酶底物法（MMO-MUG培养基）在水中大肠菌群和大肠埃希氏菌检测方面的差异，以选择最佳的检测方法。根据《生活饮用水标准检验方法》GB5750-2006的要求，对多管发酵法和酶底物法进行适用性试验、灵敏度试验、水样加标试验和实际水样检测应用。
结果显示，多管发酵法和酶底物法在检测结果上存在一些菌株的差异；灵敏度试验中，酶底物法约为1 cfu/100 mL，多管发酵法约为1 cfu/100 mL；加标试验结果显示三种培养基方法无明显差别；在水样检测中，两种方法的结果差异不显著。结论是多管发酵法和酶底物法在水中大肠菌群和大肠埃希氏菌检测方面的结果没有显著差异，但酶底物法只需一种培养基，在24小时内同时检测出大肠菌群和大肠埃希氏菌的结果，操作更为方便，节约时间并且结果观察直观易懂。
[1]Standard methods for the examination of water and wastewater.American Public Health Association,American Water Works Association,Water Environment Federation..1998
[2]Microbial ecology of the human large intestine.Conway,PL,Gibson,GR,Macfarlane,GT.Human Colonic Bacteria:Role in Nutrition,Physiology,and Pathology.1995
[3]水中大肠菌群检测方法的等效性判定[J].孙宗科,高飞,张伟,鲁波,白雪涛,陈西平.环境与健康杂志.2011(04)
[4]三种方法检测水中总大肠菌群的比较探讨[J].关丽梅,钟宁.福建分析测试.2009(01)
[5]袁月明,俞慕华,袁梦.水中大肠菌群和大肠埃希氏菌检测方法的比较[J].河南预防医学杂志,2009,20(03):185-186+216.
1
内皮细胞是分布在多个器官组织中的一种细胞，具有吞噬异物、参与免疫活动等功能。在研究和实验中，需要大量的内皮细胞。为了满足这个需求，我们需要制备适合内皮细胞生长的培养基。
我们可以使用以下成分制备内皮细胞培养基：
将无血清基础培养基、胰岛素、转铁蛋白、维生素C、牛血清白蛋白、碱性成纤维生长因子、血管内皮生长因子、干细胞生长因子、层粘连蛋白、表皮生长因子、非必须氨基酸和二甲双胍盐酸盐混合，即可得到内皮细胞培养基。
[1]CN201510473860.1一种内皮细胞培养基及内皮细胞的培养方法
显示全部内皮细胞是分布在多个器官组织中的一种细胞，具有吞噬异物、参与免疫活动等功能。在研究和实验中，需要大量的内皮细胞。为了满足这个需求，我们需要制备适合内皮细胞生长的培养基。
我们可以使用以下成分制备内皮细胞培养基：
将无血清基础培养基、胰岛素、转铁蛋白、维生素C、牛血清白蛋白、碱性成纤维生长因子、血管内皮生长因子、干细胞生长因子、层粘连蛋白、表皮生长因子、非必须氨基酸和二甲双胍盐酸盐混合，即可得到内皮细胞培养基。
[1]CN201510473860.1一种内皮细胞培养基及内皮细胞的培养方法
1
CAMHB肉汤是一种用于临床样本或其他样品中需氧微生物快速增菌培养的培养基。需氧生物是指只能在氧充足的环境中生长繁殖的生物。它们需要从大气中获取充足的游离氧来分解有机物并获得能量。
该肉汤的成分包括牛肉浸粉、酸水解酪蛋白、可溶性淀粉、氯化钙等，pH值为7.3±0.1。
使用方法是取22.0克CAMHB肉汤加热溶解于1000毫升蒸馏水中，分装后进行高压灭菌，备用。
CAMHB肉汤是一种阳离子调节肉汤（cation-adjusted Mueller-Hinton broth），是药敏试验中推荐的培养基。它具有以下特点：①显示良好的药敏试验批间重复性；②对某些抑制物的抑制作用较小；③已积累了大量的药敏试验数据和经验；④可以支持绝大多数非苛养病原菌的生长，添加特定补充物后也可以支持苛养菌的生长。
粘杆菌素（多粘菌素E）是一种可以有效治疗多种革兰阴性菌感染的药物。然而，由于其肾毒性和神经系统毒性较大，一度被弃用，因此目前粘杆菌素耐药现象较为罕见。传统观点认为粘杆菌素耐药主要通过细菌染色体介导，在菌株间垂直传递。
然而，鲍曼不动杆菌或铜绿假单胞菌等多药耐药革兰阴性菌的感染往往危及病人生命，快速准确地分析其对粘杆菌素的敏感性可以有效辅助治疗，挽救患者生命。因此，建立一种有效的粘杆菌素耐药快速检测方法对应对可能出现的“无药可救”的多药耐药革兰阴性菌感染紧迫局面至关重要。
目前，美国临床实验室标准化协会（Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI）和欧盟药敏试验委员会（The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing EUCAST）推荐的粘杆菌素药敏试验标准方法是微量肉汤稀释法（Broth Microdilution Method BMD）。
然而，该方法耗时且需要细菌经过纯化培养后再培养16-24小时才能得到药敏试验结果。纸片扩散法和E-test法同样需要16-24小时，且其检测原理基于药物在琼脂糖中的扩散。由于粘杆菌素分子在琼脂糖中扩散速率较慢，导致药敏结果出现较高的假阴性率。
因此，需要建立一种新的方法来快速筛查大肠杆菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌的粘杆菌素耐药菌株。
该方法利用主成分分析方法分析暴露组与非暴露组之间拉曼光谱的差异，获取不同浓度的细菌菌液混合试样的拉曼光谱，测定细菌培养液中蛋白质、核酸浓度及细菌数量，以说明引起暴露组与非暴露组光谱差异的物质基础。同时，获取相同数量的暴露组细菌与非暴露组细菌的拉曼光谱，以说明流失的蛋白质和核酸等物质对试样拉曼光谱变化的贡献。
[1] Structural Modification of Lipopolysaccharide Conferred by mcr-1 in Gram-Negative ESKAPE Pathogens[J].Yi-Yun Liu,Courtney E.Chandler,Lisa M.Leung,Christi L.McElheny,Roberta T.Mettus,Robert M.Q.Shanks,Jian-Hua Liu,David R.Goodlett,Robert K.Ernst,Yohei Doi.Antimicrobial Agents and Chemotherapy.2017(6)
[2] Emergence of plasmid-mediated colistin resistance mechanism MCR-1 in animals and human beings in China:a microbiological and molecular biological study[J].Yi-Yun Liu,Yang Wang,Timothy R Walsh,Ling-Xian Yi,Rong Zhang,James Spencer,Yohei Doi,Guobao Tian,Baolei Dong,Xianhui Huang,Lin-Feng Yu,Danxia Gu,Hongwei Ren,Xiaojie Chen,Luchao Lv,Dandan He,Hongwei Zhou,Zisen Liang,Jian-Hua Liu,Jianzhong Shen.The Lancet Infectious Diseases.2016(2)
[3] Colistin,mechanisms and prevalence of resistance[J].Abed Zahedi Bialvaei,Hossein Samadi Kafil.Current Medical Research&Opinion.2015(4)
[4] Isolation and identification of bacteria by means of Raman spectroscopy[J].Susanne Pahlow,Susann Meisel,Dana Cialla-May,Karina Weber,Petra R?sch,Jürgen Popp.Advanced Drug Delivery Reviews.2015
[5] 林钟劝.拉曼光谱技术快速筛查耐粘杆菌素大肠杆菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌的研究[D].中国人民解放军陆军军医大学,2019.
显示全部CAMHB肉汤是一种用于临床样本或其他样品中需氧微生物快速增菌培养的培养基。需氧生物是指只能在氧充足的环境中生长繁殖的生物。它们需要从大气中获取充足的游离氧来分解有机物并获得能量。
该肉汤的成分包括牛肉浸粉、酸水解酪蛋白、可溶性淀粉、氯化钙等，pH值为7.3±0.1。
使用方法是取22.0克CAMHB肉汤加热溶解于1000毫升蒸馏水中，分装后进行高压灭菌，备用。
CAMHB肉汤是一种阳离子调节肉汤（cation-adjusted Mueller-Hinton broth），是药敏试验中推荐的培养基。它具有以下特点：①显示良好的药敏试验批间重复性；②对某些抑制物的抑制作用较小；③已积累了大量的药敏试验数据和经验；④可以支持绝大多数非苛养病原菌的生长，添加特定补充物后也可以支持苛养菌的生长。
粘杆菌素（多粘菌素E）是一种可以有效治疗多种革兰阴性菌感染的药物。然而，由于其肾毒性和神经系统毒性较大，一度被弃用，因此目前粘杆菌素耐药现象较为罕见。传统观点认为粘杆菌素耐药主要通过细菌染色体介导，在菌株间垂直传递。
然而，鲍曼不动杆菌或铜绿假单胞菌等多药耐药革兰阴性菌的感染往往危及病人生命，快速准确地分析其对粘杆菌素的敏感性可以有效辅助治疗，挽救患者生命。因此，建立一种有效的粘杆菌素耐药快速检测方法对应对可能出现的“无药可救”的多药耐药革兰阴性菌感染紧迫局面至关重要。
目前，美国临床实验室标准化协会（Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI）和欧盟药敏试验委员会（The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing EUCAST）推荐的粘杆菌素药敏试验标准方法是微量肉汤稀释法（Broth Microdilution Method BMD）。
然而，该方法耗时且需要细菌经过纯化培养后再培养16-24小时才能得到药敏试验结果。纸片扩散法和E-test法同样需要16-24小时，且其检测原理基于药物在琼脂糖中的扩散。由于粘杆菌素分子在琼脂糖中扩散速率较慢，导致药敏结果出现较高的假阴性率。
因此，需要建立一种新的方法来快速筛查大肠杆菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌的粘杆菌素耐药菌株。
该方法利用主成分分析方法分析暴露组与非暴露组之间拉曼光谱的差异，获取不同浓度的细菌菌液混合试样的拉曼光谱，测定细菌培养液中蛋白质、核酸浓度及细菌数量，以说明引起暴露组与非暴露组光谱差异的物质基础。同时，获取相同数量的暴露组细菌与非暴露组细菌的拉曼光谱，以说明流失的蛋白质和核酸等物质对试样拉曼光谱变化的贡献。
[1] Structural Modification of Lipopolysaccharide Conferred by mcr-1 in Gram-Negative ESKAPE Pathogens[J].Yi-Yun Liu,Courtney E.Chandler,Lisa M.Leung,Christi L.McElheny,Roberta T.Mettus,Robert M.Q.Shanks,Jian-Hua Liu,David R.Goodlett,Robert K.Ernst,Yohei Doi.Antimicrobial Agents and Chemotherapy.2017(6)
[2] Emergence of plasmid-mediated colistin resistance mechanism MCR-1 in animals and human beings in China:a microbiological and molecular biological study[J].Yi-Yun Liu,Yang Wang,Timothy R Walsh,Ling-Xian Yi,Rong Zhang,James Spencer,Yohei Doi,Guobao Tian,Baolei Dong,Xianhui Huang,Lin-Feng Yu,Danxia Gu,Hongwei Ren,Xiaojie Chen,Luchao Lv,Dandan He,Hongwei Zhou,Zisen Liang,Jian-Hua Liu,Jianzhong Shen.The Lancet Infectious Diseases.2016(2)
[3] Colistin,mechanisms and prevalence of resistance[J].Abed Zahedi Bialvaei,Hossein Samadi Kafil.Current Medical Research&Opinion.2015(4)
[4] Isolation and identification of bacteria by means of Raman spectroscopy[J].Susanne Pahlow,Susann Meisel,Dana Cialla-May,Karina Weber,Petra R?sch,Jürgen Popp.Advanced Drug Delivery Reviews.2015
[5] 林钟劝.拉曼光谱技术快速筛查耐粘杆菌素大肠杆菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌的研究[D].中国人民解放军陆军军医大学,2019.
1
活性深绿KE-4BD，又称活性绿19，是一种偶氮染料。多篇文献报道了多种菌种对其进行降解，如双酶梭状芽孢杆菌、希瓦氏菌和疣孢漆斑菌。
一项专利（CN201911003168.7）介绍了一株双酶梭状芽孢杆菌ST12，该菌株可用于降解偶氮染料活性黑5、直接蓝2B、刚果红、甲基橙、直接黑38、活性深绿KE-4BD和酸性橙7。该双酶梭状芽孢杆菌ST12能高效降解不同结构的偶氮染料，并且能耐受高浓度的染料，适应广泛的环境因子变化范围。这为偶氮染料的生物降解提供了潜在的菌株来源，也为印染废水的工业化处理和染料排放后的自我降解和修复提供了研究依据。
另一项专利（CN201911000897.7）介绍了一株希瓦氏菌ST2，该菌株可用于降解偶氮染料活性黑5、直接蓝2B、刚果红、甲基橙、活性深绿KE-4BD和酸性橙7。希瓦氏菌ST2能高效降解不同结构的偶氮染料，并且能耐受高浓度的染料，适应广泛的环境因子变化范围。这为偶氮染料的生物降解提供了潜在的菌株来源，也为印染废水的工业化处理和染料排放后的自我降解和修复提供了研究依据。
另外，一项专利（CN201510411623.2）公开了一种产漆酶真菌菌株的分离优化方法及应用。该方法利用愈创木酚与漆酶发生变色反应筛选产漆酶真菌，通过形态观察和rDNA-ITS序列分析鉴定出疣孢漆斑菌。该疣孢漆斑菌是高产漆酶的菌株，经优化后，其产漆酶酶活达到316U/mL，高于之前报道的疣孢漆斑菌NF-05的酶活45.08U/mL。疣孢漆斑菌对九种活性染料的脱色率和酶活远高于踝节菌属、曲霉菌属和小丛壳菌。通过单因素实验和均匀设计确定了疣孢漆斑菌产漆酶的最优条件。利用HPLC、TLC和红外光谱证实了疣孢漆斑菌对活性深绿KE-4BD的降解。从红豆杉根际分离的真菌在工业污水治理、绿色交通、环境保护和可持续发展方面具有广阔的应用前景和潜力。
[1] CN201911003168.7一株双酶梭状芽孢杆菌ST12及其在偶氮染料降解中的应用
[2] CN201911000897.7一株希瓦氏菌ST2及其在偶氮染料降解中的应用
[3] CN201510411623.2一种产漆酶真菌菌株的分离优化方法及应用
显示全部活性深绿KE-4BD，又称活性绿19，是一种偶氮染料。多篇文献报道了多种菌种对其进行降解，如双酶梭状芽孢杆菌、希瓦氏菌和疣孢漆斑菌。
一项专利（CN201911003168.7）介绍了一株双酶梭状芽孢杆菌ST12，该菌株可用于降解偶氮染料活性黑5、直接蓝2B、刚果红、甲基橙、直接黑38、活性深绿KE-4BD和酸性橙7。该双酶梭状芽孢杆菌ST12能高效降解不同结构的偶氮染料，并且能耐受高浓度的染料，适应广泛的环境因子变化范围。这为偶氮染料的生物降解提供了潜在的菌株来源，也为印染废水的工业化处理和染料排放后的自我降解和修复提供了研究依据。
另一项专利（CN201911000897.7）介绍了一株希瓦氏菌ST2，该菌株可用于降解偶氮染料活性黑5、直接蓝2B、刚果红、甲基橙、活性深绿KE-4BD和酸性橙7。希瓦氏菌ST2能高效降解不同结构的偶氮染料，并且能耐受高浓度的染料，适应广泛的环境因子变化范围。这为偶氮染料的生物降解提供了潜在的菌株来源，也为印染废水的工业化处理和染料排放后的自我降解和修复提供了研究依据。
另外，一项专利（CN201510411623.2）公开了一种产漆酶真菌菌株的分离优化方法及应用。该方法利用愈创木酚与漆酶发生变色反应筛选产漆酶真菌，通过形态观察和rDNA-ITS序列分析鉴定出疣孢漆斑菌。该疣孢漆斑菌是高产漆酶的菌株，经优化后，其产漆酶酶活达到316U/mL，高于之前报道的疣孢漆斑菌NF-05的酶活45.08U/mL。疣孢漆斑菌对九种活性染料的脱色率和酶活远高于踝节菌属、曲霉菌属和小丛壳菌。通过单因素实验和均匀设计确定了疣孢漆斑菌产漆酶的最优条件。利用HPLC、TLC和红外光谱证实了疣孢漆斑菌对活性深绿KE-4BD的降解。从红豆杉根际分离的真菌在工业污水治理、绿色交通、环境保护和可持续发展方面具有广阔的应用前景和潜力。
[1] CN201911003168.7一株双酶梭状芽孢杆菌ST12及其在偶氮染料降解中的应用
[2] CN201911000897.7一株希瓦氏菌ST2及其在偶氮染料降解中的应用
[3] CN201510411623.2一种产漆酶真菌菌株的分离优化方法及应用
1
蛋白酶抑制剂(PIs)是一种能够干扰HIV蛋白酶的酶的药物，从而阻止艾滋病病毒在其生命周期后期的复制。这种药物能够使艾滋病病毒的结构紊乱并且不易传播。
沙奎那韦，又名双喹纳韦、沙奎那维或沙喹那韦，是第一个上市治疗艾滋病的蛋白酶抑制剂。
沙奎那韦是一种白色结晶性固体，其在甲醇中的旋光度为[α]D-55.9°(C=0.5)。在21℃时，它在水中的溶解度为0.22g/100ml。
沙奎那韦可与其他抗逆转录病毒药物联合使用，用于治疗成人HIV-1感染。
成人及16岁以上儿童推荐在餐后2小时内每天三次口服沙奎那韦600毫克，与核苷类似物联合使用。联合使用其他抗逆转录病毒药物时，应根据处方手册调整剂量。与其他蛋白酶抑制剂合用时，应减少沙奎那韦的用量(详见药物相互作用)。与其他蛋白酶抑制剂一样，强烈建议按医嘱服药。
在联合用药时，如果出现与沙奎那韦相关的毒性反应，应停用沙奎那韦。不推荐使用少于每日600毫克三次的沙奎那韦剂量。由于其他抗逆转录病毒药物可能增加沙奎那韦的血浆浓度，联合使用时应减少沙奎那韦的用量(详见药物相互作用)。
对于肝/肾功能受损的患者，轻度和中度受损的患者无需调整剂量。严重肝/肾功能受损的患者应慎用(详见警告)。
在临床试验中，沙奎那韦与扎西他滨和/或齐多夫定联合用药时，并不增加或改变这两种药物的毒性。
临床试验中，患者对沙奎那韦出现最多的不良事件包括腹泻、腹部不适和恶心(包括与齐多夫定和扎西他滨相关的已知毒性反应)。
以下是在一项关键性研究中出现的与沙奎那韦间接相关的不良事件的发生率(轻、中、重度)超过2%的事件：
皮肤及其附属物：皮疹(5%)、瘙痒(3%)。
中枢和外周神经系统：头痛(8%)、周围神经病(8%)、四肢麻木。
通过对经治疗和未经治疗的HIV-1感染者进行沙奎那韦与ddc和/或AZT联合治疗后的临床转归评估，可以得出以下结论。
在NV14256研究中，先用AZT治疗病人(CD4细胞在50与300/立方毫米间)，然后用沙奎那韦联合ddc治疗，与单用ddc比较，联合治疗延长了第一次AIDS患者出现合并症状或死亡的时间。
联合治疗可以使AIDS合并症或垂危状态的危险性减少53%，死亡率减少72%。这与治疗18个月后AIDS合并症或死亡率由29.4%降至16.0%是相符的;同样，单纯死亡率由8.6%降至4.1%。在3个治疗组中，平均疗程为11~13个月，平均随访时间是17个月。
显示全部蛋白酶抑制剂(PIs)是一种能够干扰HIV蛋白酶的酶的药物，从而阻止艾滋病病毒在其生命周期后期的复制。这种药物能够使艾滋病病毒的结构紊乱并且不易传播。
沙奎那韦，又名双喹纳韦、沙奎那维或沙喹那韦，是第一个上市治疗艾滋病的蛋白酶抑制剂。
沙奎那韦是一种白色结晶性固体，其在甲醇中的旋光度为[α]D-55.9°(C=0.5)。在21℃时，它在水中的溶解度为0.22g/100ml。
沙奎那韦可与其他抗逆转录病毒药物联合使用，用于治疗成人HIV-1感染。
成人及16岁以上儿童推荐在餐后2小时内每天三次口服沙奎那韦600毫克，与核苷类似物联合使用。联合使用其他抗逆转录病毒药物时，应根据处方手册调整剂量。与其他蛋白酶抑制剂合用时，应减少沙奎那韦的用量(详见药物相互作用)。与其他蛋白酶抑制剂一样，强烈建议按医嘱服药。
在联合用药时，如果出现与沙奎那韦相关的毒性反应，应停用沙奎那韦。不推荐使用少于每日600毫克三次的沙奎那韦剂量。由于其他抗逆转录病毒药物可能增加沙奎那韦的血浆浓度，联合使用时应减少沙奎那韦的用量(详见药物相互作用)。
对于肝/肾功能受损的患者，轻度和中度受损的患者无需调整剂量。严重肝/肾功能受损的患者应慎用(详见警告)。
在临床试验中，沙奎那韦与扎西他滨和/或齐多夫定联合用药时，并不增加或改变这两种药物的毒性。
临床试验中，患者对沙奎那韦出现最多的不良事件包括腹泻、腹部不适和恶心(包括与齐多夫定和扎西他滨相关的已知毒性反应)。
以下是在一项关键性研究中出现的与沙奎那韦间接相关的不良事件的发生率(轻、中、重度)超过2%的事件：
皮肤及其附属物：皮疹(5%)、瘙痒(3%)。
中枢和外周神经系统：头痛(8%)、周围神经病(8%)、四肢麻木。
通过对经治疗和未经治疗的HIV-1感染者进行沙奎那韦与ddc和/或AZT联合治疗后的临床转归评估，可以得出以下结论。
在NV14256研究中，先用AZT治疗病人(CD4细胞在50与300/立方毫米间)，然后用沙奎那韦联合ddc治疗，与单用ddc比较，联合治疗延长了第一次AIDS患者出现合并症状或死亡的时间。
联合治疗可以使AIDS合并症或垂危状态的危险性减少53%，死亡率减少72%。这与治疗18个月后AIDS合并症或死亡率由29.4%降至16.0%是相符的;同样，单纯死亡率由8.6%降至4.1%。在3个治疗组中，平均疗程为11~13个月，平均随访时间是17个月。
1
支原体琼脂培养基是一种用于临床解脲脲原体和支原体分离培养的培养基。它由适合解脲和人型支原体生长的营养琼脂培养基和平皿组成。
支原体琼脂培养基的成分包括琼脂粉、纯化水、尿素、酪蛋白胨、大豆蛋白胨、精氨酸和葡萄糖。
支原体是一类没有细胞壁的微生物，可以通过滤菌器，并且可以在人工培养基上增殖。支原体培养是将支原体接种到培养基中，并观察其生长情况以判断是否感染支原体。
支原体的营养要求较高，除了基础营养物质外，还需要加入人或动物血清以提供胆固醇和酵母。支原体的最适pH范围为7.8～8.0，低于7.0会导致死亡，但解脲支原体的最适pH范围为6.0～6.5。
分离培养是支原体实验室诊断的唯一方法。大多数支原体是兼性厌氧菌，在初次分离时加入5%CO2可以促进其生长。支原体生长缓慢，在琼脂含量较少的固体培养基上孵育2～3天后，会出现典型的圆形菌落，中心较厚，向下长入培养基，周边为一层薄的透明颗粒区。解脲支原体在含尿素和以硫酸锰为产氨指标的完全诊断培养基上生长良好，形成具有特征性的深棕色菌落。
为了建立牛支原体PCR检测方法并进行临床应用研究，我们采集了病牛的肺脏、肝脏和胸腔渗出物等样品，在支原体肉汤培养基上接种样品，并在20%马血清琼脂培养基上进行培养。经过5～7天的观察判定，我们可以确定是否存在支原体感染。
在肉汤培养基中，支原体生长初期呈轻微浑浊或呈白色点状、丝状生长，后来逐渐均匀浑浊，半透明稍带乳光，不产生菌膜或沉淀，也没有颗粒悬浮。
在20%马血清琼脂培养基上，支原体生长较慢，形成极小的水滴状圆形微细菌落，中央有乳头状突起。
通过姬姆萨染色和显微镜观察，我们发现支原体菌落呈多形态，其中以球点状最常见，大小在125～250 nm之间。我们还对病牛肺部实变组织进行了DNA提取，并以牛支原体、无乳支原体和丝状支原体为阳性对照，利用支原体通用引物扩增其16SrRNA序列，建立了扩增16S rRNA序列进行支原体检测的方法。经过测序并与GenBank公布的支原体16S rRNA基因序列进行比较，发现它们的同源性在97-100%之间。
支原体的培养困难，生长周期长，营养条件苛刻，因此不能作为早期、快速的检测方法。相比之下，PCR技术具有高灵敏性，可以检测样品中微量级的DNA，因此适用于早期检测。
我们设计了4对特异引物，用于快速检测导致牛支原体病的丝状支原体丝状亚种、牛支原体、无乳支原体和绵羊肺炎支原体。通过建立多重PCR方法，我们达到了快速检测的目的。该方法具有特异性强、敏感性高的特点，为临床检测提供了强有力的技术支持，为疑似支原体感染病例的鉴别诊断提供了有效的快速诊断方法。
[1] Mastitis in a 7-week old calf caused by Mycoplasma bovigenitalium[J]. J.-P.Roy, D.Francoz, O.Labrecque. The Veterinary Journal. 2007(3)
[2] The use of real-time PCR in the diagnosis and monitoring of Mycoplasma haemofelis copy number in a naturally infected cat[J]. J.A.Braddock, S.Tasker, R.Malik. Journal of Feline Medicine and Surgery. 2004(3)
[3] Development and Performance of a Microwell-Plate-Based Polymerase Chain Reaction Assay for Mycoplasma genitalium[J]. Susan M.Dutro, Jennifer K.Hebb, Cresley A.Garin, James P.Hughes, George E.Kenny, Patricia A.Totten. Sexually Transmitted Diseases. 2003(10)
[4] Surrogate marker for predicting the virus binding of urogenital cancer cells during adenovirus-based gene therapy[J]. Yun-Jun Lai, Rey-Chen Pong, John D.McConnell, Jer-Tsong Hsieh. BioTechniques. 2003(1)
[5] 李彦芹.牛支原体PCR检测方法的建立及临床应用[D].山东农业大学,2009. 显示全部
支原体琼脂培养基是一种用于临床解脲脲原体和支原体分离培养的培养基。它由适合解脲和人型支原体生长的营养琼脂培养基和平皿组成。
支原体琼脂培养基的成分包括琼脂粉、纯化水、尿素、酪蛋白胨、大豆蛋白胨、精氨酸和葡萄糖。
支原体是一类没有细胞壁的微生物，可以通过滤菌器，并且可以在人工培养基上增殖。支原体培养是将支原体接种到培养基中，并观察其生长情况以判断是否感染支原体。
支原体的营养要求较高，除了基础营养物质外，还需要加入人或动物血清以提供胆固醇和酵母。支原体的最适pH范围为7.8～8.0，低于7.0会导致死亡，但解脲支原体的最适pH范围为6.0～6.5。
分离培养是支原体实验室诊断的唯一方法。大多数支原体是兼性厌氧菌，在初次分离时加入5%CO2可以促进其生长。支原体生长缓慢，在琼脂含量较少的固体培养基上孵育2～3天后，会出现典型的圆形菌落，中心较厚，向下长入培养基，周边为一层薄的透明颗粒区。解脲支原体在含尿素和以硫酸锰为产氨指标的完全诊断培养基上生长良好，形成具有特征性的深棕色菌落。
为了建立牛支原体PCR检测方法并进行临床应用研究，我们采集了病牛的肺脏、肝脏和胸腔渗出物等样品，在支原体肉汤培养基上接种样品，并在20%马血清琼脂培养基上进行培养。经过5～7天的观察判定，我们可以确定是否存在支原体感染。
在肉汤培养基中，支原体生长初期呈轻微浑浊或呈白色点状、丝状生长，后来逐渐均匀浑浊，半透明稍带乳光，不产生菌膜或沉淀，也没有颗粒悬浮。
在20%马血清琼脂培养基上，支原体生长较慢，形成极小的水滴状圆形微细菌落，中央有乳头状突起。
通过姬姆萨染色和显微镜观察，我们发现支原体菌落呈多形态，其中以球点状最常见，大小在125～250 nm之间。我们还对病牛肺部实变组织进行了DNA提取，并以牛支原体、无乳支原体和丝状支原体为阳性对照，利用支原体通用引物扩增其16SrRNA序列，建立了扩增16S rRNA序列进行支原体检测的方法。经过测序并与GenBank公布的支原体16S rRNA基因序列进行比较，发现它们的同源性在97-100%之间。
支原体的培养困难，生长周期长，营养条件苛刻，因此不能作为早期、快速的检测方法。相比之下，PCR技术具有高灵敏性，可以检测样品中微量级的DNA，因此适用于早期检测。
我们设计了4对特异引物，用于快速检测导致牛支原体病的丝状支原体丝状亚种、牛支原体、无乳支原体和绵羊肺炎支原体。通过建立多重PCR方法，我们达到了快速检测的目的。该方法具有特异性强、敏感性高的特点，为临床检测提供了强有力的技术支持，为疑似支原体感染病例的鉴别诊断提供了有效的快速诊断方法。
[1] Mastitis in a 7-week old calf caused by Mycoplasma bovigenitalium[J]. J.-P.Roy, D.Francoz, O.Labrecque. The Veterinary Journal. 2007(3)
[2] The use of real-time PCR in the diagnosis and monitoring of Mycoplasma haemofelis copy number in a naturally infected cat[J]. J.A.Braddock, S.Tasker, R.Malik. Journal of Feline Medicine and Surgery. 2004(3)
[3] Development and Performance of a Microwell-Plate-Based Polymerase Chain Reaction Assay for Mycoplasma genitalium[J]. Susan M.Dutro, Jennifer K.Hebb, Cresley A.Garin, James P.Hughes, George E.Kenny, Patricia A.Totten. Sexually Transmitted Diseases. 2003(10)
[4] Surrogate marker for predicting the virus binding of urogenital cancer cells during adenovirus-based gene therapy[J]. Yun-Jun Lai, Rey-Chen Pong, John D.McConnell, Jer-Tsong Hsieh. BioTechniques. 2003(1)
[5] 李彦芹.牛支原体PCR检测方法的建立及临床应用[D].山东农业大学,2009.
1
夏秋季温度高，降雨频繁，田间湿度大，是病害发生和危害最严重的时期，常常是多种病害同时发生。选择广谱高效杀菌剂是快速控制病害最有效的措施。嘧菌酯自上市以来，由于其治病效果好，持效期长，复配性好，价格便宜，深受农民朋友欢迎，成为目前销量最大的杀菌剂。今天就给大家介绍几个嘧菌酯的经典配方，对病害具有预防、治疗和铲除的作用。
嘧菌酯是由捷利康（现先正达）公司开发的一种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，于1997年上市，商品名“阿米西达”。该药剂杀菌谱广，内吸传导性好，渗透性强，对几乎所有真菌病害都有很好的防治效果，尤其对白粉病、锈病、颖枯病、网斑病、霜霉病、稻瘟病等多种病害防治效果突出。不仅可用于茎叶喷雾、种子处理、灌根和蘸根，还可进行土壤处理，成为全球销量最大的杀菌剂之一。
（1）精甲·咯·嘧菌：该配方由精甲霜灵、咯菌腈和嘧菌酯三种药剂复配而成，是防治根腐病、纹枯病、全蚀病、猝倒病、立枯病等多种土传和种传病害的经典配方。
（2）苯甲·嘧菌酯：该配方由苯醚甲环唑和嘧菌酯复配而成，商品名“阿米妙收”。是防治真菌性病害的经典配方，对多种病害具有很好的预防、治疗和铲除作用。
（3）吡萘·嘧菌酯：该配方由吡唑萘菌胺和嘧菌酯复配而成，商品名“绿妃”。对白粉病、靶斑病、叶斑病等担子菌亚门真菌有特效。
（4）烯酰·嘧菌酯：该配方由烯酰吗啉和嘧菌酯复配而成，具有保护、治疗和铲除三大功能。对霜霉病、晚疫病、疫病、猝倒病、黑胫病等多种病害有特效。
（5）丙环·嘧菌酯：该配方由丙环唑和嘧菌酯复配而成，具有保护和治疗双重功效。主要用于防治白腐病、炭疽病、霜霉病、纹枯病、稻曲病、大小叶斑病等病害。
这些配方几乎可高效防治所有真菌性病害，并对病害具有预防、治疗和铲除作用，一般只需喷施2～3遍，就可治愈病害。
显示全部夏秋季温度高，降雨频繁，田间湿度大，是病害发生和危害最严重的时期，常常是多种病害同时发生。选择广谱高效杀菌剂是快速控制病害最有效的措施。嘧菌酯自上市以来，由于其治病效果好，持效期长，复配性好，价格便宜，深受农民朋友欢迎，成为目前销量最大的杀菌剂。今天就给大家介绍几个嘧菌酯的经典配方，对病害具有预防、治疗和铲除的作用。
嘧菌酯是由捷利康（现先正达）公司开发的一种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂，于1997年上市，商品名“阿米西达”。该药剂杀菌谱广，内吸传导性好，渗透性强，对几乎所有真菌病害都有很好的防治效果，尤其对白粉病、锈病、颖枯病、网斑病、霜霉病、稻瘟病等多种病害防治效果突出。不仅可用于茎叶喷雾、种子处理、灌根和蘸根，还可进行土壤处理，成为全球销量最大的杀菌剂之一。
（1）精甲·咯·嘧菌：该配方由精甲霜灵、咯菌腈和嘧菌酯三种药剂复配而成，是防治根腐病、纹枯病、全蚀病、猝倒病、立枯病等多种土传和种传病害的经典配方。
（2）苯甲·嘧菌酯：该配方由苯醚甲环唑和嘧菌酯复配而成，商品名“阿米妙收”。是防治真菌性病害的经典配方，对多种病害具有很好的预防、治疗和铲除作用。
（3）吡萘·嘧菌酯：该配方由吡唑萘菌胺和嘧菌酯复配而成，商品名“绿妃”。对白粉病、靶斑病、叶斑病等担子菌亚门真菌有特效。
（4）烯酰·嘧菌酯：该配方由烯酰吗啉和嘧菌酯复配而成，具有保护、治疗和铲除三大功能。对霜霉病、晚疫病、疫病、猝倒病、黑胫病等多种病害有特效。
（5）丙环·嘧菌酯：该配方由丙环唑和嘧菌酯复配而成，具有保护和治疗双重功效。主要用于防治白腐病、炭疽病、霜霉病、纹枯病、稻曲病、大小叶斑病等病害。
这些配方几乎可高效防治所有真菌性病害，并对病害具有预防、治疗和铲除作用，一般只需喷施2～3遍，就可治愈病害。
1
头孢克肟（Cefixime）是一种抗生素，用于治疗多种细菌感染，例如中耳炎、链球菌性咽炎、肺炎、泌尿道感染、淋病和莱姆病。治疗淋病时通常只需口服一剂。在美国，本品是治疗淋病的二线用药，一线用药是头孢曲松（英语：ceftriaxone）。本品的给药方式为口服。
头孢克肟对链球菌属（肠球菌除外）、肺炎球菌、淋球菌、卡他布兰汉球菌、大肠杆菌、克雷伯杆菌属、沙雷菌属、变形杆菌属，流感杆菌中引起的以下感染有效：
1、慢性支气管炎急性发作、急性支气管炎并发细菌感染、支气管扩张合并感染、肺炎；
2、肾盂肾炎、膀胱炎、淋球菌性尿道炎；
3、急性胆道系统细菌性感染（胆囊炎、胆管炎）；
4、猩红热；
5、中耳炎、鼻窦炎。
头孢克肟为口服第三代头孢菌素，抗菌谱广，对部分革兰氏阳性菌及阴性菌均具有抗菌活性，特别是对革兰氏阳性菌中的链球菌（肠球菌除外）、肺炎球菌，革兰氏阴性菌中的淋球菌、布兰汉氏球菌、大肠菌、克雷伯氏属、沙雷氏属、变形杆菌属、流感杆菌等有较强的抗菌作用，其作用机制为阻止细菌细胞壁的合成，其作用点因细菌的种类而异，与青霉素结合蛋白（PBP）中PBP1(1a,1b,1c)以及PBP3有较高亲和性。本品对各种细菌产生的β-内酰胺酶具有较强的稳定性。
生殖毒性：SD大鼠在妊娠前和妊娠初期口服给药100～1000mg/kg，在器官形成期、围产期、哺乳期口服给药320～3200 mg/kg，对大鼠生育能力未见影响，未出现致畸作用，新生幼鼠的生长、发育和生殖能力也未发现异常。
常见的副作用为腹泻、腹痛和有恶心感，可能的严重副作用则为出现过敏反应和引发伪膜性结肠炎。若患者曾有严重青霉素过敏则不建议使用；但用于怀孕患者应该是安全的。本品是第三代的头孢菌素类药物，药理机转是借由妨碍细菌的细胞壁生成，使细菌死亡。
显示全部头孢克肟（Cefixime）是一种抗生素，用于治疗多种细菌感染，例如中耳炎、链球菌性咽炎、肺炎、泌尿道感染、淋病和莱姆病。治疗淋病时通常只需口服一剂。在美国，本品是治疗淋病的二线用药，一线用药是头孢曲松（英语：ceftriaxone）。本品的给药方式为口服。
头孢克肟对链球菌属（肠球菌除外）、肺炎球菌、淋球菌、卡他布兰汉球菌、大肠杆菌、克雷伯杆菌属、沙雷菌属、变形杆菌属，流感杆菌中引起的以下感染有效：
1、慢性支气管炎急性发作、急性支气管炎并发细菌感染、支气管扩张合并感染、肺炎；
2、肾盂肾炎、膀胱炎、淋球菌性尿道炎；
3、急性胆道系统细菌性感染（胆囊炎、胆管炎）；
4、猩红热；
5、中耳炎、鼻窦炎。
头孢克肟为口服第三代头孢菌素，抗菌谱广，对部分革兰氏阳性菌及阴性菌均具有抗菌活性，特别是对革兰氏阳性菌中的链球菌（肠球菌除外）、肺炎球菌，革兰氏阴性菌中的淋球菌、布兰汉氏球菌、大肠菌、克雷伯氏属、沙雷氏属、变形杆菌属、流感杆菌等有较强的抗菌作用，其作用机制为阻止细菌细胞壁的合成，其作用点因细菌的种类而异，与青霉素结合蛋白（PBP）中PBP1(1a,1b,1c)以及PBP3有较高亲和性。本品对各种细菌产生的β-内酰胺酶具有较强的稳定性。
生殖毒性：SD大鼠在妊娠前和妊娠初期口服给药100～1000mg/kg，在器官形成期、围产期、哺乳期口服给药320～3200 mg/kg，对大鼠生育能力未见影响，未出现致畸作用，新生幼鼠的生长、发育和生殖能力也未发现异常。
常见的副作用为腹泻、腹痛和有恶心感，可能的严重副作用则为出现过敏反应和引发伪膜性结肠炎。若患者曾有严重青霉素过敏则不建议使用；但用于怀孕患者应该是安全的。本品是第三代的头孢菌素类药物，药理机转是借由妨碍细菌的细胞壁生成，使细菌死亡。
1
最近，一项由沃里克生命科学学院的David Roper教授和弗朗西斯·克里克研究所的Luiz Pedro Carvalho博士共同主导的研究成果在《Nature Communications》子刊《Nature Communications》中发表。该研究揭示了抗生素D-环丝氨酸在分子水平上对微生物疾病的作用方式，为攻克结核病和其他危及生命的微生物疾病提供了新的治疗思路。
结核病和其他微生物感染疾病对人类的生命健康构成了严重威胁。由于细菌感染越来越频繁，抗生素滥用的情况也日益严重，细菌感染已成为医疗保健领域面临的全球性危机。然而，由于新型病菌和病菌耐药性等原因，开发有效而安全的抗生素仍然是医药界的主要研究方向之一。
D-环丝氨酸是一种对多种微生物疾病有效的抗生素药物。然而，由于其副作用较多，常被用作微生物感染疾病的二线治疗药物。
通过系统的研究，研究人员发现D-环丝氨酸与多种病菌的化学作用方式与一般抗生素不同。一般来说，现有的抗生素通过抑制D-丙氨酸消旋酶来阻止病菌细胞壁的形成。然而，D-环丝氨酸不仅可以通过抑制D-丙氨酸消旋酶来抗击细菌，还可以通过抑制另一种维持细菌细胞壁结构所必需的酶--D-丙氨酸-D-丙氨酸连接酶来发挥抑菌作用。
这项研究首次发现了D-环丝氨酸通过抑制D-丙氨酸-D-丙氨酸连接酶来发挥抗生素作用的机制。这一发现为开发新型的抗耐药性抗生素提供了希望。研究人员表示，他们将对D-环丝氨酸进行结构改造，以克服其副作用并增强其药效，从而开发出更优秀的抗耐药性抗生素，为攻克结核病等致命性病菌感染提供新的治疗方案。
Sarah Batson, Cesira de Chiara, Vita Majce, Adrian J. Lloyd. Inhibition of D-Ala: D-Ala ligase through a phosphorylated form of the antibiotic D-cycloserine. Nature Communications, 2017 显示全部
最近，一项由沃里克生命科学学院的David Roper教授和弗朗西斯·克里克研究所的Luiz Pedro Carvalho博士共同主导的研究成果在《Nature Communications》子刊《Nature Communications》中发表。该研究揭示了抗生素D-环丝氨酸在分子水平上对微生物疾病的作用方式，为攻克结核病和其他危及生命的微生物疾病提供了新的治疗思路。
结核病和其他微生物感染疾病对人类的生命健康构成了严重威胁。由于细菌感染越来越频繁，抗生素滥用的情况也日益严重，细菌感染已成为医疗保健领域面临的全球性危机。然而，由于新型病菌和病菌耐药性等原因，开发有效而安全的抗生素仍然是医药界的主要研究方向之一。
D-环丝氨酸是一种对多种微生物疾病有效的抗生素药物。然而，由于其副作用较多，常被用作微生物感染疾病的二线治疗药物。
通过系统的研究，研究人员发现D-环丝氨酸与多种病菌的化学作用方式与一般抗生素不同。一般来说，现有的抗生素通过抑制D-丙氨酸消旋酶来阻止病菌细胞壁的形成。然而，D-环丝氨酸不仅可以通过抑制D-丙氨酸消旋酶来抗击细菌，还可以通过抑制另一种维持细菌细胞壁结构所必需的酶--D-丙氨酸-D-丙氨酸连接酶来发挥抑菌作用。
这项研究首次发现了D-环丝氨酸通过抑制D-丙氨酸-D-丙氨酸连接酶来发挥抗生素作用的机制。这一发现为开发新型的抗耐药性抗生素提供了希望。研究人员表示，他们将对D-环丝氨酸进行结构改造，以克服其副作用并增强其药效，从而开发出更优秀的抗耐药性抗生素，为攻克结核病等致命性病菌感染提供新的治疗方案。
Sarah Batson, Cesira de Chiara, Vita Majce, Adrian J. Lloyd. Inhibition of D-Ala: D-Ala ligase through a phosphorylated form of the antibiotic D-cycloserine. Nature Communications, 2017
1
玫瑰红琼脂培养基是一种用于药品和生物制品中霉菌和酵母菌的计数、分离和培养的培养基。它的成分包括蛋白胨、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、玫瑰红钠、琼脂等。这种培养基的pH值为6.0±0.2，适用于25℃的培养条件。
霉菌是一种真菌，它的菌丝体较发达，没有较大的子实体。霉菌寄生或腐生，具有细胞壁。一些霉菌可以使食品转变为有毒物质，有些霉菌还会在食品中产生霉菌毒素，对人体健康造成危害。因此，对霉菌的检测和控制非常重要。
酵母是一种单细胞微生物，属于高等真菌类。它具有细胞核、细胞膜、细胞壁、线粒体等特征，以及相同的酶和代谢途径。酵母广泛存在于空气、土壤、水和动物体内，可以在有氧或无氧的环境中生存。
玫瑰红琼脂培养基是一种含有蛋白胨、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、玫瑰红钠和琼脂的培养基。蛋白胨提供碳源和氮源，葡萄糖提供能源，磷酸二氢钾作为缓冲剂，硫酸镁提供微量元素，玫瑰红钠作为选择性抑菌剂，琼脂则是培养基的凝固剂。
使用方法：将31.5克玫瑰红琼脂培养基加热溶解于1000毫升蒸馏水中，经高压灭菌处理后备用。
近年来，由胶孢炭疽菌引起的苹果炭疽叶枯病成为我国苹果生产中的重要病害。为了研究该病原菌的致病性和生物学特性，从突变体库中选择了16个突变体菌株进行了研究。
通过苹果果实有伤接种实验，筛选出了6个致病性变化的突变体菌株，并鉴定出了6个致病相关基因。研究结果还明确了不同突变菌株的最佳生长和产孢条件。这为进一步研究该病原菌的致病机制和炭疽叶枯病的治理提供了理论和材料基础。
通过生物信息学分析和蛋白亚细胞定位研究，发现某个基因可能通过调控细胞分裂来影响病菌的产孢。此外，对突变体菌株的生物学形状观察结果也提供了最佳培养方法的参考。
综上所述，玫瑰红琼脂培养基在苹果炭疽叶枯病菌T-DNA插入突变体研究中发挥了重要作用，为进一步了解该病原菌的致病机制和炭疽叶枯病的治理提供了重要的实验手段。 显示全部
玫瑰红琼脂培养基是一种用于药品和生物制品中霉菌和酵母菌的计数、分离和培养的培养基。它的成分包括蛋白胨、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、玫瑰红钠、琼脂等。这种培养基的pH值为6.0±0.2，适用于25℃的培养条件。
霉菌是一种真菌，它的菌丝体较发达，没有较大的子实体。霉菌寄生或腐生，具有细胞壁。一些霉菌可以使食品转变为有毒物质，有些霉菌还会在食品中产生霉菌毒素，对人体健康造成危害。因此，对霉菌的检测和控制非常重要。
酵母是一种单细胞微生物，属于高等真菌类。它具有细胞核、细胞膜、细胞壁、线粒体等特征，以及相同的酶和代谢途径。酵母广泛存在于空气、土壤、水和动物体内，可以在有氧或无氧的环境中生存。
玫瑰红琼脂培养基是一种含有蛋白胨、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、玫瑰红钠和琼脂的培养基。蛋白胨提供碳源和氮源，葡萄糖提供能源，磷酸二氢钾作为缓冲剂，硫酸镁提供微量元素，玫瑰红钠作为选择性抑菌剂，琼脂则是培养基的凝固剂。
使用方法：将31.5克玫瑰红琼脂培养基加热溶解于1000毫升蒸馏水中，经高压灭菌处理后备用。
近年来，由胶孢炭疽菌引起的苹果炭疽叶枯病成为我国苹果生产中的重要病害。为了研究该病原菌的致病性和生物学特性，从突变体库中选择了16个突变体菌株进行了研究。
通过苹果果实有伤接种实验，筛选出了6个致病性变化的突变体菌株，并鉴定出了6个致病相关基因。研究结果还明确了不同突变菌株的最佳生长和产孢条件。这为进一步研究该病原菌的致病机制和炭疽叶枯病的治理提供了理论和材料基础。
通过生物信息学分析和蛋白亚细胞定位研究，发现某个基因可能通过调控细胞分裂来影响病菌的产孢。此外，对突变体菌株的生物学形状观察结果也提供了最佳培养方法的参考。
综上所述，玫瑰红琼脂培养基在苹果炭疽叶枯病菌T-DNA插入突变体研究中发挥了重要作用，为进一步了解该病原菌的致病机制和炭疽叶枯病的治理提供了重要的实验手段。
1
替加环素是一种广谱甘氨酰四环素类抗菌药物，可以有效抵抗G+球菌、G-杆菌、MRSA、ESBLS阳性的肠杆菌属、嗜麦芽窄食单胞菌以及多药耐药的鲍曼不动杆菌。本文将根据替加环素合理用药指南及其临床应用评价细则进行简单总结。
替加环素是一种半合成的四环素类药物，通过在米诺环素9位分子上添加叔丁基甘氨酞胺基团而衍生的一种新型四环素类抗生素。
替加环素的主要机制是能够克服获得性的核糖体保护tet(M)和主动外排tet(A.E)产生耐药性。它对肺炎衣原体和军团菌有杀菌作用，并且具有广谱的抑菌剂作用。此外，替加环素还具有长PAE（持续抑菌效应），对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的PAE分别为4.9小时和3.4～4小时。
替加环素对CYP450没有影响，主要通过胆道/粪便排泄（占59%）和尿液排泄（占33%）。它不会被血液透析所移除。在单剂量100mg给药4小时后，替加环素在胆囊、肺、结肠、滑液和骨骼中的浓度分别为血药浓度的38倍、3.7倍、2.3倍、0.58倍和0.35倍。
替加环素已被批准用于治疗成人复杂的腹腔感染（cIAI）及皮肤软组织感染（cSSTI）。对于成人轻中度社区获得性感染，胆道外复杂性腹腔内感染初始抗菌药物经验治疗方案中推荐使用替加环素单药治疗。然而，对于多重耐药的鲍曼不动杆菌感染，应慎用替加环素，并且治疗应以MIC引导。对于产ESBL感染或嗜麦芽窄食单胞菌感染，目前研究证据有限。
替加环素可以作为经验性治疗的选择，特别适用于老年患者、频繁接受抗生素治疗或长期入住监护室的患者，以及有较大风险感染产ESBL菌或MDR菌的患者。对于严重和复杂MRSA和/或产ESBL感染患者，同时患有肾功能障碍或存在患肾衰竭的风险，替加环素也是一种有效的治疗选择。此外，替加环素还可用于治疗选择异质性万古霉素类中度耐药、万古霉素中度耐药和耐万古霉素的金黄色葡萄球菌感染以及VRE感染。然而，对于广泛耐药的革兰阴性菌感染，不宜单药治疗，应考虑联合治疗。
成人的首剂负荷量为100mg，维持量为50mg q12h。对于儿童，8-11岁的儿童每12小时给予1.2mg/kg，最大剂量为每12小时输注50mg；12-17岁的儿童每12小时给予50mg。对于轻中度肝功能不全患者（Child Pugh分级A和B级），无需调整剂量；重度肝功能损害者（Child Pugh分级C级）应调整为首剂100mg，然后每12小时给予25mg。对于HAP或VAP患者，可增加剂量，维持剂量可达100mg q12h。对于由CRE、CRAB引起的重症感染，可考虑剂量加倍。
显示全部替加环素是一种半合成的四环素类药物，通过在米诺环素9位分子上添加叔丁基甘氨酞胺基团而衍生的一种新型四环素类抗生素。
替加环素的主要机制是能够克服获得性的核糖体保护tet(M)和主动外排tet(A.E)产生耐药性。它对肺炎衣原体和军团菌有杀菌作用，并且具有广谱的抑菌剂作用。此外，替加环素还具有长PAE（持续抑菌效应），对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的PAE分别为4.9小时和3.4～4小时。
替加环素对CYP450没有影响，主要通过胆道/粪便排泄（占59%）和尿液排泄（占33%）。它不会被血液透析所移除。在单剂量100mg给药4小时后，替加环素在胆囊、肺、结肠、滑液和骨骼中的浓度分别为血药浓度的38倍、3.7倍、2.3倍、0.58倍和0.35倍。
替加环素已被批准用于治疗成人复杂的腹腔感染（cIAI）及皮肤软组织感染（cSSTI）。对于成人轻中度社区获得性感染，胆道外复杂性腹腔内感染初始抗菌药物经验治疗方案中推荐使用替加环素单药治疗。然而，对于多重耐药的鲍曼不动杆菌感染，应慎用替加环素，并且治疗应以MIC引导。对于产ESBL感染或嗜麦芽窄食单胞菌感染，目前研究证据有限。
替加环素可以作为经验性治疗的选择，特别适用于老年患者、频繁接受抗生素治疗或长期入住监护室的患者，以及有较大风险感染产ESBL菌或MDR菌的患者。对于严重和复杂MRSA和/或产ESBL感染患者，同时患有肾功能障碍或存在患肾衰竭的风险，替加环素也是一种有效的治疗选择。此外，替加环素还可用于治疗选择异质性万古霉素类中度耐药、万古霉素中度耐药和耐万古霉素的金黄色葡萄球菌感染以及VRE感染。然而，对于广泛耐药的革兰阴性菌感染，不宜单药治疗，应考虑联合治疗。
成人的首剂负荷量为100mg，维持量为50mg q12h。对于儿童，8-11岁的儿童每12小时给予1.2mg/kg，最大剂量为每12小时输注50mg；12-17岁的儿童每12小时给予50mg。对于轻中度肝功能不全患者（Child Pugh分级A和B级），无需调整剂量；重度肝功能损害者（Child Pugh分级C级）应调整为首剂100mg，然后每12小时给予25mg。对于HAP或VAP患者，可增加剂量，维持剂量可达100mg q12h。对于由CRE、CRAB引起的重症感染，可考虑剂量加倍。
关注盖德视界
添加小助手
